Оборудование: фотографии животных; выставка книг с иллюстрациями Е. Чарушина; гуашь, акварель, черный фломастер.

Ход урока

I. Организационный момент.

ШКОЛЬНИКУ НА ПАМЯТЬ

Если хочешь строить мост,

Наблюдать движенье звезд,

Управлять машиной в поле

Иль вести машину ввысь –

Хорошо работай в школе,

Добросовестно учись.

                             С. Маршак

Проверка готовности учащихся к уроку.

II. Повторение изученного материала.

– С каким мастером мы познакомились? (С Мастером Изображения.)

– Чему учил нас Мастер Изображения на прошлом уроке? (Он учил нас видеть, подмечать в обычных предметах что-то интересное, особенное.)

– Еще мы с вами учились сравнивать форму листьев и деревьев.

– Давайте рассмотрим изображения животных на с. 18 и 19.

– Сравните форму разных животных. Чем они отличаются друг от друга. Что общего?

III. Сообщение темы и цели урока.

– Сегодня на уроке вы научитесь изображать предметы необычным способом. Каким, вы узнаете позже, а поможет нам Мастер… (Дети отвечают: «Изображения».)

IV. Введение в тему урока.

1. Вступительная беседа.

– Вы любите сказки?

– Послушайте внимательно одну интересную сказку, написанную автором учебника.

– О чем эта сказка?

– Почему клякса считала себя несчастной? (Ее огорчила бумага.)

– Кто согласился помочь кляксе? (Мастер Изображения.)

– Как вы думаете, в кого превратилась клякса-пятно? (Дети высказывают свои предположения.)

V. Педагогический рисунок.

Учитель демонстрирует рисунок Винни-Пуха с шариком, полученный из пятна.

VI. Работа по учебнику.

– Рассмотрите рисунки на с. 21. Какие зверушки получились из обычного пятна? (Собачка, зайчик.)

– На нашей выставке книг есть книги Е. Чарушина «Тюпа, Томка и сорока», «Про Томку» и другие. Иллюстрации к книге нарисовал автор. Он воспользовался приемом изображения пятном. Посмотрите, какие забавные зверушки получились!

– Сравните работы художников на с. 22–23.

– Обратите внимание, что тень на стене от руки, – это тоже пятно.

– Каких зверушек изображают люди?

Вывод. Изображение пятном – это интересный и своеобразный прием изображения, позволяющий вообразить, где в природе можно увидеть что-либо подобное, пофантазировать, дорисовать.

Каждый день по утрам

Делаем зарядку (ходьба на месте).

Очень нравится нам

Делать по порядку (приседания):

Весело шагать (ходьба),

Руки поднимать (руки вверх),

Приседать и вставать (приседания),

Прыгать и скакать (прыжки).

VII. Творческая практическая деятельность учащихся.

– Хотите ли вы научиться изображать пятном?

– Вспомним правила работы с кистью, краской и водой.

– Сделайте пятно на листе бумаге и превратите его в изображение зверушки, дорисовав ему лапы, хвост, уши, то есть все, что необходимо, чтобы разглядеть в вашем рисунке необыкновенного зверя.

– Дорисовывать можно черным фломастером.

VIII. Итог урока.

1. Выставка работ учащихся и их обсуждение.

– Молодцы, все постарались. Получилось много разных зверушек. Вам понравилось рисовать пятном?

2. Обобщение.

– Что нового узнали сегодня на уроке? Чему учились? (Учились изображать пятном.)

3. Уборка рабочего места.

«Изображать можно пятном»

Тема: «Изображать можно пятном».

Вид деятельности: урок-игра.

Тип урока: комбинированный.

Цель урока: познакомить с кляксографией, превратить пятно-кляксу в изображение животного, птицы и т.д.

Задачи: развивать умение видеть, вглядываться, узнавать того, кто «прячется» в пятне. Развивать воображение, фантазию, разнообразить восприятие. Формировать любовь и интерес к изобразительной деятельности. Воспитывать аккуратность и внимание.

Методы обучения: просмотр, прослушивание, беседа, игра, игра с красками.

Оборудование урока:

Для учителя: мультипликационный фильм «Трям! Здравствуйте!», репродукции, фотографии, детские рисунки, оборудование для просмотра мультипликационного фильма и слайдов. Бумага, акварельные краски, кисти, баночка с водой, салфетка.

Для учащихся: баночка с водой, акварельные краски, кисти, салфетка, бумага.

План занятия.

1. Организационный момент.

2. Просмотр мультипликационного фильма «Трям! Здравствуйте!»

3. Беседа.

4. Игра «Фантазируем».

5. Практическая работа — игра с красками «Весёлая клякса»

6. Просмотр и обсуждение работ.

7. Заключительный этап.

Ход урока.

Организационный момент.

Выполнение правил аккуратности, подготовка красок к работе.

Эмоциональный настрой на урок.

Демонстрация мультипликационного фильма.

Беседа.

— Вам понравился мультфильм? (Ответы детей).

— Как называлась страна, о которой говорится в мультфильме?

-Откуда появилась эта страна?

— На чём отправились друзья в волшебную страну? (Ответы детей).

— Ребята, вы заметили, что урок у нас сегодня необычный? Мы тоже, как герои мультфильма, будем сегодня фантазировать! Вокруг нас окружает много самых обычных предметов, растений, вещей и т.д.. Но если присмотреться и добавить немного фантазии, то можно увидеть в облаках –

сказочный корабль, в струящемся дыме – Змея Горыныча, в старом пне – старичка-лесовичка. А. что интересного видели вы? (Ответы детей). Хорошо! На свете всё на всё похоже.

