Повышенная эффективность вакцинации вирусом осповакцины у старых мышей по сравнению с молодыми

Abstract

Считается, что иммунное старение является причиной низкой эффективности вакцины у пожилых людей.Чтобы преодолеть эту трудность, необходимы исследования стратегий вакцинации и механизмов иммунного ответа на вакцинацию. Анализируя врожденный и адаптивный иммунный ответ на вакцинацию вирусом осповакцины (VACV) у мышей разных возрастных групп, мы обнаружили, что рекрутирование иммунных клеток, выработка цитокинов / хемокинов и контроль репликации вируса в месте внутрикожной вакцинации сохранялись в пожилом возрасте. мышей и были сопоставимы с более молодыми группами. Анализ шейных дренирующих лимфатических узлов (dLN), собранных после вакцинации, показал, что количество В-клеток зародышевого центра и фолликулярных Т-хелперов было одинаковым в разных возрастных группах.Количество VACV-специфических CD8 Т-клеток в селезенке и уровни сывороточных нейтрализующих антител через 1 месяц после вакцинации также были сопоставимы во всех возрастных группах. Однако после интраназального заражения вакцинированных мышей потеря массы тела была ниже, и вирус выводился быстрее у старых мышей, чем у молодых животных. В заключение, вакцинация VACV может вызвать эффективный иммунный ответ и более сильную защиту у пожилых животных. Таким образом, разработку рекомбинантных вакцин на основе VACV против различных инфекционных заболеваний следует рассматривать как стратегию повышения иммуногенности и эффективности вакцины для пожилых людей.

1 Введение

Пожилые люди имеют повышенную восприимчивость к вирусным и бактериальным инфекциям (1), а у людей старше 65 лет около трети смертности связано с инфекциями (2, 3). Профилактическая вакцинация рекомендуется пожилым людям для снижения бремени и тяжести инфекционных заболеваний (4). Однако пожилые люди плохо реагируют на большинство существующих вакцин, включая вакцины против вируса гриппа, пневмококка, гепатита B, столбняка, коклюша и дифтерии (5–10).Поэтому важно искать способы преодолеть этот барьер.

Считается, что сообщаемое снижение приспособленности иммунной системы с возрастом способствует снижению эффективности вакцины у людей и мышей (5, 6, 11, 12). Это снижение влияет как на врожденный, так и на адаптивный иммунитет. Сообщалось о нарушении распознавания микроорганизмов и их компонентов, неадекватной передаче сигналов рецепторами и изменении продукции цитокинов (13). Кроме того, была отмечена дисфункциональность клеток врожденного иммунитета, таких как нейтрофилы, NK-клетки, моноциты, макрофаги и дендритные клетки, в их способности мигрировать, осуществлять фагоцитоз, убивать бактерии и секретировать цитокины (2, 14–16).С возрастом также происходит снижение эффективности многих аспектов адаптивного иммунного ответа. Это включает уменьшение количества наивных Т-клеток, уменьшенный репертуар TCR, нарушение клональной экспансии и генерации функциональных эффекторных Т-клеток и Т-клеток памяти, снижение рекомбинации переключения класса иммуноглобулинов, а также ограниченное разнообразие В-клеток и продукцию антител (7, 11, 17 ).

Вирус осповакцины (VACV), поксвирус дцДНК (18), представляет собой вакцину, используемую для искоренения оспы (19). VACV реплицируется в цитоплазме инфицированных клеток и имеет большой геном, содержащий примерно 200 генов (20).От одной трети до половины этих генов кодируют белки, предназначенные для уклонения от иммунитета (21). Хотя VACV является иммунодепрессивным, вакцинация VACV у людей и мышей приводит к образованию устойчивых, устойчивых антител и Т-клеточной памяти, которая обеспечивает защиту от повторного инфицирования (21-25). Способность VACV генерировать такую ​​мощную гуморальную и клеточную память и его доказанная способность защищать население от инфекционных заболеваний делают его отличной модельной системой для изучения иммунного ответа на вакцинацию.В этом исследовании мы используем мышиную модель внутрикожной вакцинации VACV, которая генерирует защитный иммунитет против повторного инфицирования (26). В этой модели и антитела, и Т-клеточные ответы памяти являются устойчивыми и последовательными и способствуют защите от последующего заражения VACV (27, 28). Хотя VACV интенсивно изучается на множестве моделей, влияние старения на иммунную реакцию и реакцию вакцинации на VACV не исследовано. В этом исследовании мы проанализировали врожденный и адаптивный иммунный ответ на инфекцию VACV и оценили последующую устойчивость к повторной инфекции у трех разных возрастных групп мышей.

2 Материалы и методы

2.1 Животные и дизайн исследования

C57BL / 6. Все животные были приобретены у Charles River и размещены на базе биомедицинских служб Кембриджского университета. Все эксперименты на животных проводились в соответствии с Законом о животных (научные процедуры) 1986 года под PPL 70/8524, выпущенным Министерством внутренних дел Великобритании.

Эксперименты на животных включали внутрикожную (i.d.) вакцинацию и интраназальное (i.n.) заражение (рис.1). Животные в возрасте 7, 22 и 54 недель получали i.d. инъекции 10 ⁴ бляшкообразующих единиц (БОЕ) штамма VACV Western Reserve (WR) или контрольного носителя (0,01% BSA / PBS) в ушные раковины обоих ушей. VACV, используемый для заражения животных, очищали от инфицированных клеток путем осаждения на сахарозной подушке и затем с помощью градиента плотности сахарозы. Инфекционные титры вирусов определяли с помощью анализа бляшек на клетках BSC-1 и замораживали при -70 ° C до использования. Чтобы оценить иммунный ответ во время острой стадии после вакцинации, ткани уха и шейные дренирующие лимфатические узлы (dLN) собирали на день (d) 7 после i.d. инфекция для измерения инфекционных вирусных титров (с помощью анализа бляшек), инфильтрации лейкоцитов (с помощью FACS) и уровней цитокинов / хемокинов (с помощью анализа Luminex). Сыворотка и селезенка были получены через 29 дней после i.d. инъекции для измерения титров нейтрализующих антител против VACV и состава субпопуляций Т-клеток.

групп ( n = 4-5) мышей C57BL / 6 в возрасте 7, 22 и 54 недель. Различные параметры были измерены до и через 7 и 29 дней после внутрикожного (т.е.г) инфицирование 10 ⁴ БОЕ VACV WR, а также последующее интраназальное (i.n.) заражение иммунизированных или наивных мышей ~ 10 ⁷ БОЕ VACV WR.

Для оценки эффективности вакцинации вакцинированных мышей (через 33 дня после инфицирования VACV i.d.) и наивных (невакцинированных) мышей заражали i.n. с ~ 10 ⁷ PFU VACV WR. Ежедневно контролировали массу тела животных. Целые легкие собирали через 12, 24 и 48 часов после заражения для измерения вирусной нагрузки и уровней цитокинов / хемокинов в ткани.

Исходные иммунологические параметры были измерены в крови, селезенке и легких наивных, неинфицированных животных (n = 4).

2.2 Проточная цитометрия

Анализ FACS был проведен для измерения иммунных клеток, присутствующих в ткани уха, цервикальном dLN, крови и селезенках вакцинированных и имитатор вакцинированных животных.

Ушные раковины были собраны через 7 дней после рождения. инфекции, затем разделяли на дорсальный и вентральный слои и оба листочка помещали в 1,5 мл RPMI-1640 (Gibco, Cat.# 21875034) среда, содержащая 750 Ед / мл коллагеназы I (Gibco, Life Technologies, Cat. # 17018-029) и 100 Ед / мл ДНКазы I (Invitrogen, Cat. # 18047-019), с последующей инкубацией в течение 1 часа при 37 ° C на орбитальном шейкере при 1100 об / мин. Суспензии, содержащие переваренные образцы ушей, растирали через клеточный фильтр с размером ячеек 70 мкм, смешивали с 10 мл среды RPMI-1640, содержащей 35% изотонического перколла (Sigma, № по каталогу P1644-500ML), и центрифугировали в течение 10 минут при относительном центрифугировании 940 мл. усилие (rcf) без использования тормоза при 21 ° C.Затем супернатанты удаляли и клетки промывали PBS.

Для получения клеток из селезенки или dLN органы протирали через фильтры для клеток размером 70 мкм и промывали PBS.

Перед окрашиванием приготовленных клеточных суспензий антителами эритроциты (RBC) лизировали с помощью BD Pharm Lyse (BD Biosciences, Cat. # 555899) и дважды промывали. Затем суспензии пропускали через фильтры предварительного разделения 70 мкм (Miltenyi, Cat. № 130-095-823), и клетки подсчитывали с использованием NucleoCounter NC-250 (Chemometec).

Для окрашивания маркеров клеточной поверхности образцы инкубировали с красителем Zombie Fixable Viability (дополнительная таблица 1) и, после одной стадии промывки, очищенными крысиными антителами против CD16 / CD32 мыши (блок мышиного BD Fc) (BD Biosciences , Cat. # 553141) добавляли к суспензии клеток для блокирования неспецифического связывания. Для внутриклеточного окрашивания Bcl-6 и Ki-67 использовали набор буферов для окрашивания Foxp3 / транскрипционного фактора (eBioscience, № по каталогу 00-5523-00). Затем поверхностные или внутриклеточные маркеры окрашивали моноклональными антителами (mAb).Миелоидная панель для поверхностного окрашивания ткани уха включала: CD45, Siglec-F, CD11c, CD11b, Ly6C, Ly6G, а также маркеры дамп-канала (CD3, CD5, CD19, NK1.1). Лимфоидные клетки в ткани уха идентифицировали с использованием mAb к CD45, NK1.1, CD3, CD4, CD8 и декстрамером MHC H-2Kb / TSYKFESV. Для оценки VACV-специфических CD8 Т-клеток в dLN клетки окрашивали mAb к CD45, CD19, CD3, CD8 и декстрамером MHC H-2Kb / TSYKFESV. Панель для идентификации В-клеток зародышевого центра и фолликулярных Т-лимфоцитов-помощников в dLN включала mAb к CD4, CXCR5, PD-1, B220, Bcl-6 и ki-67.Субпопуляции CD4 и CD8 Т-клеток в селезенке определяли окрашиванием mAb к CD45, CD3, CD8, CD4, CD62L и CD44 и декстрамером MHC H-2Kb / TSYKFESV. Все красители и моноклональные антитела, использованные в исследовании, перечислены в Приложении. Таблица 1. После заключительных стадий промывки клетки ресуспендировали в PBS, содержащем 4% параформальдегида, и анализировали с помощью FACS на BD LSRFortessa (BD Biosciences). Стратегии гейтинга приведены в Приложении. Рис. 1-5.

Для анализа Trucount кровь собирали в пробирки Micro K3EDTA (Sarstedt, Cat.№ 41.1395.005) для предотвращения образования сгустков. Затем 50 мкл цельной крови переносили пипеткой на дно пробирок BD Trucount Tubes (BD Biosciences, № по каталогу 340334) с последующей 5-минутной инкубацией с Mouse BD Fc Block. Затем образцы окрашивали mAb к CD45, CD3, CD4, CD8, CD19, NK1.1, CD11b и Ly6G (дополнительная таблица 1). После лизиса эритроцитов и без стадий отмывки абсолютное количество различных популяций лейкоцитов определяли с помощью анализа на BD LSRFortessa. Стратегия стробирования представлена ​​в Приложении.Рис. 6.

