Поделки для сада: помощники миньоны — каталог статей на сайте

Мультипликационные персонажи миньоны на участке смотрятся интересно  и органично. Плюсы в том, что они узнаваемые, забавные, яркие. К тому же  – помощники во всем (как и в мультике). Такие поделки для сада  незамеченными точно не останутся.

 

Мода на миньонов не оставила равнодушными и дачников, любящих украшать свои участки. Появилось очень много миньонов – из разных материалов, разных размеров, с разными атрибутами. Такое разнообразие одной #идеи_для_сада вдохновляет. Можно посмотреть на миньонов, которые сделали другие, взять какой-нибудь понравившийся образ за основу, а потом  дополнить идею. Тогда это будет уже практически ваше изобретение. Что обязательно при создании миньона, то есть что делает его узнаваемым? Желтый цвет самого существа, синий комбинезон, парообразные глаза. Ну, и форма тела, конечно – без лишних изгибов, простейшая (что очень кстати, когда делаешь поделки для сада).

 

Миньоны своими руками из шин и соломы

Из шин миньон

а можно сделать на «раз-два-три». Понадобится:

три старых шины;

пару кусочков резинового шланга для рук;

краска – желтая для раскраски тела, синяя, чтобы нарисовать комбинезон;

для глаз варианты – старая фара, крышка от какой-нибудь банки и т.п.

Укладываем шины одна на другую, раскрашиваем. Прикрепляем ручки, глаз.

 

 

Чтобы сделать миньона из соломы, придется соорудить комбинезон: не так это сложно, но постараться придется. Тюк соломы утрамбуйте поплотнее, чтобы не разнесло ветром.

 

Миньон из фанеры и ковриков

Отличного миньона-помощника можно сделать, если у вас есть кусок фанеры и обычные коврики на пол. Вырезаем с помощью электролобзика или ручной пилы миньона (предварительно нарисовав эскиз), с одной и другой стороны наклеиваем заранее вырезанные по той же схеме куски коврика.

 

 

Такой мохнатенький получится миньончик. Крепим глаз, разрисовываем подходящей краской. Устанавливаем фигурку на подставку.

 

Миньон для мусорной корзины и дверь-миньон

Раз миньоны помощники, значит, могут помочь и в поддержании порядка на участке. Вырежьте из фанеры несколько миньончиков, соответствующе разрисуйте и закрепите на мусорных корзинах. Сразу емкости для мусора станут заметными. Даже весело бросать в них мусор. Кстати, очень просто таким образом приучить своих домашних не бросать мусор куда попало.

 

 

Дверь, декорированная в «миньоном» стиле. Можно просто раскрасить.

 

Смеющиеся миньоны

Несколько небольших миньонов, вырезанных из фанеры или пластика, могут стать веселым декором для садового домика. Разрисовывая компанию, постарайтесь придать миньончикам разные выражения лиц. Пусть смеются, радуются, удивляются, восторгаются и т.п.

 

 

 

Миньоны из жестяных банок

Металлические банки – отличная основа для создания миньонов. Сначала подготавливаем банки. Можно покрасить кисточкой в желтый цвет, а можно, чтобы было быстрее, использовать краску-спрей (из баллончика).

 

 

Когда фоновая краска высохнет, рисуем глаза и рты. Кстати, очень полезные баночки для хранения. Например, гвоздей, шурупов и другого мелкого крепежа в мастерской.

 

Миньоны своими руками из пластиковых бутылок

Здесь все понятно: бутылки покрупнее (1,5-2 л) окрашиваем. Делаем глазки. Такие поделки для сада могут не только украшать, но и выступить снарядами дл игры в боулинг.

 

 

Миньоны-стаканчики

Подойдут для пикника на природе, детского праздника. Впрочем, на даче каждый день пикник.

 

 

Подвесные миньоны из бутылок

Несколько миньонов из пластиковых бутылок можно подвесить на ветки деревьев – пусть полетают, посмотрят с высоты – где еще требуется их помощь.

 

 

Воплощать такие идеи для сада интересно. Многие делают не одного-двух, а несколько миньонов разного вида и размещают их в разных уголках участка:  на грядках, возле гаража, дорожек, мастерской и т.п.