Учитель читает стихотворение и показывает к нему иллюстрации.

На свете все на всё похоже.

На свете всё

На всё

Похоже:

Змея –

На ремешок

Из кожи,

Луна –

На круглый глаз

Огромный,

Журавль –

На тощий кран подъёмный,

Кот полосатый –

На пижаму,

Я на тебя,

А ты на маму!

Р. Сеф

Игра «Фантазируем».

— А теперь давайте поиграем и пофантазируем. (Учитель показывает слайды).

Рассмотрите внимательно изображения и постарайтесь увидеть, кто в нём спрятался.

— Видите, ребята, сколько интересного можно увидеть, если внимательно присмотреться и пофантазировать.

— Понравилось играть? Так давайте играть дальше! Только на этот раз играть будем с красками.

Практическая работа – игра с красками «Весёлая клякса».

— Берём лист бумаги, обмакиваем кисть в краску и капаем разноцветные капли на него, когда всё готово, накрываем сверху чистым листом и приглаживаем ладонью (учитель демонстрирует этапы работы).

— Открываем! И что же мы видим?! Кляксу!

Учитель читает стихотворение «Клякса».

Кляксу Кисточка для смеха

Нам поставит – вот потеха!

Клякса эта очень злится:

Кляксой быть мне не годиться,

Не буду кляксой – это проза,

Буду ромашкой или розой…

Радостно на свете жить,

Если с кисточкой дружить,

Чтобы сказку рассказать

Можно кисточку позвать…

— Рассмотрите внимательно каждый свою кляксу с разных сторон.

— На что или на кого похожа ваша клякса? Кляксу можно дорисовать, чтобы другим стало понятно, кто это или что это. Со второй кляксы может получиться что-то совсем другое, фантазируйте!

Дети работают самостоятельно, учитель проходит по рядам и оказывает индивидуальную помощь.

Просмотр и обсуждение работ.

Просмотр и обсуждение работ. Выделить наиболее интересные работы, предложить детям рассказать о своём изображении дать ему название или имя.

Заключительный этап.

Уборка рабочего места.

Анкета – заявка

Участников муниципального тура Российского конкурса

профессионального мастерства педагогов «Мой лучший урок».

1. Участник, участники :

1. Название образовательного учреждения Муниципальное образовательное учреждение средняя общеобразовательная школа №3 ст. Фастовецкой.

Полный адрес 352101 Россия, Краснодарский край, Тихорецкий район, станица Фастовецкая, ул. Ленина №9

1. Федеральный телефонный код города 886196 телефон 45356 факс 45356

E-mail [email protected]

1. Должность, место работы

Ростовцева Светлана Викторовна, учитель изобразительного искусства МОУ СОШ №3 ст. Фастовецкой

1. Ф. И. О. руководителя образовательного учреждения:

Батютин Александр Викторович

Дата заполнения 19. 09. 2009 год

Директор МОУ СОШ №3 Батютин А. В.

Российский конкурс профессионального педагогического мастерства

«Мой лучший урок»

Урок изобразительного искусства 1 класс

Подготовил и провёл учитель

изобразительного искусства

МОУ СОШ №3 ст. Фастовецкой

Ростовцева Светлана Викторовна

Муниципальное образование Тихорецкий район

2009 год

Разработка урока соответственно с ФГОС по изобразительному искусству 1 класс «Изображать можно пятном»

Тема года: «Ты изображаешь, украшаешь и строишь»

Тип урока: изучение нового материала, закрепление нового материала.

Цель урока: овладевать первичными навыками изображения на плоскости с помощью пятна, навыками работы с кистью и краской. Выполнить практическую работу – превращение произвольно сделанного краской и кистью пятна в изображение зверушки (дорисовать лапы, уши, хвост и т.д.).

Основные термины и понятия: тень, пятно.

Межпредметные связи: литература, география, математика.

Методы используемые на уроке: словесный, наглядный, практическая работа, проблемно – поисковый, объяснительно-иллюстративный, проблемный, стимулирующий, контрольно-оценочный, диалогический.

Принципы используемые на уроке: доступность, системность, научность, сознательность и активность, системность и последовательность, прочности, связь теории с практикой.

Форма работы: фронтальная, индивидуальная.

Технологии применяющиеся на уроке: здоровье сберегающая, информационная, эмоционально-художественные и эмоционально-нравственные.

План-конспект урока ИЗО по теме » ИЗОБРАЖАТЬ МОЖНО ПЯТНОМ (урок-сказка)», 1 класс, Школа России

Урок 5
изображать можно пятном (урок-сказка)

Образовательные ресурсы:

 художественные материалы: гуашь, альбом;

 зрительный ряд: фотографии животных; выставка книг с иллюстрациями Е. Чарушина, мультимедийная презентация, подготовленная учителем самостоятельно.

План урока

1. Рассказ учителя «Тень – пример пятна в реальной жизни».

2. «Сказка про кляксу». Творческая практическая деятельность учащихся.

Цели: помочь овладеть первичными навыками изображения на плоскости; учить использовать пятно как одно из главных средств изображения; развивать воображение и аналитические возможности глаза.

Задачи художественного развития учащихся:

 формирование навыков работы краской одного цвета;

 развитие воображения и аналитических возможностей глаза;

 развитие способности к творческому самовыражению.