2.3 Внутрисосудистое окрашивание

Чтобы отличить лейкоциты, находящиеся в ткани уха, от клеток, расположенных в сосудистой сети, проводили внутрисосудистое окрашивание, как описано (29). Вкратце, за 5 минут до отбраковки мышам внутривенно вливали в хвостовую вену mAb против CD45-BV421 (BioLegend, Cat. # 103134). Затем собирали уши и выделяли клетки, как описано выше в разделе «Проточная цитометрия». Суспензию клеток из ткани уха окрашивали анти-CD45-PE (BioLegend, Cat.# 103106). Лейкоциты крови регистрировались как дважды положительные (CD45-BV421 ⁺ CD45-PE ⁺ ) клетки, тогда как клетки тканевого иммунитета были положительными только для CD45-PE (см. Дополнение на рис. 7).

2.4 Идентификация цитокинов и хемокинов в тканях уха, dNL и легких

Целые уши, dLN или легкие гомогенизировали в 1,5 мл пробирках с плоским дном, содержащих 400 мкл 0,5% BSA / PBS, с использованием гомогенизатора тканей OMNI с твердой пластиковой тканью зонды (OMNI International). Гомогенаты тканей центрифугировали при 10000 rcf в течение 20 мин при 4 ° C, супернатанты получали и хранили при -70 ° C.Наборы предварительно смешанных мультианалитов для мышей Magnetic Luminex были приобретены у R&D Systems для оценки уровней IFNγ, TNFα, IL-1β, IL-4, IL-6, IL-10, IL-33, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL7, CCL20, CXCL1, CXCL2, CXCL5 (LIX) и CXCL10 с использованием анализатора Luminex 200 (Luminex Corporation).

2.5 Измерение вирусной нагрузки в тканях уха и легких

Целые уши и легкие гомогенизировали, как описано выше. Гомогенаты подвергались 3 циклам замораживания-оттаивания-обработки ультразвуком для разрыва клеток и высвобождения вируса.Затем определяли титры инфекционного вируса в образцах уха с помощью анализа бляшек с использованием монослоев клеток BSC-1.

Нагрузку VACV в легких вакцинированных мышей измеряли путем определения числа копий вирусного генома с помощью кПЦР, как описано (30). Число копий генома хорошо коррелировало с измерением инфекционности вируса с помощью анализа бляшек (Дополнение Фиг. 8). Образцы супернатантов гомогенатов легочной ткани получали центрифугированием образцов при 1000 rcf в течение 5 мин с последующим 10-кратным разбавлением супернатантов водой, не содержащей нуклеазы (кат.# AM9930, Амбион). Реакционная смесь для кПЦР в реальном времени включала: 2 мкл матрицы, 10 мкл 2x смеси зондов qPCRBIO (каталожный номер PB20.21-5, PCRBiosystems), 0,8 мкл 10 мкМ гена VACV E9L прямого праймера (CGGCTAAGAGTTGCACATCCA) , 0,8 мкл 10 мкМ обратного праймера E9L (CTCTGCTCCATTTAGTACCGATTCT), 0,4 мкл 10 мкМ зонда E9L (датчик TaqMan MGB — AGGACGTAGAATGATCTTGTA, Applied Biosystems). Объем реакции доводили до 20 мкл водой, свободной от нуклеаз. Плазмида, содержащая ген VACV E9L , служила стандартом и была подарком Брайана М. Уорда, Медицинский центр Университета Рочестера, США.Количественные ПЦР-анализы проводили в системе ПЦР в реальном времени ViiA 7 (Applied Biosystems) со следующим протоколом: этап начальной денатурации при 95 ° C в течение 3 минут, затем 40 циклов денатурации при 95 ° C в течение 5 секунд, отжиг и удлинение при 60 ° C в течение 30 сек.

2.6 Оценка титра нейтрализующих VACV антител в сыворотке

Кровь собирали в пробирки Microvette CB 300 мкл с активатором сгустка (Sarstedt, № по каталогу 16.440.100). Образцы крови оставляли при комнатной температуре на 2 часа для образования сгустка.После центрифугирования при 10000 rcf в течение 5 минут при комнатной температуре сыворотку собирали и хранили при -70 ° C. Титры нейтрализующих антител оценивали с помощью теста нейтрализации уменьшения бляшек, как описано (31). Образцы сыворотки инкубировали при 56 ° C в течение 30 минут для инактивации комплемента, затем готовили двукратные серийные разведения (1:50, 1: 100, 1: 200, 1: 400, 1: 800 и 1: 1600) с использованием 2,5 % фетальной бычьей сыворотки (FBS) / 1% PenStrep / среда DMEM. Разбавленные образцы сыворотки или контрольные образцы (только среда) были смешаны в соотношении 1: 1 со средой, содержащей 3.2 × 10 ² БОЕ / мл VACV WR, очищенного седиментацией в градиенте плотности сахарозы. После 1 ч инкубации при 37 ° C образцы титровали с помощью анализа бляшек и рассчитывали половинные максимальные ингибирующие концентрации (IC50).

2.7 Статистический анализ

SPSS v.25 и GraphPad Prism v.8 использовались для статистического анализа. U-критерий Манна – Уитни применялся для сравнения двух групп животных, а тесты ANOVA с двусторонними повторными измерениями (RM) выполнялись для анализа данных временных рядов.Корреляционный тест Спирмена использовался для анализа взаимосвязи переменных. Значения P <0,05 считались значимыми.

3 Результаты

Использовали три группы (возрастом 7, 22 или 54 недели [wo]) самок мышей C57BL / 6, представляющих молодых взрослых, средних и старых животных. Пятьдесят четыре животных были выбраны для представления пожилой группы на основе их общего внешнего вида (седеющая шерсть, истончение волос) и уровня смертности в колонии (летальность ~ 10% в течение 6-недельного периода, не связанного с экспериментом).Одной из особенностей иммуно-стареющего фенотипа является снижение количества наивных Т-клеток, что коррелирует с увеличением заболеваемости и смертности (32, 33). Примечательно, что у мышей из 54 человек значительно снизилось абсолютное количество клеток CD4 и CD8 в крови и селезенке по сравнению с более молодыми животными (рис. 2А). Это снижение было связано с сокращением наивных субпопуляций клеток CD4 и CD8, в то время как количество эффекторных Т-клеток было увеличено у мышей 54 и 22 по сравнению с группой из 7 человек (рис.2B, Suppl. Рис.5).

Абсолютное количество различных субпопуляций лейкоцитов в крови ( A ) и Т-клеток, выделенных из селезенки ( B ) мышей в возрасте 7, 22 и 54 недель (без инфекции VACV) (по 4 животных в группе ). CM, центральная память; Эфф, эффектор. Значения P определены с помощью теста Манна-Уитни, * = p <0,05.

3.1 Иммунный ответ на внутрикожную инфекцию VACV сохраняется в разных возрастных группах

Внутрикожный (т.е.г) инфицирование VACV приводит к развитию кожных поражений через 5-6 дней (г) после инфицирования, которые обычно заживают в течение 21 дня (26). Используя эту модель инфекции, рекрутирование иммунных клеток, уровни цитокинов / хемокинов и вирусная нагрузка в тканях уха через 7 дней после i.d. Инфекция была проанализирована на трех разных возрастных группах мышей.

FACS-анализ популяций лейкоцитов в инфицированном ухе показал, что ~ 97% представляли клетки, которые проникли в ткань, тогда как иммунные клетки из кровообращения составляли только 3% от общего количества лейкоцитов (Прил.Рис.7). По сравнению с 7- и 22-мя мышами инфицированные ушные ткани 54-х животных показали значительно меньшую инфильтрацию различных популяций лейкоцитов, включая NK, CD4 и CD8 Т-клетки, Ly6C ⁺ (воспалительные) моноциты и CD45 ⁺ CD3 ^— CD5 ^— CD19 ^— NK1.1 ^— Клетки Siglec-F ^— CD11c ⁺ , которые представляют собой смешанную популяцию дендритных клеток и макрофагов (рис. 3А). Присутствие VACV-специфических CD8 Т-лимфоцитов в инфицированной ткани уха мышей из 54 мышей также было снижено по сравнению с другими группами (рис.3Б). Учитывая, что количество CD4 и CD8 Т-клеток у пожилых мышей было уменьшено до заражения (рис. 2), меньшее количество лимфоидных популяций, инфильтрирующих уши, вероятно, отражает снижение доступности Т-клеток в кровообращении.

Ткани уха были собраны через 7 дней после i.d. инфицирование VACV или PBS (псевдоконтроль) от групп из 7, 22 и 54 мышей ( n = 4-5 на группу).Показаны абсолютные количества ( A ) различных субпопуляций лейкоцитов и ( B ) VACV-специфических CD8 Т-клеток, инфильтрирующих ткани уха. DC & MФ, дендритные клетки и макрофаги; Пн, моноциты; Значения p определяли по критерию Манна-Уитни, * = p <0,05. ( C ) Уровни цитокинов / хемокинов, обнаруженные с помощью мультиплексного анализа (Luminex) в тканях уха, представлены как кратное изменение по сравнению с группой, инфицированной 7-wo VACV, которой присвоено значение 1.Показаны средства; Значения p определяли с помощью теста Манна-Уитни, * = p <0,05 между 7 и 54 животными. # = p <0,05 между 22 и 54 мышами. ( D ) Титры VACV в тканях уха через 7 дней после i.d. заражение VACV. ПФУ, бляшкообразователи; NS — несущественно по критерию Манна-Уитни. Эксперимент проводился дважды, и показаны репрезентативные данные одного эксперимента.

Уровни цитокинов и хемокинов, обнаруженные в тканях уха старых животных через 7 дней после i.d. инфекция не сильно отличалась от молодых и средних возрастных групп (рис. 3С). Снижались только уровни IL-10 и CCL5, тогда как концентрации TNFα и IL-6 были увеличены у 54 мышей по сравнению с 7 и 22 животными. Однако амплитуда этих изменений не превышала 2-х кратного. Кроме того, вирусные нагрузки в инфицированных тканях уха были одинаковыми во всех группах (рис. 3D). Следовательно, инфицированная ткань уха была способна реагировать на инфекцию путем производства медиаторов воспаления и контролировать вирусную инфекцию до эквивалентных уровней во всех возрастных группах.Эти данные являются дополнительным доказательством того, что меньшее привлечение клеток в ткань уха у мышей 54 wo, вероятно, было связано с уменьшенной доступностью циркулирующих клеток, а не с изменениями местных ответов в инфицированной ткани. Таким образом, функционально иммунный ответ на i.d. вакцинация VACV сохранялась у 54 мышей, и способность контролировать репликацию VACV в месте инфекции была одинаковой в 7, 22 и 54 группах.

3,2 54-недельные мыши имеют усиленный цитокиновый ответ на внутрикожную инфекцию VACV в дренирующих лимфатических узлах

Для исследования влияния возраста на адаптивный иммунный ответ на вакцинацию VACV, через 7 дней анализировали дренирующие шейные лимфатические узлы (dLN). пост я.d. инфекционное заболевание. Это показало тенденцию к снижению абсолютных количеств VACV-специфических CD8 Т-клеток у мышей из 54 мышей по сравнению с 22 и 7 группами (фиг. 4A). Однако количество B-клеток зародышевого центра (GC) и T-фолликулярных хелперных (Tfh) лимфоцитов существенно не различалось между всеми группами (рис. 4B, C).