ЗДЕСЬ множество ИДЕЙ ДЛЯ САДА

 

Хочу больше статей:

Оставьте Ваш отзыв

Average rating:   0 reviews

Как научиться рисовать Миньонов | Illyuziya

---

Ну, кто не смотрел фильм «Миньоны», смотрели его и, смотрят с удовольствием и взрослые, и дети. Эти шебутные, желтенькие бобы очаровывают с первого просмотра мультфильма. Создатели мультфильма и его персонажей постарались над тем, чтобы главные герои были яркими и не забываемыми. Нравятся они всем, и мы не исключение, поэтому постараемся их нарисовать.

И так, рассмотрим, как пошагово нарисовать ребенку миньонов акварельными красками.

Для этого нам понадобятся: лист бумаги, простой карандаш, ластик или клячка, акварельные краски, емкость с водой, кисточки, бумажная салфетка промакивать кисточки.

1. Для начала сделаем простым карандашом набросок парочки бобов. Они и действительно, пока без ручек и ножек похожи на бобы. Бобы рисуем немного изогнутой формы, как бы с намеком талии посредине.

2. Теперь начинаем прорисовывать детали. Начнем с ручек и ножек. Сразу намечаем рисовать джинсовый комбинезон. Ручки у миньонов трех палые, набросок сразу делаем в перчатке. И на ножках рисуем ботиночки.

3. Следующим шагом прорисовываем личико миньонов. Большие глазки в очках с металлической оправой как у аквалангистов, улыбающийся рот и не очень густую шевелюру, буквально пару тройку волосков.

4. Далее приступаем к заливке рисунка цветом. Перед началом заливки немного ослабим карандашный набросок. Сначала желтым цветом заполним самого миньона, будем одним цветом работать по очереди на каждом наброске, чтобы краска успела высохнуть, и можно было приступить к работе с другими цветами, и они не смешивались.

Потом оформим синим цветом джинсовый комбинезон; черным цветом – перчатки и ботинки. Последний этап это глаза в очках и незабываем про густые волосы. Волосы рисуем тонкой кистью.

После того как прорисуем тени, наш рисунок готов.

---

Проект (эскиз) персонажа | Уроки по Maya на русском языке

В этом курсе мы создадим основного анимационного персонажа. При создании персонажа необходимо начать со своего рода проекта. Вы можете нарисовать его сами, или его может предоставить вам заказчик. На этом занятии мы создадим базовую форму тела, которая может использоваться для различных персонажей. Итак, у нас есть очень простая форма туловища, а также руки и ноги, торчащие из нее.

Эта форма может показаться очень простой, но она использовалась для многих очень популярных персонажей. Например, M&Ms. Желтый и Красный персонажи очень много используются в рекламе, и у них точно такая же простая форма с руками и ногами. Студия Pixar использовал такую же форму для Майка из Корпорации Монстров. А также в другом рекламном ролике производства BBC — «It’s Playback time». Это довольно крупная рекламная кампания, но и там также используется очень простая основа для персонажей.

Это просто округлое тело с руками и ногами. Видите, все они довольно похожи по строению. Очень популярные на данный момент персонажи Миньоны тоже сделаны на основе этой формы. Итак, прежде чем моделировать персонажа, необходимо сначала сделать набросок. Я покажу вам некоторые из моих скетчей. Я думал, хочу ли я сделать его высоким и худым, или скорее похожим на орех?

И я просто поиграл с его формой. Я спрашивал себя, как я хочу распределить вес по форме персонажа. Вот еще наброски. Здесь я играл с одеждой. Мы можем одеть нашего героя или оставить его без одежды. Вот этот персонаж у меня имеет немного другую форму тела. Я могу использовать различные типы формы — овальный, круглый, цилиндрический. Но основная структура у меня останется очень простой — просто туловище с руками и ногами.

И наконец, я придумал вот этого героя. Он довольно прост, так как я не хочу перегружать занятия в этом курсе. Я хочу преподать вам для начала основы, а затем уже можно погружаться в детали. Итак, найдите свободное время и просто поиграйте с формой своего персонажа. Это достаточно интересно и весело. Начните с простой формы, а далее мы будем добавлять к нему детали и совершенствовать его, пока не получим готового персонажа. Когда мы сделали набросок, или скетч, мы можем начать моделировать.

Мастер-класс «Миньон из полимерной глины»

Все уже наверно слышали о мультфильме «Гадкий я» и о героях этого мультфильма — миньонах.
Так как совсем недавно вышла вторая часть этого мультика, я стала получать заказы на этих самых миньонов:)

По ходу выполнения одного из заказов решила отснять процесс как это делаю я)

Итак будем делать вот такой кулон

Что нам понадобиться:

• полимерная глина (желтого, синего, черного и белого цветов)


• резак


• скалка/паста-машина


• фурнитура (штифт, цепочка, колечки, бейл, замок)


• иголка


• лак


• кисточка

Начнем!