Формы и методы обучения: объяснительно-иллюстративный; фронтальная и индивидуальная.

УУД (умение учиться).

Регулятивные: создает рисунок на основе пятна неопределенной формы, использует свою фантазию и творческое воображение, оценивает результат своего труда.

Познавательные: развитие воображения и аналитических возможностей глаза; знакомство с пятном – одним из главных средств изображения.

Личностные: овладение первичными навыками изображения на плоскости, формирование навыков работы красками, умение использовать пятно для достижения своего замысла; проявление авторского стиля; повышение культуры речевого общения; развитие способностей к творческому самовыражению.

Коммуникативные: умеет обмениваться мнениями, слушать одноклассников и учителя; обсуждает индивидуальные результаты художественно-творческой деятельности.

Сценарий урока

I. Организационный момент.

Личностные УУД: развитие познавательного интереса, формирование определенных познавательных потребностей и учебных мотивов; положительное отношение к школе и адекватное представление о школе.

Школьнику на память

Если хочешь строить мост,

Наблюдать движенье звезд,

Управлять машиной в поле

Иль вести машину ввысь –

Хорошо работай в школе,

Добросовестно учись.

С. Маршак

Проверка готовности учащихся к уроку.

II. Повторение изученного материала.

Познавательные и коммуникативные УУД.

– С каким мастером мы познакомились? (С Мастером Изображения.)

– Чему учил нас Мастер Изображения на прошлом уроке? (Он учил нас видеть, подмечать в обычных предметах что-то интересное, особенное.)

– Еще мы с вами учились сравнивать форму листьев и деревьев. Давайте рассмотрим изображения животных на с. 18 и 19. Сравните форму разных животных. Чем они отличаются друг от друга? Что общего?

III. Сообщение темы и цели урока. Постановка и формулирование учебной задачи.

Познавательные УУД: самостоятельное выделение и формулирование познавательной цели, умение делать умозаключения и выводы в словесной форме.

Коммуникативные УУД: умение с достаточной полнотой и точностью выражать свои мысли в соответствии с задачами и условиями коммуникации.

– Сегодня на уроке вы научитесь изображать предметы необычным способом. Каким, вы узнаете позже, а поможет нам Мастер… (Дети отвечают: «Изображения».)

IV. «Сказка про Кляксу». Введение в тему урока.

1. Эвристическая беседа.

Познавательные УУД: стремится к расширению своей познавательной сферы, старается производить логические мыслительные операции (анализ, сравнение) для решения познавательной задачи.

– Вы любите сказки? Послушайте внимательно одну интересную сказку, написанную автором учебника. (Читает.)

– О чем эта сказка?

– Почему Клякса считала себя несчастной? (Ее огорчила бумага.)

– Кто согласился помочь Кляксе? (Мастер Изображения.)

– Как вы думаете, в кого превратилась Клякса-пятно?

Дети высказывают свои предположения.

V. Педагогический рисунок.

Коммуникативные УУД: умение с достаточной полнотой и точностью выражать свои мысли в соответствии с задачами и условиями коммуникации.

Учитель демонстрирует изображение Винни-Пуха с шариком, полученное из пятна.

VI. Работа по учебнику.

Познавательные УУД: умение работать с учебной книгой – осуществлять поиск и сравнивать рисунки разных художников, выполненные приемом изображения пятном.

– Рассмотрите рисунки на с. 21. Какие зверушки получились из обычного пятна? (Собачка, зайчик.)

– На нашей выставке книг есть книги Е. Чарушина «Тюпа, Томка и сорока», «Про Томку» и другие. Иллюстрации к книге нарисовал сам автор. Он воспользовался приемом изображения пятном. Посмотрите, какие забавные зверушки получились!

– Сравните работы художников на с. 22–23.

– Обратите внимание, что тень на стене от руки – это тоже пятно.

– Каких зверушек изображают люди?

Вывод: изображение пятном – это интересный и своеобразный прием изображения, позволяющий вообразить, где в природе можно увидеть что-либо подобное, пофантазировать, дорисовать.

Регулятивные УУД: осуществляет пошаговый контроль своих действий, ориентируясь на показ движений учителя, а затем самостоятельно оценивает правильность выполнения действий на уровне адекватной ретроспективной оценки.

Дети выполняют движения, о которых говорится в стихотворении, повторяя за учителем слова.

Каждый день по утрам

Делаем зарядку, Ходьба на месте.

Очень нравится нам

Делать по порядку: Приседания.

Весело шагать, Ходьба.

Руки поднимать, Руки вверх.

Приседать и вставать, Приседания.

Прыгать и скакать! Прыжки.

VII. Творческая практическая деятельность учащихся.

Регулятивные УУД: демонстрирует умение изображения пятном при создании своего авторского рисунка, используя выразительные свойства художественного материала.

Личностные УУД: демонстрирует способность моделировать новые образы, проявляя творческое воображение и фантазию; ценностно-смысловая ориентация в отношении к школе, учению и поведению в процессе учебной деятельности; соблюдает организованность, дисциплину на уроке.

Познавательные УУД: самостоятельное выделение и формулирование познавательной цели, умение делать умозаключения и выводы в словесной форме.

Коммуникативные УУД: умение с достаточной полнотой и точностью выражать свои мысли в соответствии с задачами и условиями коммуникации; адекватно воспринимает оценку учителя и высказывания одноклассников с отзывами о выполненном рисунке.

– Хотите ли вы научиться изображать пятном?