групп из 7, 22 и 54 мышей ( n, = 4-5 на группу) i.d. с VACV и через 7 дней после инфицирования собирали dLN. Абсолютное количество ( A ) VACV-специфических CD8 Т-клеток, ( B ) В-клеток зародышевого центра и ( C ) Т-фолликулярных вспомогательных клеток определяли с помощью FACS. GC, зародышевый центр; Tfh, T фолликулярный помощник; NS, несущественная по критерию Манна-Уитни. ( D ) Уровни цитокинов и хемокинов определяли с помощью мультиплексного анализа (Luminex) в цервикальном dLN мышей, обработанных, как описано выше. Показаны медианы; пунктирными линиями обозначен предел чувствительности; Значения p определяли по критерию Манна-Уитни, * = p <0.05. Эксперимент проводился дважды, и показаны репрезентативные данные одного эксперимента.

Затем уровни цитокинов и хемокинов в dLN были измерены через 7 дней после вакцинации. Среди 17 различных оцениваемых молекул были обнаружены IFNγ, IL-33, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL7 и CXCL1 (рис. 4D), а уровни IFNγ, CCL2 и CCL5 были значительно выше у 54-ти животных, чем у более молодых. мышей, а остальные были похожи во всех группах. Таким образом, dLN старых животных хорошо реагировали на вакцинацию VACV, экспрессируя высокие уровни медиаторов воспаления и генерируя соответствующие клеточные адаптивные иммунные ответы.

3,3 вакцинация VACV индуцирует сильный адаптивный иммунный ответ у мышей разного возраста

Затем мы сравнили реакции клеточной и гуморальной памяти, вызванные вакцинацией VACV. Селезенки и образцы крови получали у мышей через 29 дней после вакцинации, 7, 22 и 54 года, а также у имитационно вакцинированных животных. Общее количество CD8 T-клеток селезенки было эквивалентным в трех вакцинированных группах, в то время как абсолютное количество CD4 T-клеток было немного снижено у 54 мышей по сравнению с 7 и 22 группами (рис.5А). Наиболее выраженные изменения в количестве Т-субпопуляций CD8 и CD4 селезенки наблюдались для эффекторных Т-клеток. По сравнению с исходными параметрами до вакцинации, эффекторные CD8 и CD4 Т-лимфоциты значительно увеличились в результате вакцинации для всех групп мышей (фиг. 2B, фиг. 5B). Примечательно, что эффекторные Т-клетки в группе из 54 человек увеличивались пропорционально больше, чем в более молодых группах. Однако анализ VACV-специфических CD8 Т-лимфоцитов показал, что их абсолютное количество сопоставимо во всех возрастных группах (рис.5С). Что касается гуморального иммунного ответа, способность сыворотки нейтрализовать VACV была идентична во всех трех группах (рис. 5D). Эти наблюдения показывают, что вакцинация VACV генерирует иммунитет памяти у 54-ти мышей, который количественно неотличим от иммунитета, генерируемого у 7- или 22-х мышей.

Образцы селезенки и сыворотки были получены от вакцинированных и наивных (имитационно вакцинированных) мышей разного возраста через 29 дней после i.d. инъекция ( n = 4-5 животных в группе). ( A ) Показаны абсолютные числа всех CD8 и CD4 Т-клеток селезенки и ( B ) их субпопуляций. Наивная центральная память (CM) и эффектор (Eff). ( C ) Показывает VACV-специфические CD8 Т-клетки. Значения p определяли по критерию Манна-Уитни, * = p <0,05. NS, не имеет значения. ( D ) Ответы нейтрализующих антител, определенные с помощью теста нейтрализации уменьшения образования бляшек. IC50 — половина максимальной ингибирующей концентрации; NS, несущественная по критерию Манна-Уитни.Все эксперименты были выполнены дважды, и показаны репрезентативные данные одного эксперимента.

3,4 54-недельные мыши лучше защищены от интраназального заражения VACV, чем мыши из более молодых групп

Для измерения способности вакцинированных групп реагировать на повторное заражение, три возрастные группы вакцинированных животных и молодых наивных мышей были заражены внутримышечно. с дозой VACV, эквивалентной ~ 300 LD50. Все вакцинированные группы имели легкую или умеренную потерю веса (максимум около 15%) после заражения с последующим полным выздоровлением.Напротив, у наивных имитационных вакцинированных мышей потеря веса составила> 25%, и их отбирали по гуманной конечной точке (фиг. 6A). Примечательно, что после заражения мыши из 54 животных потеряли меньшую массу тела и выздоровели быстрее, чем группы молодого и среднего возраста. Результаты измерения вирусной нагрузки в легких зараженных мышей показали, что мыши с 54 яйцами избавились от вируса быстрее, чем другие группы (фиг. 6B). У большинства иммунизированных пожилых мышей копии генома VACV не были обнаружены в легких через 24 часа после внутривенного введения. испытание.Интересно, что мыши из 22-х групп медленнее, чем группы из 7 и 54 человек, избавлялись от вируса, несмотря на то, что после заражения потеря веса была одинаковой для групп из 7 и 22 человек (фиг. 6A, B).

Группам мышей C57BL / 6 из 7, 22 и 54 человек ( n = 4-5 на группу) внутрикожно вводили 10 ⁴ БОЕ (на ухо, в оба уха) VACV или PBS (имитация ). Затем этим группам был предложен вызов: i.п. с 0,7 × 10 ⁷ БОЕ VACV WR на 33 день после вакцинации в эксперименте № 1 (слева) и с 1,3 × 10 ⁷ БОЕ VACV WR в эксперименте № 2 (справа). ( A ) Изменения массы тела мышей после интраназального введения VACV; внутри каждой группы данные показывают сравнение веса каждой мыши с весом того же животного в нулевой день. Процентное соотношение для каждой группы является средним с SEM. Статистический анализ с помощью теста RM ANOVA. NS, незначительно; * = p <0,05. ( B ) Число копий вирусного генома в обоих легких мышей через 12, 24 и 48 часов после i.п. провокацию определяли с помощью КПЦР. Показаны медианы.

Наконец, были измерены уровни медиаторов воспаления в легочной ткани вакцинированных и наивных мышей (рис. 7, дополнение к рис. 9). Базовые уровни до i.n. инфекция существенно не различалась между группами. По сравнению с наивными мышами все вакцинированные животные очень быстро реагировали на внутривенную инфекцию. Всего через 12 часов после заражения уровни IFNγ, CCL7, CXCL1, CXCL2, CXCL10 существенно выросли (дополнительный рис. 9), хотя между разными возрастными группами не было больших различий.Только CXCL1 был повышен у пожилых мышей, а уровни IFNγ имели тенденцию быть выше у старых мышей и мышей среднего возраста, чем у молодых животных. Через 24 часа после инфицирования у пожилых мышей уровень большинства цитокинов и хемокинов в легких был снижен по сравнению с другими вакцинированными возрастными группами. Более того, через 48 часов после контрольного заражения уровни медиаторов воспаления в группе из 54 человек еще больше снизились и начали возвращаться к исходным (исходным) концентрациям. Это может отражать более быстрое удаление вирусов.Таким образом, результаты измерения потери веса, вирусной нагрузки и динамики цитокинов в легких показывают, что мыши, вакцинированные в возрасте 54 лет, имели надежную защиту от повторного заражения летальной дозой VACV, и эта защита была даже сильнее, чем у вакцинированных мышей. когда 7- и 22-ух.

групп ( n, = 4-5) мышей C57BL / 6 из 7, 22 и 54 человек i.d. с 10 ⁴ БОЕ (на ухо, в оба уха) VACV или PBS (фиктивный контроль). Затем через 33 дня после вакцинации животных заражали внутримышечно. с VACV WR. Легкие вакцинированных и ложно вакцинированных мышей собирали через 12, 24 и 48 часов после заражения. Уровни цитокинов и хемокинов измеряли с помощью мультиплексного анализа (Luminex). Данные представлены как кратное изменение для вакцинированной группы из 7 человек, которой присвоено значение 1. Показаны средние значения; Значения p определяли по критерию Манна-Уитни.* = p <0,05 между 7 и 54 животными, # = p <0,05 между 22 и 54 мышами. Эксперимент проводился дважды, и показаны данные одного репрезентативного эксперимента.

4 Обсуждение

В данном исследовании мы показываем, что i.d. вакцинация VACV приводит к успешному развитию иммунологической памяти у старых мышей с иммуно-стареющим фенотипом. Неожиданно, несмотря на общее снижение количества наивных клеток CD8 и CD4 (рис. 2), снижение набора иммунных клеток в сайт i.d. инфекции (рис. 3A, B) и воспалительных признаков, характерных для явления, иногда известного как воспаление (рис. 3C и 4D), 54-недельные мыши продемонстрировали лучшую эффективность вакцинации против заражения, чем более молодые животные.

Вакцинация людей VACV приводит к длительной иммунологической памяти даже после введения разовой дозы вакцины (23, 24, 34), а ее высокая эффективность подтверждена искоренением оспы. Имеется мало информации об эффективности вакцины VACV у пожилых людей или мышей.В одном исследовании сообщается, что вакцинация старых мышей BALB / c рекомбинантным VACV, экспрессирующим гемагглютинин гриппа, была эффективной для образования антител к гемагглютинину и специфичных для гриппа цитотоксических Т-клеток (35). Основа высокой иммуногенности VACV неизвестна. Однако местная иммуносупрессия с помощью VACV позволяет вирусу реплицироваться в месте инфекции в течение как минимум 12 дней после внутримышечной вакцинации (26). Этот расширенный период репликации обеспечивает постоянное воздействие антигена на иммунную систему, вероятно, способствуя формированию сильной иммунологической памяти.Это подавление иммунитета может быть опосредовано количеством иммуномодулирующих белков, экспрессируемых VACV сразу после заражения (21, 36). Многие иммуномодуляторы VACV нацелены на рецептор распознавания образов и передачу сигналов рецептора интерферона, чтобы блокировать противовирусные ответы в инфицированных клетках. В моделях вакцинации делеция двух или трех таких генов приводит к повышенной безопасности, но снижает иммуногенность вакцины и снижает защиту от заражения (28). Высокоаттенуированный штамм VACV, модифицированный вирусом осповакцины Ankara (MVA), который является дефицитным по репликации для многих типов клеток, приводит к образованию значительно более низких титров антител по сравнению с WR (37, 38).Это может объяснить эффективность VACV в развитии устойчивой иммунологической памяти даже у старых мышей. Однако это не объясняет, почему у более старых мышей наблюдалась лучшая защита от заражения, чем у более молодых.

Одной из особенностей иммунной системы пожилых людей является наличие хронического воспаления слабой степени, которое иногда называют воспалением (39). Характерными чертами этого феномена являются повышенная активность NF-κB (40, 41), повышенные уровни провоспалительных цитокинов и хемокинов, таких как TNFα, IL-1, IL-6, IL-8, IL-12, CCL2, CXCL10 (42 ), накопление связанных с повреждениями молекулярных паттернов и дисфункциональных органелл (43), а также изменения кишечной микробиоты и метаболизма (44).Этот феномен может каким-то образом объяснить повышенную продукцию регулируемых NF-κB цитокинов TNFα и IL-6 в тканях уха, инфицированных VACV, у мышей 54-wo мышей (рис. 3C), а также CCL2 в dLN (рис. 4D). ). Лиганды суперсемейства IL-6 и TNF действуют как адъюванты и повышают иммуногенность вакцин (45, 46). Следовательно, в случае вакцинации VACV воспаление может быть полезным за счет предоставления дополнительных провоспалительных стимулов для запуска каскада событий, ведущих к развитию иммунной памяти.