1. Берем кусок желтой полимерной глины. Прикиньте сразу какого размера миньона вы хотите сделать и возьмите нужное количество.

2. Придаем овальную форму, похожую на киндер-сюрприз 🙂

3. Берем кусочек синей пластики и раскатываем его в пласт, толщиной около 1 мм.

4. Оборачиваем синий пласт вокруг нашего киндер-сюрприза, закрывая примерно половину тушки. Это будет комбинезон для нашего миньона.

5. Оборачиваем, обрезаем все лишнее, прижимаем пальцами, разглаживаем чтобы не было стыков.

На этом этапе я взглянула на картинку, с которой лепила и поняла, что я налажала.

Вот кстати сама картинка)

А налажала я в комбинезоне. Почему-то я забыла вырезать сразу эту выступающую часть с нагрудным кармашком, поэтому приходится исправлять.

6. Вырезаем все лишнее.

7. Т.к. желтый пластик у меня довольно твердый, а синий наоборот очень мягкий, все прекрасно отходит.

8. Проделываем то же самое и со второго бока, тем самым формируя переднюю часть комбинезончика.
Синий пластик мягкий и от него остаются следы, но я этого не боюсь, потому что сошлифую это после запекания.

9. Теперь берем иголочку и медитативно тыкаем, имитируя джинсовую строчку на комбинезоне.

10. Ей же формируем кармашки и проходимся той же «строчкой».

11. Я уже говорила, что мой синий фимо софт очень мягкий и просто тает в руках, поэтому я решила запечь своего миньона в несколько этапов, чтобы не повредить все манипуляции иголкой.

Т.к. мы отправляем миньона в печь и возможности сделать ему улыбку уже не будет, делаем ее сейчас 🙂
Этой же иголочкой.

Запекаем. Температуру и время запекаия смотрите на упаковке своей глины, у всех она разная. Я запекаю 20 минут при температуре 130 градусов.

12. Наш миньон прошел первую термообработку, теперь я могу сошлифовать все некрасивости.

13. Лепим ручки. Раскатываем колбаску из желтого пластика и отрезаем от нее 2 одинаковые колбаски.

14. Крепим нашу ручку. Тут я советую воспользоваться гелем или жидкой пластикой для лучшего скрепления деталей. Прикатываем, приглаживаем. Делаем вторую ручку по аналогии.

15. Раскатываем пласт синей пластики и отрезаем от него 2 синие тонкие полоски. Это будут лямки нашего комбинезона.

Полоски тоже промазываю гелем.

16. Крепим, отрезая все лишнее.

17. Снова берем нашу иголку и имитируем швы.

18. Сейчас сформируйте 2 небольших шарика ( овала) из синего пластика и сделайте из него ножки, крепя их посередине нижней части тела.
Тут нужно было пройтись иголочкой и по штанам, но я это сделать забыла 🙂

19. Сейчас берем 2 одинаковых кусочка черной пластики.

20. Формируем из них приплюснутые овалы. Это будут наши ботиночки.

21. Крепим их к ножкам.

22. Ножки готовы, возьмемся за ручки. Снова берем 2 одинаковых маленьких кусочка черной пластики.

23. И формируем из каждого вот такую «кисть» из трех пальчиков 🙂

24. Совсем небольшую.

25. На кончик нашей ручки капаем капельку геля и присоединяем к ней кисть.

Далее катаем тоненькую колбаску из черной пластики и оборачиваем это место соединения.

26. Получились манжеты перчаток 🙂

27. То же самое проделываем со второй рукой) И я снова отправляю миньона в печь. Вы можете этого не делать, но мне так удобнее работать, когда я не боюсь случайно тыкнуть куда-то ногтем и повредить все старания 🙂

28. Все снова твердое и я могу вставить штифт:)

Необязательно его вставлять на этом этапе, можно и когда весь миньон будет готов. Но мне захотелось разнообразить свои действия и сделать это сейчас 🙂

29. Для этого я беру свою мини-дрель и сверлю сначала неглубокую дырочку для того чтобы пин легче вкручивался и пластика не треснула.

Если у вас нет мини-дрели вы можете взять тонкое сверло и аккуратно вкрутить его вручную, придерживая например плоскогубцами для удобства. Получится тоже самое, но медленнее 🙂

30. Вот готовое отверстие, в которое я буду вкручивать штифт.