– Вспомним правила работы кистью, краской и водой. Сделайте пятно на листе бумаге и превратите его в изображение зверушки, дорисовав ему лапы, хвост, уши, то есть все что необходимо, чтобы разглядеть в вашем рисунке этого зверя. Дорисовывать можно черным фломастером.

VIII. Итог урока. Рефлексия.

1. Выставка работ учащихся и их обсуждение.

Регулятивные УУД: оценивает и анализирует результат своего труда, определяет то, что у него лучше всего получилось, а при необходимости вносит некоторые изменения в рисунок.

– Молодцы, все постарались. Получилось много разных зверушек. Вам понравилось рисовать пятном?

2. Обобщение.

Коммуникативные УУД: умение с достаточной полнотой и точностью выражать свои мысли в соответствии с задачами и условиями коммуникации.

– Что нового узнали сегодня на уроке? Чему учились? (Учились изображать пятном.)

3. Уборка рабочего места.

Личностные УУД: ценностно-смысловая ориентация в отношении к школе, учению и поведению в процессе учебной деятельности; соблюдает организованность, дисциплину на уроке, действует согласно памятке обращения с художественными материалами и в соответствии с правилами работы; сформировано умение организовывать свое рабочее место и приводить его в порядок по окончании работы.

Красноярский край оказался белым пятном на карте газификации регионов

«Газпром» опубликовал программу газификации регионов России на 2021–2025 год в виде интерактивной карты. Красноярского края в планах не оказалось. 

Карта опубликована на сайте компании «Газпром Межрегионгаз», которая реализует госпрограммы по газификации страны.

«Жители каждого региона смогут проверить по карте, какие магистрали и объекты уже построены на данный момент, как будет осуществляться строительство вплоть до 2025 года», – сообщают в компании.

На изображении часть России до Урала покрыта густой сетью газопроводов, ну а на территории края – белое пятно и три газовые вышки. При этом края даже нет в списке регионов, для которых излагаются подробности программы.

Впрочем, в «Фейсбуке» ПАО «Газпром» та же карта, опубликованная 18 февраля, выглядит немного иначе. Куда делся красноярский пунктир на сайте, непонятно.

Напомним, в крае возлагают большие надежды на проект «Сила Сибири – 2», согласно которому трасса магистрального газопровода соединит месторождения Ямала с Дальним Востоком через Красноярский край, причем пройдет по Сухобузимскому району. Это сравнительно экономичный вариант по сравнению с теми, которые предлагались раньше.

В правительстве рассчитывали, что строительные работы могут начаться уже в 2023 году.

Проект обсуждался, в частности, на заседании в Совете Федерации с участием представителей «Газпрома» и губернаторов сибирских регионов. Кроме того, в мае 2020 начались работы по актуализации Генеральной схемы газоснабжения и газификации края по поручению президента Владимира Путина.

Вопрос газификации имеет огромную важность для края и для Красноярска, который является одним из самых загрязненных городов России в том числе из-за использования угольного топлива.

Если планы «Силы Сибири – 2» начнут воплощаться в жизнь, красноярцы могут получить газ в 2025–2027 годах, сообщалось в конце 2020 года. Актуальный комментарий в правительстве края ДЕЛА.ru пообещали предоставить позже.

Развитие событий:

Программа «Цветик-семицветик»

Тема № 1. Вводное занятие (2 часа)

Тема № 2. «Радуга-дуга» (4 часа)

Тема № 3. «Ахроматические цвета. Серый» (2 часа)

Тема № 4. «Светлый-темный» (2 часа)

Тема № 5. «Теплые-холодные» (2 часа)

Тема № 6. «Контрастные цвета» (2 часа)

Тема № 7. «Сближенные цвета» (2 часа)

Тема № 8. «Летняя мозаика» (2 часа)

Тема № 9. «Осенний букет» (2 часа)

Тема № 10. «Знак Зодиака» (4 часа)

Тема № 11. «Цветные квадратики» (2 часа)

Тема № 12. «Рисуем запахи» (2 часа)

Тема № 13. «Натюрморт в технике «Пуантилизм»» (4 часа)

Тема № 14. «Пуантилизм в графике» (4 часа)

Тема № 15. «Животные, птицы». Техника «Пуантилизм» (6 часов)

Тема № 16. «Животные Африки» (6 часов)

Тема № 17. «Сказочная птица» (4 часа)

Тема № 18.  «Сказочный  замок» (2 часа)

Тема №19. «Чудесный  лес» (2 часа)

Тема № 20. «Ночь над городом» (4 часа)

Тема № 21. «Горный пейзаж» (4 часа)

Тема № 22. «Нитяные картинки» (2 часа)

Тема № 23. «Роза» (2 часа)

Тема № 24. «Рельефный рисунок» (2 часа)

Тема № 25. «Груша, яблоко» (2 часа)

Тема № 26. «Аппликация из бумажных шариков» (4 часа)

Тема № 27. «Мраморная бумага для упаковки подарка» (2 часа)

Тема № 28. «Беспорядочные узоры» (2 часа)

Тема № 29. «Изображение пятном» (2 часа)

Тема № 30. «Изготовление панно» (6 часов)

Тема № 31. «Изготовление открыток» (2 часа)

Тема № 32. «Варежки, валенки» (2 часа)

Тема № 33. «Пейзаж» (4 часа)

Тема № 34. «Портрет» (4 часа)

Тема № 35. «Создание образов насекомых, животных, растений» (4 часа)

Тема № 36. «Создание композиции из растительных форм» (2 часа)

Тема № 37. «Создание образов  сказочных героев: принцев, принцесс, фей, разбойников» (4 часа)

Тема № 38. «Создание образа сказочного дворца (города)» (4 часа)

Тема № 39. «Создание образа летнего пейзажа с несколькими планами» (2 часа)

Тема № 40. «Создание образа романтического пейзажа» (2 часа)

Тема № 41. «Натюрморт» (4 часа)

Тема № 42. «Пластилинография» (6 часов)

Тема № 43. «Ниткография» (10 часов)

Тема № 44. Итоговое занятие (6 часов)

Как вы визуализируете свои вестерн-блоты?