Повышенная продукция TNFα и IL-6 наряду с низким уровнем IL-10 (рис.3C) у старых животных после i.d. вакцинация, может компенсировать снижение набора иммунных клеток в место вакцинации (рис. 3A). Это может способствовать борьбе с вирусной инфекцией после i.d. инфекции (рис. 3D) и обеспечивают адекватные условия для генерации иммунологической памяти. Примечательно, что количество Tfh и GC B-клеток в dLN (рис. 4B, C), а также VACV-специфических CD8 T-клеток в селезенке и уровни нейтрализующих антител (рис. 5C, D) были одинаковыми во всех возрастных группах. .Тем не менее, неясно, как старые мыши достигли более быстрого выведения VACV и снижения потери веса после заражения (рис. 6A, B).

Наши результаты показывают, что абсолютное количество эффекторных Т-лимфоцитов CD8 селезенки значительно и пропорционально увеличилось в пожилой группе, чем у молодых мышей (рис. 2B и 5B). Это нельзя объяснить просто увеличением количества VACV-специфических CD8 T-клеток селезенки (которые были идентифицированы с помощью окрашивания декстрамером MHC-I), потому что их абсолютное количество слишком низкое и одинаковое для всех трех возрастных групп (рис.5С). Это различие может быть связано с размножением VACV-специфических Т-лимфоцитов CD8 против различных эпитопов VACV и / или размножением низкоаффинных Т-клеток CD8, которые не были распознаны типом декстрамеров MHC-I, использованных в этом исследовании. Эти клетки могут способствовать быстрому выведению VACV у пожилых людей после заражения. Кроме того, несмотря на многочисленные публикации, описывающие функциональную неэффективность стареющих эффекторных Т-клеток, есть сообщения о том, что эффекторные Т-клетки пожилых людей могут иметь лучший иммунный ответ на стимуляцию антигеном, чем более молодые аналоги (47–49).

В заключение, это исследование демонстрирует, что вакцинация мышей пожилого возраста очень эффективна и не уступает более молодым животным. Иммунитет и воспаление можно более точно рассматривать как иммуноадаптацию и иммуноремоделирование в пожилом возрасте, а не просто как медленное снижение функции иммунной системы (50, 51). Большинство вакцин были созданы и используются для детей и молодых людей (6), и необходимы вакцины, предназначенные для пожилого населения, которые учитывают специфические характеристики иммунной системы в пожилом возрасте.Учитывая эффективность вакцинации VACV, показанную в текущем исследовании, необходимы дальнейшие исследования для понимания механизмов ее высокой иммуногенности.

5 Заявление об этике

Это исследование было проведено в соответствии с положениями Закона о животных (научные процедуры) 1986 года. Все протоколы и процедуры были одобрены Министерством внутренних дел Великобритании и выполнялись в соответствии с лицензией на проект PPL 70/8524.

6 Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось в отсутствие каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

7 Взносы авторов

GS и BF предоставили финансирование. ES, GS и BF разработали исследование. ES провел все эксперименты и статистический анализ. Руководили работой GS и BF. Рукопись написали ES, BF и GS.

8 Финансирование

Исследование было поддержано грантом проекта MRC RG77505 для GLS и BF. GS — главный научный сотрудник Wellcome Trust.

10 Заявление о доступности данных

Исходные данные, подтверждающие выводы этой рукописи, будут предоставлены авторами без излишних оговорок любому квалифицированному исследователю.

9 Благодарности

Мы благодарим доктора Брайана М. Уорда (Медицинский центр Университета Рочестера, США) за предоставление плазмиды, содержащей ген VACV E9L . Мы также благодарим доктора Мишель А. Линтерман из Института Бабрахама, Кембридж, Великобритания, за полезное обсуждение.

Риск злокачественных новообразований кожи в группе работников, профессионально подвергающихся воздействию ионизирующего излучения с низкой мощностью дозы

Abstract

В последнее время наблюдается тенденция к увеличению заболеваемости раком кожи в различных группах населения, включая людей, подвергшихся воздействию различных типов радиации.Риск и доза-реакция после длительного радиационного воздействия остаются неясными. Настоящее исследование было направлено на оценку рисков заболеваемости меланомой кожи (SM) и немеланомным раком кожи (NMSC) в когорте рабочих, профессионально подвергающихся воздействию ионизирующего излучения с низкой мощностью дозы в течение продолжительных периодов времени. В когорту исследования вошли работники российского атомного производственного объединения ПО «Маяк», которые были приняты на работу в 1948–1982 гг. И продолжались до конца 2013 г. (всего 22 377 человек, из них 25% — женщины).Используя модуль AMFIT программного обеспечения EPICURE, были рассчитаны относительный риск и избыточный относительный риск на единицу дозы (RR и ERR / Зв). В исследуемой когорте было зарегистрировано 60 случаев SM и 294 случая NMSC. Заболеваемость SM и NMSC зависела от пола, достигнутого возраста, возраста первого трудоустройства на предприятии, типа учреждения, уровня образования и не зависела от календарного периода первого приема на работу, календарного периода диагностики, продолжительности работы, курения и употребления алкоголя. статусы. Было обнаружено, что риск заболеваемости NMSC значительно повышается у рабочих, профессионально подвергающихся воздействию ионизирующего излучения в совокупных дозах выше 2.0 Зв (ОР = 2,52; 95% ДИ: 1,60, 3,97) по сравнению с категорией референсной дозы (0–0,05 Зв). Было обнаружено, что заболеваемость NMSC достоверно связана с кумулятивной дозой внешнего гамма-излучения с ERR / Sv 0,49 (95% ДИ: 0,22, 0,90) без поправки на дозу нейтронов и 0,51 (95% ДИ: 0,22, 0,93) с поправкой на нейтроны. доза. Результаты анализа не выявили значимой связи заболеваемости СМ с кумулятивной дозой от внешнего гамма-излучения с ERR / Зв 0,22 (95% ДИ: -0,29, 1,46), не включая корректировку дозы нейтронов, и 0.15 (95% ДИ: -0,41, 1,31) с поправкой на дозу от нейтронного облучения.

Образец цитирования: Азизова Т.В., Банникова М.В., Григорьева Е.С., Рыбкина В.Л. (2018) Риск злокачественных новообразований кожи в когорте рабочих, подвергшихся профессиональному воздействию ионизирующего излучения при низких мощностях дозы. PLoS ONE 13 (10): e0205060. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0205060

Редактор: Суминори Акиба, Высшая школа медицинских и стоматологических наук Университета Кагосима, ЯПОНИЯ

Поступила: 16 мая 2018 г .; Одобрена: 19 сентября 2018 г .; Опубликован: 5 октября 2018 г.

Авторские права: © 2018 Azizova et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Доступность данных: Данные получены из Южно-Уральского института биофизики, г. Озёрск, Челябинская область, 456780, Россия. Поскольку данные содержат идентифицирующую и конфиденциальную информацию о пациенте, по соображениям конфиденциальности они не доступны публично.Любой доступ к Когорте рабочих Маяка должен быть одобрен SUBI IRB. По вопросам данных обращайтесь к ее члену Юлии Царевой [email protected].

Финансирование: Авторы не получали специального финансирования на эту работу.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что никаких конкурирующих интересов не существует.

Введение

Злокачественные новообразования кожи (MSN), включая меланомы кожи (SM) и немеланомный рак кожи (NMSC), являются наиболее распространенными злокачественными новообразованиями, имеющими тенденцию к постоянному росту в течение последних десятилетий [1–3]. Основные факторы, способствующие развитию MSN. пол, возраст, генетическая предрасположенность, фенотип кожи, УФ-облучение и т. д. [3–7].Риски МСН были зарегистрированы для различных групп лиц, подвергшихся воздействию различных типов радиации [3,7–13]. Обзор, проведенный Независимой консультативной группой Великобритании по ионизирующему излучению ³ , дает подробный систематический и критический обзор исследований рака кожи с учетом ряда сценариев воздействия. Авторы приходят к выводу, что исследования «доза-эффект» ограничены из-за отсутствия дозиметрических данных. Оценки риска и тип модели «доза-реакция» остаются неясными для длительного облучения при низких мощностях доз. Таким образом, данное исследование было направлено на оценку рисков заболеваемости СМ и НМСК в когорте работников ПО «Маяк», подвергшихся профессиональному облучению в течение длительных периодов времени при низких мощностях дозы.Ранее исследования этой когорты продемонстрировали повышенный риск радиогенной заболеваемости и смертности от лейкемии и солидного рака, рака легких, печени и костей [14–20].

Материалы и методы

Настоящее эпидемиологическое исследование, основанное на записях, не требует никаких контактов с членами когорты. Исследование было рассмотрено и одобрено институциональным наблюдательным советом (IRB) Южно-Уральского института биофизики. SUBI IRB подтвердил, что подписанное согласие от членов когорты исследования не требуется.Исследование выполнено в соответствии с Хельсинкской декларацией.

Когорта исследования

Это ретроспективное когортное исследование. В исследуемую когорту вошли все работники ПО «Маяк» — первого крупного производственного предприятия атомной промышленности, расположенного на Южном Урале недалеко от города Озёрск, впервые работавших на одном из основных заводов (реакторных, радиохимических или производящих плутоний) в период с 01.01. Января 1948 г. и 31 декабря 1982 г., независимо от пола, возраста, этнической принадлежности, профессии, продолжительности работы или других характеристик, всего 22377 человек (из них 25.4% женщин).

Наблюдение за когортой началось с даты первой работы на одном из основных заводов и продолжалось до первой из следующих дат: дата постановки диагноза MSN, дата смерти, 31 декабря 2013 г. для живых рабочих, проживающих в Озёрске (жители), дата «последнего медицинского заключения» для рабочих-жителей с неизвестным жизненным статусом и для рабочих, выехавших из Озерска (мигранты).

В таблице 1 представлены подробные характеристики исследуемой когорты. Средний возраст начала работы на ПО «Маяк» — 24 года.11 ± 7,13 лет (± стандартное отклонение) у мужчин и 27,32 ± 7,97 лет у женщин. Продолжительность занятости варьировалась от 1 месяца до 60 лет и составляла в среднем 18,04 ± 14,28 года, при этом только 4,7% работников ПО «Маяк» работали менее 1 года.

К концу последующего наблюдения жизненный статус был известен 95% членов когорты исследования, из них 53,5% умерли и 46,5% живы. Средний возраст смерти составил 61,52 ± 13,63 года у мужчин и 70,4 ± 12,44 года у женщин, при этом средний возраст живых рабочих составлял 68 лет.50 ± 10,40 и 76,59 ± 9,75 года соответственно.

В настоящем исследовании оценивались риски MSN, а именно SM (коды ICD-9 172.0–172.9) и NMSC, включая базально-клеточный рак кожи, плоскоклеточный рак и другие (коды ICD-9 173.0–173.9) [21]. Как сообщалось ранее 22, все работники ПО «Маяк» проходили предварительное медицинское обследование (перед приемом на работу) и ежегодные медицинские осмотры, в том числе осмотр дерматолога в течение всего периода работы на предприятии.С помощью медико-дозиметрической базы данных «Клиника» [22] среди членов когорты рабочих «Маяк» выявлено 354 первичных МСН (224 (63,3%) зарегистрированных у мужчин и 130 (36,7%) зарегистрированных у женщин). Следует отметить, что 100% выявленных случаев верифицированы по результатам гистологического исследования.