Последний шаг в вестерн-блоттинге — визуализация блоттинга — это момент истины, когда вы наконец увидите результаты эксперимента, над которым так долго работали! Есть множество разных способов изобразить вашу кляксу. Выбранный вами метод будет во многом зависеть от типа оборудования, имеющегося в вашей лаборатории, а также от реагентов, которые вы используете для обнаружения сигналов белков.Читайте дальше, чтобы узнать больше о различных методах визуализации…

Рентгеновская пленка

Проявление блоттинга на рентгеновской пленке — традиционный способ обнаружения белковых сигналов. Рентгеновская пленка будет действовать так же, как фотопленка, которая «обесцвечивается» под воздействием света. Когда вы делаете фотографию, изображение отпечатывается на пленке из-за разного количества окружающего света, который достигает поверхности пленки, поэтому фотографии, сделанные в яркий солнечный день, выглядят размытыми, а фотографии, сделанные в темноте, почти черными.В случае разработки блота, свет исходит от химической реакции между пероксидазой хрена (HRP), которая конъюгирована с вашим вторичным антителом, и раствором ECL, который вы используете для обнаружения сигнала. Вы должны быть абсолютно уверены, что обращаетесь с пленкой в ​​закрытой темной комнате, чтобы не подвергать пленку яркому окружающему свету (для новых исследователей это обряд посвящения — подвергать всю коробку с дорогой пленкой свету из-за плохого обращения — стыд, который вы испытываете, не даст вам когда-либо повторить это снова!).

Чтобы проявить свой блот, просто погрузите его поверхность в проявляющий раствор на 1-2 минуты. Затем заверните его в полиэтиленовую пленку, чтобы с нее не капала вода, и бегите в комнату для проявки. В комнате для проявки должен быть красный свет, который можно использовать при работе с пленкой. Поместите блот лицевой стороной вниз на кусок пленки и закройте кассету для проявления — это прижмет блот к пленке и устранит любой другой возможный источник света, гарантируя, что вы получите четкий и сильный сигнал.У каждой комбинации белок-антитело разное оптимальное время воздействия, но обычно пленку нужно экспонировать в течение 1–10 минут. Осторожно открывайте кассету, чтобы не сдвинуть пятно и пленку друг относительно друга (что приведет к появлению размытых полос). Затем вы можете вставить пленку прямо в проявитель — или, если ваша лаборатория действительно старая школа, вы можете проявить пленку вручную, используя последовательные ванны с проявочными растворами. Я видел их повсюду, но никогда не видел, чтобы кто-нибудь ими пользовался!

Проявление рентгеновской пленки может быть медленным и немного беспорядочным, но это дает вам полный контроль над процессом проявления, включая время экспонирования и даже возможность подвергать свою пятно одной и той же части пленки несколько раз.

ПЗС-камера

Использование сканера CCD — это более современный способ визуализации вестерн-блоттинга. Эти формирователи изображения содержат детектор, который преобразует химический сигнал (возникающий в результате реакции HRP-ECL, описанной выше) в цифровое изображение. Эти машины очень похожи на имидж-сканер, который вы использовали бы для изображения геля ДНК — и на самом деле многие тепловизоры могут обрабатывать оба типа обнаружения. Чтобы подготовить свой блот для создания изображения на ПЗС-матрице, вы следуете в основном той же процедуре, что и при подготовке к рентгеновской пленке.Единственное отличие состоит в том, что после того, как вы извлекли мембрану из проявочного раствора, вы можете поместить ее прямо на столик визуализации ПЗС-сканера. Затем тепловизор автоматизирует процесс проявления пятна: просто нажмите кнопку «изображение», и он сделает несколько разных экспозиций пятна и сохранит все изображения, чтобы вы могли сравнить их и выбрать понравившееся.

намного удобнее, чем использование рентгеновской пленки, и они позволяют обойти проблему обращения с пленкой и необходимости использования специальной темной комнаты для проявления.Также приятно иметь ваше изображение уже в цифровой форме, вместо того, чтобы сканировать в физическом блоте после того, как вы его проявили. Однако эти тепловизоры довольно дороги — многие отделы покупают по одному для всех своих исследователей. Кроме того, для некоторых формирователей изображения требуются специальные проявляющие реагенты, как описано ниже.

На что обратить внимание

Независимо от того, используете ли вы рентгеновскую пленку или ПЗС-датчик изображения для изображения своих пятен, необходимо учитывать несколько параметров.Вероятно, наиболее важная проблема — это чувствительность используемого вами метода: насколько ярким является ваш сигнал и насколько сложно его обнаружить? Сила сигнала будет зависеть от множества переменных, в том числе от того, сколько у вас белка и какие концентрации первичных и вторичных антител вы использовали. Если вы используете пленку, то поверхность пятна прижимается вплотную к пленке, поэтому любой исходящий сигнал будет обнаружен. Однако, если вы используете формирователь изображения, свет должен пройти от предметного столика к детектору, который часто находится на расстоянии 12 дюймов или более.Это означает, что сигнал сопоставимой силы необходимо будет экспонировать в течение более длительного времени, чтобы получить тот же конечный результат (или изображение). По этой причине компании, производящие ПЗС-устройства формирования изображений, часто рекомендуют специальные решения для разработки, которые будут генерировать более яркий сигнал.