Дозиметрия

Для исследования использовались поглощенные дозы от внешнего гамма-излучения и нейтронов, предоставленные системой «Маяк Worker Dosimetry System – 2008» (MWDS – 2008), разработанной в рамках российско-американского сотрудничества [23].MWDS– 2008 дает данные о дозах, поглощенных в 18 органах, но, к сожалению, данные о дозах через кожу недоступны, поэтому в данном исследовании использовались индивидуальные дозы гомогенных гамма-лучей, поглощенных в точке фиксации дозиметра на теле рабочего на глубине 10 мм [Hp (10) доза эквивалент] (далее «внешняя гамма-доза») и индивидуальные дозы от нейтронного облучения, поглощенные в точке фиксации дозиметра излучения на теле рабочего на глубине 10 мм [ H p (10) n эквивалент дозы] ( далее «нейтронная доза») [24].Суммарная доза от внешнего γ-излучения составила 0,54 ± 0,76 Зв (95-й процентиль, 2,21 Зв; мин – макс: 0–8,43 Зв) у мужчин и 0,44 ± 0,65 Зв (95 процентиль, 1,87 Зв; мин – макс: 0–6,83 Зв). ) у самок; среднегодовые дозы (± стандартное отклонение) составляли 0,06 ± 0,13 Зв (95% перцентиль 0,28 Зв; мин – макс: 0–2,48 Зв) для мужчин и 0,06 ± 0,11 Зв (95% перцентиль 0,27 Зв; мин – макс: 0–1,34 Зв). ) для женщин соответственно. Диапазон общих доз был широк: 17% рабочих подвергались общему внешнему гамма-излучению на уровнях выше 1 Зв, а 35% — менее 0.1 Зв (рис. 1). Среднегодовые дозы гамма-излучения были самыми высокими в первые годы работы ПО «Маяк» (1948–1953 гг.). Средняя годовая гамма-доза составляла 0,3 Зв / год в 1951 году, но резко снизилась в течение следующего десятилетия до 0,05 Зв / год к 1960 году. Они продолжали снижаться более медленными темпами до 1980 года, после чего годовые дозы гамма-излучения оставались стабильными на уровне примерно 0,008 Зв / год (рис. 2). Суммарная доза от нейтронов составила 0,034 ± 0,080 Зв (мин – макс: 0–2,64 Зв) для мужчин и 0,033 ± 0,092 Зв (мин – макс: 0–1,15 Зв) для женщин (рис. 3).

Статистический анализ

Данные, использованные в настоящем анализе, были ограничены периодом проживания в Озёрске, поскольку информация о заболеваниях, результатах ежегодных обследований кожи и нерадиационных факторах была недоступна для мигрантов после того, как они покинули город. Сравнение проводилось между группами в исследуемой когорте. В это исследование были исключены 43 рабочих с острой лучевой болезнью из-за облучения гамма-нейтронами с высокой мощностью дозы, а также были исключены 698 рабочих, у которых отсутствовала медицинская информация из-за утерянных медицинских карт.

Для проведения анализа данные были составлены в виде многомерных таблиц (таблица S1).

С помощью стандартного программного обеспечения Statistica 10.0 были рассчитаны стандартизованные уровни заболеваемости MSN на 100 000 рабочих вместе с 95% доверительным интервалом (ДИ). Нормализация проводилась косвенно с использованием внутренней ссылки. Кусочная лог-линейная модель, называемая анализом точек соединения (Программа регрессии точек соединения, версия 4.0.4; Отдел статистических исследований и приложений, Национальный институт рака), без ограничений на положения узлов или точек соединения использовалась для определения изменений тренда во времени и оценки ежегодное процентное изменение (APC) показателей заболеваемости.Модель была указана для включения точек соединения, которые могут возникать в середине периода или между двумя последовательными периодами. Модель ограничивала точки соединения как минимум на полтора периода друг от друга и как минимум на два периода от начала и конца исследования. При допущении гетероскедастичности и некоррелированных ошибок поиск наиболее подходящей модели проводился на 4499 случайно переставленных наборах данных с использованием метода поиска по сетке. Тесты с общим двусторонним уровнем значимости 0.10, не корректировались на автокорреляцию.

На следующем этапе анализа были оценены относительные риски (ОР) для категорий, включающих одну или несколько переменных, включая поправки на другие переменные. RR был рассчитан на основе максимального правдоподобия с использованием модуля AMFIT программы EPICURE [25]. 95% доверительный интервал для оценок RR и значений p, используемых для проверки статистической значимости, были рассчитаны с использованием методов, основанных на правдоподобии, интегрированных в модуль AMFIT.

Первым шагом было исследование влияния различных нерадиационных факторов на частоту возникновения MSN, а вторым шагом была оценка влияния внешнего гамма-излучения с учетом нерадиационных факторов и нейтронного облучения (посредством стратификации).В дополнение к категориальному анализу тенденции заболеваемости с дозой облучения были протестированы с использованием регрессии Пуассона в модуле AMFIT программного обеспечения EPICURE. В частности, избыточный относительный риск на единицу дозы (ERR / Зв) был описан линейным трендом с дозой от внешнего γ-излучения, включая корректировку (посредством стратификации) на нерадиационные факторы [пол, достигнутый возраст (<20, 20-25 ,…, 80–85,> 85 лет) и календарный период (1946–1950, 1951–1955, 1956–1960, 1961–1965,…, 2011+)]. А именно, использованная модель регрессии Пуассона была: (1) где λ — заболеваемость МСН; λ ₀ — фоновая заболеваемость MSN; s — секс; аа достиг возраста; cc — календарный период; β — ERR / Зв; D — кумулятивная поглощенная доза от внешнего гамма-излучения, Зв.

Для исследования влияния нейтронного облучения на оценку наблюдаемого риска был проведен анализ чувствительности. Для анализа доза от нейтронного облучения рассматривалась как категориальная переменная и была разделена на следующие категории: <0,01, 0,01–0,025, 0,025–0,05, 0,05–0,10,> 0,10, неизмеренные 0,00. Поправка на дозу нейтронов была включена посредством стратификации. Таким образом, модели регрессии Пуассона выглядели так: (2) где dn — кумулятивная доза от нейтронов, Зв. Рабочие, предположительно не подвергавшиеся воздействию нейтронов, не были исключены из анализа, будучи классифицированными как «неизмеряемые 0».00 ’.

Такой план анализа (включая поправку на дозу нейтронов посредством стратификации) был выбран, потому что дозы от нейтронного облучения были измерены только у 18,6% работников исследуемой когорты, в то время как исключение данных о рабочих с неизмеренными дозами нейтронов привело бы к значительному снижению статистической мощности. анализа.

Кроме того, был проведен анализ чувствительности для изучения эффектов дополнительной стратификации по расе и исключения из набора данных работников, работающих на объекте менее одного года, налагая различные периоды задержки (0, 5, 10, 15 и 20 лет) на дозы. от внешнего гамма-излучения.Для запаздывания доз внешнего гамма-излучения и нейтронов учитывались человеко-годы с момента начала работы, а первые x лет с момента начала работы были включены в нулевую категорию из-за отставания дозы гамма / нейтронов на x лет.

Также было исследовано изменение радиационного риска заболеваемости MSN в зависимости от пола, достигнутого возраста и возраста при первом приеме на работу на ПО «Маяк» и типа объекта (при оценке неоднородности и лог-линейного тренда отношения ERR / Зв с достигнутым возрастом).Все тесты значимости были двусторонними.

Данные о типе учреждения учитывались на протяжении всего периода наблюдения. В категорию «завод по производству плутония» вошли работники, которые когда-либо работали на заводе по производству плутония, в категорию «радиохимический завод» вошли работники, которые когда-либо работали на радиохимическом заводе, но никогда не работали на заводе по производству плутония, и категория «реактор». включены рабочие, которые работали на реакторах, но никогда не работали на других объектах.

Данные о привычках к курению учитывались в течение всего периода наблюдения и оценивались с помощью качественного индекса. Качественный индекс включал значения «неизвестно», «никогда не курил» и «когда-либо курил». «Никогда не куривший» считался работником, который сообщил, что никогда не курил, во время серии ежегодных обязательных медицинских осмотров.

Данные о потреблении алкоголя учитывались в течение всего периода наблюдения и оценивались с помощью качественного параметра. «Непьющим» считался работник, который в течение периода наблюдения во время серии обязательных ежегодных медицинских осмотров сообщил, что никогда не употреблял алкоголь; «Умеренно пьющий» был назначен работнику, который выбрал это описание для характеристики своей привычки к употреблению алкоголя во время серии ежегодных обязательных медицинских осмотров; «Сильно пьющим» считался рабочий, в медицинской карте которого были зарегистрированы алкогольное опьянение или хронический алкоголизм; «Unknown» был назначен работнику с недоступной / отсутствующей информацией по этому параметру.

Результаты

За период наблюдения в когорте работников «Маяк» было зарегистрировано 60 случаев СМ и 294 случая НМСК в течение 571 462 и 565 019 человеко-лет наблюдения соответственно. Подавляющее большинство случаев SM и NMSC было зарегистрировано у работников в возрасте старше 50 лет (85,0% и 86,4% соответственно). Известно, что возраст является одним из основных факторов риска развития злокачественных новообразований [3–5]. Случаи SM и NMSC в основном были зарегистрированы в период 1986–2013 гг. (86,7% и 80.3% соответственно), в основном, за счет достижения в этот период возраста работников исследуемой когорты. Стандартизированные показатели заболеваемости СМ составили 8,51 ± 1,46 у мужчин и 8,78 ± 2,27 у женщин на 100 000 рабочих, в то время как соответствующие показатели для NMSC составили 46,04 ± 3,40 и 37,40 ± 4,72, соответственно (неопубликованные данные в печати). Стандартизированные показатели заболеваемости SM и NMSC в исследуемой когорте заметно увеличились к концу периода наблюдения (рис. 4). Выявлены достоверные логарифмически-линейные тенденции увеличения заболеваемости NMSC к концу периода наблюдения как для мужчин, так и для женщин исследуемой когорты (APC = 2.69 и 3,82 соответственно, P <0,10), а также незначительная тенденция увеличения заболеваемости СМ у рабочих-мужчин (APC = 2,37, P = 0,2) (рис. 4). Полученные результаты хорошо согласуются с данными других исследований и подтверждают общую картину увеличения заболеваемости MSN [1–3]. Эта тенденция к повышению уровня заболеваемости MSN в России обусловлена ​​увеличением продолжительности жизни, а также улучшением процедур, необходимых для регистрации диагноза заболевания.

В таблице 2 представлен анализ связи показателей заболеваемости SM и NMSC с нерадиационными факторами риска в исследуемой когорте.Заболеваемость NMSC у женщин была значительно ниже, чем у мужчин (ОР = 0,77; 95% ДИ: 0,60, 0,98). Заболеваемость SM и MNSC увеличивалась с возрастом как у мужчин, так и у женщин. Например, ОР заболеваемости у мужчин старше 70 лет для SM составил 7,62 (95% ДИ: 2,30, 26,69), для NMSC — 17,70 (95% ДИ: 10,43, 30,67) по сравнению с контрольной категорией, включающей мужчин в возрасте <50 лет. . Риск заболеваемости СМ у мужчин, впервые трудоустроенных на одном из основных производств ПО «Маяк» в возрасте 20–30 лет, значительно снизился по сравнению с впервые трудоустроенными в возрасте до 20 лет.Риск заболеваемости NMSC был значительно ниже у мужчин, впервые трудоустроенных на предприятии в возрасте старше 30 лет, по сравнению с теми работниками, которые впервые были приняты на работу в возрасте до 20 лет (Таблица 2). Было показано, что календарный период первого трудоустройства в учреждении не оказывает значительного влияния на показатели заболеваемости MSN в когорте исследователей, но было обнаружено, что календарный период диагностики заболевания имел значительный эффект у женщин. В частности, заболеваемость СМ у женщин в 1976–1985 гг. Значительно снизилась по сравнению с периодом 1996–2005 гг.Более того, анализ показал, что частота встречаемости NMSC была ниже у женщин, работающих на реакторе, чем у женщин, работающих на радиохимическом заводе (RR = 0,54; 95% ДИ: 0,26, 0,99, p <0,05). Не было показано достоверной связи между заболеваемостью MSN и продолжительностью работы на ПО «Маяк». Влияние курения и употребления алкоголя на заболеваемость МСН в исследуемой когорте не было продемонстрировано, в то время как другие исследования сообщают, что риск МСН повышен у лиц, злоупотребляющих алкоголем, которые имеют более высокий риск солнечных ожогов, что, в свою очередь, является фактором, вызывающим развитие МСН, что предлагается в многочисленных исследованиях [23, 24].Риск MSN был повышен у лиц с высшим образованием и высоким социальным статусом, при этом значительные оценки риска были получены только для мужчин с диагнозом NMSC (Таблица 2). Для участников исследуемой когорты этот результат можно объяснить более частым и продолжительным отпуском, проводимым в южных регионах, где индекс UVI в разы выше, чем в Озёрске. Дополнительный анализ риска в отношении этнической принадлежности продемонстрировал, что риск NMSC у рабочих смешанной расы был ниже, чем у рабочих кавказской расы, но оценка риска была незначительной из-за низкого числа случаев в определенных расовых группах (81% членов когорты кавказские).

Таблица 3 суммирует результаты категориального анализа заболеваемости MSN в когорте исследователей. Риск заболеваемости СМ был повышен во всех категориях доз внешнего гамма-излучения по сравнению с контрольной категорией (кумулятивные дозы 0–0,05 Зв), но не был достигнут уровень значимости для оценок ОР, что можно объяснить небольшим количеством случаев и низкой статистической мощностью. анализа. Между тем, был обнаружен значительно повышенный риск заболеваемости NMSC у рабочих, подвергшихся профессиональному облучению с кумулятивной дозой выше 2.0 Зв (ОР = 2,52; 95% ДИ: 1,60, 3,97) по сравнению с контрольной категорией (кумулятивная доза 0–0,05 Зв).

Таблица 4 и рис. 5 демонстрируют превышение относительного риска на единицу дозы (ERR / 1,0 Зв) для заболеваемости MSN, связанной с дозой внешнего гамма-излучения, на основе линейной модели риска. Было обнаружено, что частота возникновения NMSC в значительной степени связана с кумулятивной дозой от внешнего гамма-излучения с ERR / Sv 0,49 (95% ДИ: 0,22, 0,90) без поправки на дозу нейтронов и с поправкой на дозу нейтронов ERR / Sv равной 0.51 (95% ДИ: 0,22, 0,93). Оценка риска увеличивалась с увеличением периода задержки, и с введенным периодом задержки 20 лет она составила 0,60 (95% ДИ: 0,28, 1,05). Значительное ERR / Sv было оценено для частоты NMSC, связанной с воздействием внешнего гамма-излучения, у рабочих-мужчин из исследуемой когорты (0,70; 95% ДИ: 0,28, 1,41), но не у работающих женщин, однако между ними не было обнаружено значительных различий р = 0,164). ERR / Зв внешнего облучения для заболеваемости NMSC были значительными во всех возрастных категориях, за исключением группы работников в возрасте старше 70 лет, и различия между возрастными категориями были значительными (p = 0.024). Риск заболеваемости NMSC снижался с увеличением возраста, но эта тенденция была незначительной (p = 0,252). Риск не изменился ни по возрасту первого приема на работу на ПО «Маяк» (p> 0,5), ни по типу предприятия (p> 0,5).

Результаты анализа не продемонстрировали значимой связи заболеваемости СМ с кумулятивной дозой внешнего гамма-излучения; ERR / Зв без поправки на дозу нейтронов составлял 0,22 (95% ДИ: -0,29, 1,46) и 0,15 (95% ДИ: -0,41, 1,31) с поправкой на дозу нейтронов (таблица 4).Следует отметить, что риск увеличивался с увеличением периодов задержки, но оставался незначительным (0,32 95% ДИ: –0,28, 1,76 с 20-летним периодом). Все оценки риска попадали в широкий доверительный интервал из-за небольшого количества случаев SM, выявленных в когорте исследователей. Исключение лиц, проработавших на ПО «Маяк» менее 1 года из анализируемой базы данных, не повлияло на результаты, полученные для всей когорты.

Обсуждение

Результаты настоящего исследования подтверждают связь заболеваемости MSN в когорте работников ПО «Маяк» с полом, достигнутым возрастом, возрастом начала работы на объекте, типом учреждения и образованием, а также о том, что заболеваемость MSN не зависел от календарного периода занятости, календарного периода постановки диагноза, продолжительности занятости, употребления алкоголя и курения.Можно ожидать увеличения заболеваемости MSN с возрастом, и это обусловлено возрастной причиной заболевания. Информация о роли других нерадиационных факторов (например, курения, употребления алкоголя) в развитии МСН, приведенная в различных исследованиях, противоречива [26–28]. Между тем результаты эпидемиологических и клинических исследований подтверждают, что УФИ является основным внешним фактором, повышающим риск МСН [3, 6, 7]. В рамках настоящего ретроспективного исследования мы не смогли в достаточной мере исследовать такой фактор, как УФИ.Однако анализ риска, проведенный для различных сайтов MSN на основе данных когорт исследования, показал, что уровни заболеваемости SM и NMSC, локализованные в областях лица и шеи, были значительно ниже по сравнению с локализацией тела, в то время как другие исследования показали, что если индекс UVI был высоким, то риск MSN лица и шеи значительно увеличился [29]. Следует отметить, что все работники исследуемой когорты проживали в городе Озёрск на Южном Урале в одном климате с низким индексом УФИ на протяжении всего периода наблюдения.Также стоит отметить, что все работники исследуемой когорты работали только в помещении.

Хорошо известно, что предраковые поражения кожи и актинические кератозы повышают риск рака кожи [30, 31]. Однако, поскольку эти кожные изменения были очень редки у членов когорты исследования, они не были включены в анализ из-за недостаточной статистической мощности.

В результате исследования мы обнаружили значительно повышенный риск заболеваемости NMSC (но не SM) у рабочих, подвергшихся профессиональному облучению в дозах выше 2.0 Зв, накопленных в течение длительных периодов времени.

Анализ доза-реакция с учетом нерадиационных факторов (пол, достигнутый возраст и календарный период) и доз нейтронов не выявил значимой связи заболеваемости СМ с кумулятивной дозой внешнего гамма-излучения, вероятно, из-за небольшого числа случаев и, как следствие, низкая статистическая мощность исследования. Однако было обнаружено, что частота возникновения NMSC в значительной степени связана с кумулятивной дозой внешнего гамма-излучения, как без корректировки, так и с поправкой на дозу нейтронов.Более того, анализ чувствительности продемонстрировал, что ERR / Зв внешнего излучения для случая NMSC увеличился после включения поправки на дозу нейтронов. Расчетный риск увеличивался с увеличением периода задержки. Было обнаружено, что ERR / Зв существенно не изменяется ни по полу, ни по возрасту при первом приеме на работу в учреждение, ни по типу учреждения. Однако было показано, что риск значительно увеличивается к достижению возраста. ERR / Зв внешнего излучения для заболеваемости NMSC в группе работников в возрасте до 50 лет было равно 0.99 (95% ДИ: 0,06, 3,45), в возрастной группе 50–59 лет — 2,17 (95% ДИ: 0,51, 8,63), в возрастной группе 60–69 лет — 1,32 (95% ДИ: 0,45, 3,36). а в возрастной группе> 70 лет — 0,16 (95% ДИ: -0,10, 0,60).

NMSC, оцененные в настоящем исследовании (0,49; 95% ДИ: 0,22, 0,90), были ниже, чем соответствующие риски, оцененные для выживших после атомной бомбардировки (0,72; 95% ДИ: 0,36, 1,2) [9]. Эти различия в основном были вызваны сильно различающимися сценариями облучения (острое радиационное облучение из-за атомных бомбардировок кожного покрова было выше, чем соответствующие дозы, накопленные членами исследуемой когорты).Между тем, риск заболеваемости немеланомой, полученный в настоящем исследовании, был заметно выше, чем у членов когорты американских радиологов, особенно для базальноклеточных карцином (ERR / Gy = 0,03, 95% ДИ: -0,39, 0,56) [11] .

Как и в настоящем исследовании, ни одно из основных эпидемиологических исследований не продемонстрировало значимой связи SM с дозой облучения, за исключением когортного исследования радиологов в США, в котором анализировалось влияние облучения после интервенционных процедур рентгеноскопии и выявлялось пограничное значимое повышение риска заболеваемости SM (HR = 1). .16, 95% ДИ: 1,02, 1,32) [13]. Однако авторы пришли к выводу, что этот результат может быть случайным, учитывая небольшое количество SM в этой когорте.

Большой размер когорты исследования, длительный период наблюдения (примерно 70 лет) и доступная информация об индивидуально измеренных дозах внешнего гамма-излучения и достаточная статистическая мощность исследования могут рассматриваться как его сильные стороны. Одним из основных преимуществ исследуемой когорты является тот факт, что осмотры дерматолога и кожные осмотры были обязательными во время ежегодных медицинских осмотров работников исследуемой когорты.Между тем мы признаем, что скрининговый эффект характерен для исследования заболеваемости работников ПО «Маяк». Об этом эффекте свидетельствует наблюдение более высоких показателей заболеваемости СМ и НМС среди членов когорты, чем соответствующие показатели среди населения Российской Федерации и Уральского федерального округа (региона, где расположены г. Озёрск и ПО «Маяк») [32, 33]. При этом следует подчеркнуть, что все работники, независимо от пола, возраста, места работы, рода занятий, типа и дозы облучения и т. Д., были в обязательном порядке подвергнуты медицинскому обследованию в соответствии со стандартным унифицированным протоколом, который исключает возможность самостоятельного выбора (например, из-за плохого состояния здоровья) и ошибок при выборе дозы. Кроме того, следует подчеркнуть, что врачи, проводившие эти обязательные медицинские осмотры, не имели доступа к информации о дозах облучения рабочих.

Основным ограничением исследования является отсутствие оценок доз облучения кожи в дозиметрической системе рабочего «Маяк» MWDS-2008 [23], но в будущем подробные маршруты профессионального облучения, индивидуальные дозы внешнего гамма-излучения, измеренные с помощью личных пленочных бейджей, подробное описание радиационного облучения. сценарии, а также данные о профессии позволят реконструировать дозу на кожу и повторно проанализировать риск для когорты работников Маяка на основе продолжительного периода наблюдения и с учетом гистологических типов злокачественных новообразований кожи.