Для подробного сравнения этих двух различных методов визуализации взгляните на эту предыдущую статью.

Для получения дополнительной информации о вестерн-блоттинге посмотрите это видео от Agrisera.

Вам это помогло? Тогда поделитесь, пожалуйста, со своей сетью.

Визуализация и анализ вестерн-блоттинга | Thermo Fisher Scientific

Хемилюминесцентный вестерн-блоттинг продолжает оставаться фундаментальным приложением для характеристики белков. Рентгеновская пленка традиционно использовалась для захвата хемилюминесцентного сигнала, генерируемого ферментом (пероксидаза хрена и / или щелочная фосфатаза) антителами, конъюгированными. Однако сегодня приборы для визуализации на основе ПЗС-камер (устройства с заряженной связью) быстро вытесняют рентгеновскую пленку.

используются светочувствительные кремниевые чипы, которые преобразуют фотоны в цифровые сигналы. Усовершенствования в конструкции микросхемы позволили разработать чувствительные камеры на основе ПЗС-матриц с охлаждением с более высокими характеристиками захвата света, чем рентгеновская пленка. Мощные охлаждаемые ПЗС-камеры высокого разрешения в таких приборах, как iBright Imaging Systems, позволяют захватывать и анализировать вестерн-блоттинги с большей чувствительностью сигнала, линейностью и динамическим диапазоном, чем рентгеновская пленка.

Линейность сигнала — важный фактор для количественного измерения.Когда соотношение между интенсивностью сигнала и количеством образцов является линейным, неизвестные количества образцов могут быть рассчитаны с использованием простой модели линейной регрессии. Визуально результаты вестерн-блоттинга на рентгеновской пленке могут показывать широкий диапазон линейности сигнала; однако денситометрический анализ показывает, что сигналы на пленке имеют узкий линейный динамический диапазон. Приборы на основе ПЗС-камер имеют увеличенный линейный динамический диапазон по сравнению с рентгеновской пленкой (которая имеет динамический диапазон 1,5 порядка). Камеры в iBright Imaging Systems и других эквивалентных 16-битных системах визуализации на основе ПЗС-матриц отображают как минимум 4-кратный динамический диапазон, что позволяет захватывать сильные хемилюминесцентные сигналы без ущерба для обнаружения слабых полос.Этот широкий динамический диапазон улучшает возможность точной количественной оценки результатов вестерн-блоттинга.

Новые системы документации вестерн-блоттинга оснащаются алгоритмами, помогающими быстро определять оптимальное время экспозиции для хемилюминесцентных и флуоресцентных сигналов. Хемилюминесцентные сигналы могут быть легко насыщены на пленке из-за ограниченного динамического диапазона. Цифровая визуализация позволила визуализировать насыщенность и соответствующим образом настроить время экспозиции, тогда как при использовании пленки эта информация не очевидна.В системах iBright Imaging используется технология Smart Exposure, которая быстро прогнозирует оптимальное время экспозиции, помогая минимизировать вероятность переэкспонирования или недоэкспонирования изображений и, следовательно, необходимость повторных экспозиций для получения желаемого сигнала.

StarrLab — презентации вестерн-блоттинга

Представляя вестерн-блот на совещании или презентации лаборатории Старра, включите следующую информацию:

Название: Дата, белок (белки) и клеточные лизаты, включая анализируемые условия.

Подзаголовок: Ваши инициалы и дата, подробные сведения о которых можно найти в лабораторной книге (см. «Подробная информация о лабораторной книге»).

Исходные изображения блотов

• Эскизы полных изображений блотов
• Имена файлов исходных изображений на машине ProteinSimple

Изображение блота, используемое для денситометрических измерений

• Обозначьте каждую полосу (необязательно: используйте числа и укажите номер ниже)
• Обозначьте размеры полосок
• Обозначьте интересующие полосы с названием белка
• Обозначьте контрольную полосу с названием белка

График денситометрии

• Название: Описание эксперимента
• Этикетка по оси X: Клетки
• Метка, ось Y: Экспрессия белка относительно контрольного лизата , нормализованная до гена домашнего хозяйства .(замените слова красным цветом на ваш конкретный эксперимент)

Подпись и выводы

• Подпись к рисунку: короткий абзац, описывающий метод вестерн-блоттинга.
• Рисунок вывод: Краткий абзац с вашими выводами.