Заключение

Результаты исследования показали, что заболеваемость SM и NMSC зависела от пола, достигнутого возраста, возраста первого приема на работу на предприятие, типа учреждения, уровня образования и не зависела от календарного периода первого трудоустройства, календарного периода постановки диагноза. , продолжительность занятости, статусы курения и употребления алкоголя. Было обнаружено, что риск заболеваемости NMSC значительно повышается у рабочих, профессионально подвергающихся воздействию ионизирующего излучения в совокупных дозах выше 2.0 Зв (ОР = 2,52; 95% ДИ: 1,60, 3,97) по сравнению с категорией референсной дозы (0–0,05 Зв). Было обнаружено, что заболеваемость NMSC достоверно связана с кумулятивной дозой внешнего гамма-излучения с ERR / Sv 0,49 (95% ДИ: 0,22, 0,90) без поправки на дозу нейтронов и 0,51 (95% ДИ: 0,22, 0,93) с поправкой на нейтроны. доза. Результаты анализа не выявили значимой связи заболеваемости СМ с кумулятивной дозой от внешнего гамма-излучения с ERR / Зв 0,22 (95% ДИ: -0,29, 1,46), не включая корректировку дозы нейтронов, и 0.15 (95% ДИ: -0,41, 1,31) с поправкой на дозу от нейтронного облучения.

Благодарности

Авторы благодарят переводчика СУБИ А. Денисову за помощь в подготовке рукописи.

Список литературы

1. 1. Ferlay J, Shin HR, Bray F, Forman D, Mathers C, Parkin DM (2010) GLOBOCAN 2008 v1.2 заболеваемость раком и смертность во всем мире: IARC CancerBase No. 10 (Интернет). Лион, Франция: Международное агентство по изучению рака; доступно по адресу http: // globocan.iarc.fr
2. 2. Дерматоонкология (злокачественные новообразования кожи, первичные лимфомы кожи). Атлас: под ред. Кунгуровой Н.В. Екатеринбург: МаксИнфо; 2016.
3. 3. Риск солидного рака в результате радиационного облучения: оценки для населения Великобритании. Отчет Независимой консультативной группы по ионизирующему излучению Doc HPA, RCE-19, 2011 1–258 (www.gov.uk/government/publications/radiation-risk-of-solid-cancers-following-exposure).
4. 4. Rastrelli M, Tropea S, Rossi CR и Alaibac M: Меланома: эпидемиология, факторы риска, патогенез, диагностика и классификация.In Vivo. 2014; 28: 1005–1011. pmid: 25398793
5. 5. Бауэр А., Дипген Т.Л. и Шмитт Дж. Является ли профессиональное солнечное ультрафиолетовое облучение важным фактором риска базальноклеточного рака? Систематический обзор и метаанализ эпидемиологической литературы British Journal of Dermatology. 2011; 165: 612–625. pmid: 21605109
6. 6. Гандини С., Сера Ф, Каттаруцца М.С., Паскини П., Пиккони О., Бойл П. и др. Мета-анализ факторов риска меланомы кожи: II. Воздействие солнца.Европейский журнал рака. 2005; 41: 45–60. pmid: 15617990
7. 7. Берег RE. Радиационно-индуцированный рак кожи у людей. Медицинская и детская онкология, 2001; 36: 549–554. pmid: 11340610
8. 8. Йошинага С., Хауптманн М., Сигурдсон А.Дж., Дуди М.М., Фридман Д.М., Александр Б.Х. и др. Немеланомный рак кожи в связи с воздействием ионизирующего излучения среди радиологических технологов США. Int. J. Рак. 2005; 115: 828–834. pmid: 15704092
9. 9. Сугияма Х., Мисуми М., Кишикава М., Исэки М., Йонехара С., Хаяси Т. и др.Заболеваемость раком кожи среди выживших после атомной бомбардировки с 1958 по 1996 год. Radiat Res. 2014. 181 (5): 531–9. pmid: 24754560
10. 10. Карагас М.Р., Макдональд Дж. А., Гринберг Е. Р., Стукель Т. А., Вайс Дж. Э., Барон Дж. А. и др. Риск базально-клеточного и плоскоклеточного рака кожи после ионизирующей лучевой терапии. J Natl Cancer Inst. 1996; 88: 1848–1853. pmid: 8961975
11. 11. Ли Т., Сигурдсон А.Дж., Престон Д.Л., Кахун Е.К., Фридман Д.М., Саймон С.Л. и др. Профессиональное ионизирующее излучение и риск базальноклеточного рака у радиологических технологов США (1983–2005).Occup Environ Med. 2015; 72: 862–869. pmid: 26350677
12. 12. Санлоренцо М., Венер М.Р., Линос Э., Корнак Дж., Кайнц В.К., Пош С. и др. Риск меланомы у пилотов авиакомпаний и бортпроводников — метаанализ. JAMA Dermatol. 2015; 151 (1): 51–58. pmid: 25188246
13. 13. Раджараман П., Дуди М.М., Ю. К.Л., Престон Д.Л., Миллер Дж.С., Сигурдсон А.Дж. и др. Риск рака в США. Технологи-радиологи, работающие с интервенционными процедурами под рентгеноскопическим контролем, 1994–2008 гг. AJR. 2016; 206: 1–8.pmid: 26700330
14. 14. Кошурникова Н.А., Гилберт Е.С., Сокольников М., Хохряков В.Ф., Миллер С., Престон Д.Л. и др. Рак костей у рабочих «Маяка». Radiat Res. 2000. 154 (3): 237–245. pmid: 10956428
15. 15. Шильникова Н.С., Престон Д.Л., Рон Э., Гилберт Е.С., Василенко Е.К., Романов С.А. и др. Риск смертности от онкологических заболеваний у работников атомного комплекса «Маяк». Radiat Res. 2003. 159 (6): 787–798. pmid: 12751962
16. 16. Гилберт Е.С., Кошурникова Н.А., Сокольников М.Е., Шильникова Н.С., Престон Д.Л., Рон Э. и др.Рак легких у рабочих «Маяка». Radiat Res. 2004. 162 (5): 505–516. pmid: 15624305
17. 17. Гилберт Е.С., Сокольников М.Е., Престон Д.Л., Шонфельд С.Ю., Шадилов А.Е., Василенко Е.К. и др. Риски рака легких из-за плутония: обновленный анализ данных когорты рабочих «Маяк». Radiat Res. 2013. 179 (3): 332–342. pmid: 23391147
18. 18. Сокольников М.Е., Гилберт Е.С., Престон Д.Л., Рон Э., Шильникова Н.С., Хохряков В.В. и др. Смертность от рака легких, печени и костей у работников ПО «Маяк».Int J Cancer. 2008; 123 (4): 905–911. pmid: 18528867
19. 19. Хантер Н., Кузнецова И.С., Лабутина Е.В., Харрисон Дж.Д. Заболеваемость солидными раками, кроме легких, печени и костей, у рабочих Маяка: 1948–2004 гг. BJC. 2013; 109: 1989–1996. pmid: 24022197
20. 20. Кузнецова И.С., Лабутина Е.В., Хантер Н. Радиационные риски заболеваемости лейкемией, лимфомой и множественной миеломой в когорте «Маяк»: 1948–2004 гг. Plos One. 2016; 11 (9): e0162710. pmid: 27631102
21. 21. Всемирная организация здоровья.Руководство МКБ-9 по кодированию болезней, травм и причин смерти / пересмотр 1975 г. Женева: ВОЗ; 1980. P.752.
22. 22. Азизова Т.В., Дэй Р.Д., Уолд Н., Мюрхед С.Р., О’Хаган Дж.А., Сумина М.В. и др. Медико-дозиметрическая база данных «Клиника» работников ПО «Маяк»: состав, характеристики и перспективы использования. Здоровье Phys. 2008. 94: 449–58. pmid: 18403966
23. 23. Василенко Е.К., Шерпельц Р.И., Горелов М.В., Стром Д.Д., Сметанин. МОЙ. Реконструкция наружной дозиметрии для работников ПО «Маяк».Ежегодное собрание Общества физиков здоровья специальной сессии AAHP, 2010 г. (http://www.hps1.org/aahp/public/AAHP_Special_Sessions/ 2010_Salt_Lake_City / pm-1.pdf)
24. 24. ICRP, 2007. Рекомендации Международной комиссии по радиологической защите 2007 года. Публикация МКРЗ 103. Ann. МКРЗ 37 (2–4). pmid: 18082557
25. 25. Престон Д., Любин Дж., Пирс Д., МакКонни М. Руководство пользователя Epicure. Хирософт, Сиэтл, Вашингтон; 1993
26. 26. Сон Ф, Куреши А.А., Гао Х, Ли Т, Хан Дж.Курение и риск рака кожи: проспективный анализ и метаанализ International Journal of Epidemiology. 2012; 41: 1694–1705. pmid: 23064412
27. 27. Рота М., Паскуали Э., Беллокко Р., Багнарди В., Скотти Л., Ислами Ф. и др. Риск употребления алкоголя и меланомы кожи: систематический обзор и метаанализ «доза – риск». Британский журнал дерматологии. 2014. 170 (5): 1021–1028. pmid: 24495200
28. 28. Йен Х., Дхана А., Оховат Дж. П., Куреши А., Кеум Н., Чо Э. Потребление алкоголя и риск немеланомного рака кожи: систематический обзор и метаанализ зависимости реакции от дозы.Br J Dermatol. 2017; 177 (3): 696–707. pmid: 28745396
29. 29. Ouyang YH. Рак кожи головы и шеи. Semin Plast Surg. 2010. 24: 117–126. pmid: 22550432
30. 30. Gandini S, Sera F, Cattaruzza MS, Pasquini P, Zanetti R, Masini C, et al. Мета-анализ факторов риска меланомы кожи: III. Семейный анамнез, актинические повреждения и фенотипические факторы. Европейский журнал рака. 2005; 41; 2040–2059. pmid: 16125929
31. 31. Халези М., Уайтмен, округ Колумбия, Дои САР, Кларк Дж., Кимлин М.Г., Нил RE.Кожные маркеры фотоповреждений и риска базальноклеточного рака кожи: метаанализ. Биомаркеры эпидемиоло рака Пред. 2013. 22 (9): 1483–9.
32. 32. Петрова Г.В., Каприн А.Д., Грецова О.П., Старинский В.В. Злокачественные новообразования в России — обзор статистических данных за 1993–2013 гг. Москва: Московский научно-исследовательский онкологический институт им. П.А. Герцен, филиал ФГБУ «Национальный медицинский радиологический научный центр» Минздрава России, 2015 г.-П. 250
33. 33. Злокачественные новообразования в России в 2014 году. Заболеваемость и смертность. Эд. Карпин А.Д., Старинский В.В., Петрова Г.В. Москва: Московский научно-исследовательский онкологический институт им. П.А. Герцен; 2016.

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно.Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом.Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу.Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта.Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Прямое масс-спектрометрическое исследование очагов эндометриоза на разных участках »Акушерство и гинекология

Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии Минздрава России, 117997 Москва, пр. Ак.Опарина ул. 4, Россия; Московский физико-технический институт, г. Долгопрудный, 141700, Институтский пер. 9, Московская область, Россия; Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М.Сеченова Минздрава России, г. Москва, 119991, ул. Малая Пироговская, 8/21, Россия

эндометриоз

прямая масс-спектрометрия

липидомика

фосфатидилхолин

сфингомиелин

1. Таблица.Сравнение уровней липидов трех типов тканей: эндометриоз брюшины, эндометриома яичника, эндометрий
2. Рисунок. Схема ионного источника для прямого анализа тканей методом ионизации электрораспылением

1. Адамян Л.В., Андреева Е.Н., Аполихина И.А., Беженар В.Ф., Геворкян М.А., Гус А.И., Демидов В.Н., Калинина Е.А., Леваков С.А., Марченко Л.А., Попов А.А., Сонова М.М., Хашукоева А.З., Чернухаоцкая Е. Эндометриоз: диагностика, лечение и реабилитация.Федеральные рекомендации по ведению пациентов. Москва: Российское общество акушеров-гинекологов; 2013.