Передача изображений в PowerPoint с помощью FIJI (ImageJ)

• Откройте изображение пятна и изображение лестницы и преобразуйте оба изображения в 8-битные (Изображение> Тип> 8-бит)
• Обычно инвертируйте изображение пятна, чтобы полосы были черный, а фон белый (Правка> Инвертировать)
• Отрегулируйте как изображение пятна, так и изображение лестницы (Изображение> Настроить> Яркость / Контраст), чтобы они выглядели хорошо для вас
• Поверните изображения так, чтобы полосы были на горизонтальной линии (Изображение> Трансформировать> Повернуть), затем отрегулируйте Угол, пока полосы не станут горизонтальными.Используйте линии сетки = 20, билинейную интерполяцию и щелкните поле предварительного просмотра. Убедитесь, что оба изображения повернуты одинаково.
• Очистите все за пределами лестницы на изображении лестницы, нарисовав прямоугольник вокруг дорожки лестницы, затем используйте Правка> Очистить снаружи
• Использование снимка экрана (shift-ctrl-command-4), сделайте снимок изображения лестницы и изображения пятна и вставьте их в PowerPoint.
• Чтобы разместить лестницу, вернитесь в FIJI и щелкните изображение пятна, затем наложите лестницу (Изображение> Наложение> Добавить изображение).Выберите изображение лестницы и установите непрозрачность ~ 75%. Это создаст изображение, которое позволит вам выровнять положение лестницы рядом с изображением блота в PowerPoint.

Ниже приведен пример хорошо представленного Вестерн-блоттинга.

Дот-блот-анализ.

В ImageJ есть два встроенных метода анализа дот-блоттинга. Первый — лечить каждого ряд как горизонтальную «полосу» и используйте функцию анализа геля ImageJ.Второй , чтобы вычесть фон и измерить интегральную плотность каждой точки.
Рис. 1. Исходный дот-блот.

Это дот-блот-изображение доступно в меню File / Open Samples в ImageJ 1.33s или новее.

Рисунок 2. Графики профилей.

Это то, что вы получите, если будете рассматривать каждую строку в точечном блоте как горизонтальную полосу и использовать процедура гель-анализа в руководстве ImageJ.Цифры на каждом пике — это размер соответствующей точки. в процентах от общего размера всех точек. «Инвертировать пики» в диалоговом окне Analyze / Gels / Gel Analyzer Options было позволяет избежать перевернутых вершин.

Рисунок 3. Профили первого ряда.

Во втором методе вы измеряете интегрированную плотность каждой точки, выделяя ее и используя Analyze / Measure команда.Этот метод обычно требует коррекции фона изображения, которую можно выполнить с помощью Обработка / вычитание фона команда. Рисунок 3 содержит графики профиля ( Analyze / Plot Profile ) первый ряд точек до и после коррекции фона был выполнен с помощью инструмента Subtract Background с радиусом катящегося шарика, равным 25 пикселей.

Рисунок 4. Круговой выбор и интегрированные измерения плотности.

После корректировки фона включите «Integrated Density» в Analyze / Set Measurements , создайте круговое выделение, перетащите его на первую точку, нажмите «m» ( Analyze / Measure ), затем повторите для остальных 27 точек. Заметили, что у изображения теперь черный фон? Он был перевернут ( Edit / Invert ) поэтому значения фоновых пикселей близки к нулю, что необходимо для правильного расчета интегральной плотности. Вы можете инвертировать справочную таблицу ( Image / Lookup Tables / Invert LUT ), чтобы восстановить оригинальный вид изображения.Параметр «Использовать инвертированную таблицу поиска» в Edit / Options / Image будет инвертировать данные пикселей и инвертировать таблицу поиска.

Рисунок 5. Результаты с использованием графиков (A) и интегрированной плотности (B).

Первый столбец в этой таблице содержит интегрированные плотности (в процентах от общего количества). из 28 точек, измеренных с помощью процедуры гель-анализа при rsb.info.nih.gov/ij/docs/menus/analyze.html#gels. Второй содержит результаты, полученные при коррекции фона с использованием Обработка / вычитание фона , выбрав «Integrated Density» в Analyze / Set Measurements , а затем измерение каждой из 28 точек с помощью кругового выделения.

Вы также можете анализировать дот-блоты и микроматрицы, используя метод Боба Догерти. Профиль MicroArray плагин, а также доступный набор инструментов Gilles Carpentier Dot Blot Analyzer для ImageJ на сайте ImageJ в папка макросов / наборов инструментов и задокументировано на image.bio.methods.free.fr/dotblot.html

Флуоресцентный вестерн-блоттинг — Advansta Inc.

Сушить или не сушить: вот в чем вопрос. После долгого дня подготовки флуоресцентного вестерн-блоттинга возникает соблазн сразу приступить к визуализации, чтобы увидеть плоды своего труда. В этом рабочем процессе нет ничего плохого, но вы, скорее всего, не создадите наилучшие изображения. Если вы проводите качественный эксперимент или у вас много белка, визуализация влажной мембраны подойдет. Однако, если вы похожи на большинство исследователей, вы обратились к флуоресцентному вестерн-блоттингу для количественного анализа вашей низкоэкспрессируемой цели.

Влажные мембраны не идеальны для визуализации, потому что они медленно неравномерно высыхают, что приводит к несогласованности ваших данных. Поскольку влажные мембраны автофлуоресцируют иначе, чем сухие мембраны, необходимо соблюдать особую осторожность, чтобы предотвратить высыхание мембран в процессе визуализации. Это означает добавление буфера к области визуализации и создание большого беспорядка или помещение вашего блота в полиэтиленовую пленку, чтобы предотвратить высыхание. Если вам когда-либо приходилось снимать мокрые пятна, вы знаете, что предотвратить высыхание при длительной выдержке — проблема.Одно из больших преимуществ работы с флуоресцентными пятнами — это получение изображений в удобное для вас время. Однако, если вам нужно возиться с мокрыми кляксами и хранить их в лотках, заполненных буфером, это совсем не удобно! Помимо дополнительных хлопот, нередко можно увидеть высокий уровень общего фона, когда влажные мембраны подвергаются длительному воздействию. Высокий общий фон отрицательно влияет на чувствительность, делая обнаружение целей с низкой численностью еще более сложной задачей.