2. Чупрынин В.Д., Мельников М.В., Буралкина Н.А., Чурсин В.В., Вередченко А.В., Бурыкина П.Н., Хилькевич Е.Г., Гусь А.И., Павлович С.В. Современные представления о тактике ведения пациентов с инфильтрирующим эндометриозом. Акушерство и гинекология / Акушерство и гинекология. 2015; (11): 16-22.

3. Дмовски В.П., Дин Дж., Шен Дж., Рана Н., Фернандес Б. Б., Браун Д. П. Апоптоз железистых и стромальных клеток эндометрия у женщин с эндометриозом и без него. Гм. Репродукция. 2001; 16 (9): 1802-8.

4. Винатье Д., Коссон М., Дюфур П. Эндометриоз — это заболевание эндометрия? Евро. J. Obstet. Гинеколь. Репродукция. Биол. 2000; 91 (2): 113-25.

5. Ватанабе Х., Канзаки Х., Нарукава С., Иноуэ Т., Кацурагава Х., Канеко Ю., Мори Т. Экспрессия Bcl-2 и Fas в эутопическом и эктопическом эндометрии человека во время менструального цикла в зависимости от апоптоз клеток эндометрия.Являюсь. J. Obstet. Gynecol.1997; 176 (2): 360-8.

6. Гебель Х.М., Браун Д.П., Тамбур А., Фрейм Д., Рана Н., Дмовски В.П. Спонтанный апоптоз ткани эндометрия нарушается у женщин с эндометриозом. Fertil. Стерил. 1998; 69 (6): 1042-7.

7. Оцуки Ю. Апоптоз эндометрия человека: методы обнаружения апоптоза и передача сигналов. Med. Electron Microsc. 2001; 34 (3): 166-73.

8. Ямасита Х., Оцуки Ю., Мацумото К., Уэки К., Уэки М. Фас-лиганд, антиген Fas и экспрессия Bcl-2 в эндометрии человека во время менструального цикла.Мол. Гм. Репродукция. 1999; 5 (4): 358-64.

9. Табибзаде С., Конг К.Ф., Сатьясваруп П.Г., Зупи Э., Маркони Д., Романини К. и др. Четкое региональное и зависящее от менструального цикла распределение апоптоза в эндометрии человека. Возможная регуляторная роль Т-клеток и TNF-a. Endocr. J. 1994; 2: 87-95.

10. Вук К., Хевир Н., Рибич-Пучель М., Хаарпайнтнер Г., Щерб Х., Осредкар Дж. И др. Открытие фосфатидилхолинов и сфингомиелинов в качестве биомаркеров эндометриоза яичников.Гм. Репродукция. 2012; 27 (10): 2955-65.

11. Заварзин В.А., Зайнагетдинов Р.З., Какурина Г.В., Пурлик И.Л., Серебров В.Ю., Кондакова И.В. Роль сфингомиелина и церамида в регуляции пролиферации и апоптоза в клетках гепатоцеллюлярной карциномы. Сибирский онкологический журнал. Сибирский онкологический журнал. 2006; 4: 41-5.

12. Борисова А.В., Козаченко А.В., Стародубцева Н.Л., Бугрова А.Е., Франкевич В.Е., Адамян Л.В. Диагностика наружного генитального эндометриоза методами масс-спектрометрии.Проблемы репродукции. 2015; 21 (6): 67-76.

13. Кононихин А., Жванский Е., Шурхай В., Попов И., Бормотов Д., Костюкевич Ю., Карчугина С., Индейкина М., Бугрова А., Стародубцева Н., Потапов А. ., Николаев Е. Новый метод прямой ионизации спреем из ткани для масс-спектрометрического анализа опухолей головного мозга человека. Анальный. Биоанал. Chem. 2015; 407 (25): 7797-805.

14. Волд С., Сьёстрём М., Эрикссон Л. PLS-регрессия: основной инструмент хемометрики. Хемометр. Intell.Лаборатория. Syst. 2001; 58 (2): 109-30.

15. Эрикссон Л., Йоханссон Э., Кеттане-Волд Н., Уолд С. Введение в многомерный и многомерный анализ данных с использованием методов проекции (PCA и PLS). Умео, Швеция: Umetrics AB; 1999: 213-25.

16. Мерфф Х.Дж., Шу Х.О., Ли Х., Ян Г., Ву Х., Цай Х. и др. Диетические полиненасыщенные жирные кислоты и риск рака груди у китайских женщин: проспективное когортное исследование. Int. J. Рак. 2011; 128 (6): 1434-41.

17. Сантулли П., Марселлин Л., Ноэль Дж. К., Боргезе Б., Файт И., Вайман Д. и др. Нарушение регуляции пути сфингозина в тканях эндометриоида. Fertil. Стерил. 2012; 97 (4): 904-11.

18. Ли Дж., Еганех Б., Эрмини Л., Пост М. Сфинголипиды как регуляторы клеточной судьбы при развитии и заболеваниях легких. Апоптоз. 2015; 20 (5): 740-57.

19. Ли Й.Х., Тан К.В., Венкатратнам А., Тан К.С., Цуй Л., Ло С.Ф. и другие. Нарушение регуляции метаболизма сфинголипидов при эндометриозе. J. Clin. Эндокринол. Метаб. 2014; 99 (10): E1913-21.

20. Funk C.D., Song W.C., FitzGerald G.A. Простагландины и другие липидные медиаторы в репродуктивной медицине. 7-е изд. т. 4. Эльзевир; 2013.

21. Гундерманн К. Последние данные о механизмах действия и клинической эффективности эссенциальных фосфолипидов. Клинические перспективы гастроэнтерологии, гепатологии. 2002; 2: 28-31.

22. Е. X., Чун Дж. Передача сигналов лизофосфатидной кислоты (LPA) в репродукции позвоночных. Тенденции эндокринол. Метаб. 2010; 21 (1): 17-24.

23. Wocławek-Potocka I., Rawińska P., Kowalczyk-Zieba I., Boruszewska D., Sinderewicz E., Waśniewski T., Skarzynski D.J. Передача сигналов лизофосфатидной кислоты (LPA) в репродуктивном тракте человека и жвачных животных. Медиаторы Inflamm. 2014; 2014: 649702.

24. Сантанам Н., Фарманн Дж., Кук К., Кинг Х., Эглетон Р., Доули Б.Л. Окисленные липопротеины — это предполагаемые молекулы боли в перитонеальной жидкости женщин с эндометриозом. Fertil. Стерил. 2010; 94 (4): S145.

25. Павлович З., Бакович М. Регулирование гомеостаза фосфатидилэтаноламинов — критическая роль CTP: фосфоэтаноламинцитидилилтрансферазы (Pcyt2). Int. J. Mol. Sci. 2013; 14 (2): 2529-50.

26. Луна А.С., Сараива Г.К., Филхо О.М., Кьерис Г.О., Нето С.С., Кукковиа И.М., Мария Д.А. Потенциальная противоопухолевая активность новых липосом DODAC / PHO-S. Int. J. Nanomedicine. 2016; 11: 1577-91.

27. Титов В.Н. Физиологические основы транспорта жирных кислот в крови. Лаборатория. 1997; 9: 240-55.

28. Нишизука Ю. Протеинкиназа С и передача липидных сигналов для устойчивых клеточных ответов. FASEB J. 1995; 9 (7): 484-96.

29. Джаядев С., Лю Б., Белавска А.Е., Ли Дж.Й., Назер Ф., Пушкарева М.Ю. и другие. Роль церамида в остановке клеточного цикла. J. Biol. Chem. 1995; 270 (5): 2047-52.

30. Аль-Зофби В., Хуанг Дж., Парамасиван Г.С., Тилль Х., Пихлер М., Гертл-Лакнер Б., Хефлер Г. Макросреда опухоли и метаболизм. Семин. Онкол. 2014; 41 (2): 281-95.

Поступила 20.05.2016

Принята 27.05.2016

Для цитирования: Борисова А.В., Стародубцева Н.Л., Козаченко А.В., Чаговец В.В., Салимова Д.Ф., Канонихин А.С., Коган Е.А., Адамян Л.В., Франкевич В.Е., Сухих Г.Т. Прямое масс-спектрометрическое исследование очагов эндометриоза на различных участках. Акушерство и гинекология / Акушерство и гинекология. 2016; (9): 101-8.
http://dx.doi.org/10.18565/aig.2016.9.101-8

lisa kern | PubFacts

J, выживший после рака, 4 марта 2021 г.Epub 2021 4 марта.

Weill Cornell Medicine, Нью-Йорк, Нью-Йорк, США.

Методы : Используя реестр рака эпиднадзора, эпидемиологии и конечных результатов, связанный с заявками Medicare, мы включили получателей помощи в возрасте 67+ лет с диабетом и инцидентом, неметастатическим раком груди, простаты или колоректальным раком в период с 2008 по 2013 год. через 12 месяцев после постановки диагноза были предоставлены услуги по лечению диабета: (1) тест на HbA1c, (2) обследование глаз и (3) тест на липопротеины низкой плотности (ЛПНП). Используя модифицированные модели Пуассона с устойчивыми стандартными ошибками, мы исследовали каждый результат отдельно.

Результаты : Мы включили 34 643 участника программы Medicare с диабетом и раком. Средний возраст на момент постановки диагноза был 76,1 (стандартное отклонение 6,2), 47,2% составляли женщины; У 35% был рак груди, у 24% — рак прямой кишки и у 41% — рак простаты. В течение 12 месяцев после постановки диагноза рака 82,4% прошли тест на HbA1c, 55,3% прошли проверку зрения, 77,8% прошли тест на ЛПНП и 42,0% прошли все три теста. По сравнению с неиспаноязычными белыми чернокожими на 3% (95% ДИ 0,95-0,98) меньше вероятность пройти тест HbA1c, на 10% (95% ДИ 0.89-0,92) с меньшей вероятностью получат тест на ЛПНП и на 8% (95% 0,89-0,95) с меньшей вероятностью получат экзамен на глаз. Чернокожие и выходцы из Латинской Америки были на 16% (95% ДИ 0,81–0,88) и на 7% (0,88–0,98) менее склонны пройти все три теста с учетом факторов, влияющих на результат. Расовые / этнические различия сохранялись в зависимости от типа рака.

Заключение : Чернокожие и латиноамериканцы с раком груди, простаты, колоректального рака и диабетом получали меньше лечения диабета после постановки диагноза рака, чем белые неиспаноязычные.Различия не объяснялись социально-экономическими факторами или клинической необходимостью.

Последствия для выживших от рака : Наши результаты вызывают обеспокоенность, учитывая высокую распространенность диабета и плохие исходы рака среди расовых / этнических меньшинств. Следующим шагом в этом направлении исследований является определение того, почему меньшинства с меньшей вероятностью получат комплексную помощь при диабете, чтобы разработать целевые стратегии, направленные на повышение эффективности лечения диабета для этих уязвимых групп населения.