Мокрые мембраны для визуализации явно неудобны и далеко не идеальны, но это не означает, что вам также нужно часами ждать, пока мембрана высохнет.Быстрый способ высушить мембрану после флуоресцентного вестерн-блоттинга — окунуть ее в метанол. Все, что требуется, — это быстрое 15-секундное погружение в 100% метанол для мембран из ПВДФ. Мембраны из нитроцеллюлозы не так устойчивы к химическим веществам, поэтому используйте вместо них 20% метанол. Спирт вытеснит воду из пор мембраны, чтобы ускорить высыхание и позволить вам быстрее визуализировать кляксу. Этот быстрый совет в кратчайшие сроки приведет вас к красивому блоту без проблем!

Рис. 1.

Сопутствующие товары:

AdvanBlock ™ -Fluor Blocking Solution
https: // advansta.com / products / AdvanBlock-Fluor /

SpectraDye ™
https://advansta.com/products/fluorescent-labeled-secondary-antibodies/

https://advansta.com/products/western- мембраны для переноса блотов /

Растворы для промывки AdvanWash ™
https://advansta.com/products/western-blot-wash-buffer/

Программное обеспечение для захвата изображений GeneSys нового поколения от Syngene предлагает идеальные изображения хеми-блотов

Syngene, ведущий мировой производитель решений для анализа изображений, рад сообщить, что его программное обеспечение GeneSys теперь доступно с добавлением новых функций ChemiRapid, Signal Accumulation Calculator (SAC) и Enhanced Image, предназначенных для улучшения рабочего процесса и качества хемилюминесцентного изображения.Программное обеспечение, доступное для бесплатной загрузки пользователям определенных систем визуализации Syngene, предлагает идеальные изображения хеми-блотов.

Используя новую функцию ChemiRapid программного обеспечения GeneSys, ученые, работающие с хемиблотами, могут одним щелчком мыши сделать быстрое единичное изображение своего блота, чтобы проверить отсутствие или присутствие определенных белков. Для исследователей, которые хотят получить серию кумулятивных химиографических изображений для получения высокоточной информации о блотах, GeneSys также включает новую функцию «Калькулятор накопления сигналов» (SAC).

С помощью SAC пользователи устанавливают самое короткое и самое длинное время экспозиции, которое, по их мнению, позволит достичь оптимального изображения. Затем они выбирают количество изображений, которые они хотели бы сделать, и SAC рассчитывает время экспозиции для каждого изображения с равными интервалами между самой короткой и самой длинной экспозицией. Каждое последующее изображение включает в себя весь накопленный сигнал от предыдущих изображений, а также дополнительное время экспозиции, что позволяет ученым легко выбрать изображение с оптимальным балансом сигнала и фона из этого набора изображений.

Для использования в системах Syngene G: BOX Chemi, mini и GeneGnome, новая функция SAC позволяет ученым делать снимки своих пятен, пока они уходят, экономя время и усилия на поиск оптимального времени экспозиции. Это обеспечивает более высокое качество и более экономичную визуализацию блотов, чем при использовании рентгеновских пленок, которые могут захватывать только одно химическое изображение в один момент времени. Новая функция SAC идеально подходит для ученых, которые хотят автоматизировать свой рабочий процесс для получения высококачественных и точных изображений ECL и других хемилюминесцентных вестерн-блоттингов.

Третьей новой функцией GeneSys является Enhanced Image, в которой используются запатентованные алгоритмы для сглаживания фона пятен, что упрощает визуализацию полос слабого сигнала. Функция Enhanced Image может удалять пятна и дефекты на фоне пятен, вызванные буферными кристаллами или стойкими блокирующими белками, которые трудно смыть, для получения фона постоянного качества. Это также гарантирует, что ученые могут легко создавать идеальные готовые к публикации изображения блотов для своих отчетов или статей.

Ученые не хотят стоять у своих формирователей изображений, пытаясь создать изображение своего хеми-блота с правильной экспозицией.Мы в Syngene понимаем это и внесли разумные дополнения в наше новое программное обеспечение GeneSys, чтобы исследователи могли легко создавать высококачественные изображения блотов, демонстрирующие самые лучшие результаты их работы ».

Д-р Мартин Биггс, руководитель подразделения Syngene

Science Imaging Scandinavia AB — вестерн-блоттинг

Advansta предлагает продукты для каждого этапа анализа белков с помощью вестерн-блоттинга, от электрофореза до иммунодетекции.

WesternBright ECL

Лучший выбор для рутинного вестерн-блоттинга с пленочным изображением

WesternBright более чувствителен, чем другие хемилюминесцентные субстраты, поэтому вы можете проводить более короткие экспозиции, загружать меньше образца или использовать в десять раз меньше антител. Экономьте время и деньги с WesternBright ECL.

• Более сильный сигнал, чем у Amersham ™ ECL или Pierce ™ ECL
• Обнаружение белков с низким содержанием пг
• Используйте в десять раз меньше антител

«… Позже сегодня я снова попробовал решение Quantum, и оно дало результаты примерно в 2 раза лучше, чем решение из xxxxx! »

«… мы тщательно протестировали новые субстраты Advansta, и мои коллеги тоже очень впечатлены и довольны!»

Количественный хемилюминесцентный вестерн-блоттинг

WesternBright Quantum разработан, чтобы в полной мере использовать линейный динамический диапазон ПЗС-формирователей изображений.