Кстати штифты у меня винтовые, поэтому вкручиваются хорошо. Если у вас таких нет, а в наличии только простые без резьбы, то без сверла вам точно не обойтись.  Либо сверлите дырочку, либо втыкайте штифт в еще незапеченный пластик.

31. Штифт на месте. Вкручивая штифт, не забывайте капнуть капельку супер-клея для надежности.

32. Ну вот отдохнули, продолжаем лепить)

Раскатываем из белого пластика 2 белых блинчика ( сначала катаем шарики, потом их аккуратно расплющиваем).

33. Сажаем их при помощи того же геля.

34. Теперь смешайте небольшое количество белого и черного пластика для получения серого. Катаем из него тоненькую колбаску, которой аккуратно оборачиваем наши глазки.

35. У нас готовы очки 🙂

36. Раскатываем тонкий пласт черного пластика.

37. Отрезаем тоненькую полоску, промазываем ее гелем.

38. Крепим нашу «резинку» от очков 🙂

39. И последний штрих. Катаем 2 малюсеньких коричневых шарика и делаем зрачки)

Почему коричневых? Потому что на картинке у миньона карие глаза:)

Вот и все! Отправляем в последний путь печь для итогового запекания.

40. Вот наш миньон почти готов. Шлифуем если нужно и покрываем специальным лаком.

(Ни в коем случае не покрывайте изделия лаком для ногтей. Он для пластики не подходит. Если вы не уверены в своем лаке, можете задать мне о нем  вопрос в комментарии, возможно я такой знаю и подскажу подходит он или нет.)

41. Ждем полного высыхания лака.

42. Лак высох. Осталось только подвесить нашего миньона на цепочку, основу для брелка, а может просто поставить на полку. Тут уже только ваша фантазия 🙂

43. Вот и все! Мы большие молодцы! Радуемся своему новому другу 🙂

Заказать изделия с вышивкой на заказ недорого в Москве

Изображение миньона 1

Изображение миньона 2

Изображение миньона 3

Изображение миньона 4

Изображение миньона 5

Изображение миньона 6

Изображение миньона 7

Изображение миньона 8

Изображение миньона 9

Изображение миньона 10

Изображение миньона 11

Изображение миньона 12

Изображение миньона 13

Изображение миньона 14

Изображение миньона 15

Изображение миньона 16

Изображение миньона 17

Изображение миньона 18

Изображение миньона 19

Изображение миньона 20

Изображение миньона 21

Изображение миньона 22

Изображение миньона 23

Изображение миньона 24

Изображение миньона 25

Изображение миньона 26

Изображение миньона 27

Изображение миньона 28

Изображение миньона 29

Изображение миньона 30

Изображение миньона 31

Изображение миньона 32

Изображение миньона 33

Изображение миньона 34

Изображение миньона 35

Изображение миньона 36

Изображение миньона 37

Изображение миньона 38

Изображение миньона 39

Изображение миньона 40

Изображение миньона 41

Изображение миньона 42

Изображение миньона 43

Изображение миньона 44

Изображение миньона 45

Изображение миньона 46

Изображение миньона 47

Изображение миньона 48

Изображение миньона 49

Изображение миньона 50

Изображение миньона 51

Изображение миньона 52

Изображение миньона 53

Изображение миньона 54

Изображение миньона 55

Изображение миньона 56

Изображение миньона 57

Изображение миньона 58

Изображение миньона 59

Изображение миньона 60

Изображение миньона 61

Изображение миньона 62

Изображение миньона 63

Изображение миньона 64

Изображение миньона 65

Изображение миньона 66

Изображение миньона 67

Изображение миньона 68

Изображение миньона 69

Изображение миньона 70

Изображение миньона 71

Изображение миньона 72

Изображение миньона 73

Изображение миньона 74

Изображение миньона 75

Изображение миньона 76

Изображение миньона 77

Изображение миньона 78

Изображение миньона 79

Изображение миньона 80

Изображение миньона 81

Изображение миньона 82

Изображение миньона 83

Изображение миньона 84

Изображение миньона 85

Изображение миньона 86

Изображение миньона 87

Изображение миньона 88

Изображение миньона 89

Изображение миньона 90

Мы занимаемся вышивкой на футболках и других видах одежды на заказ. От простых футболок из нежного трикотажа до плотоного джинсового матирала — любой вид одежды, на который можно нанести картинку под вышивку с изображением забавного миньона, например. Достаточно удачными получаются изображения практически с любого исходного эскиза. В качестве картинки под вышивку, которую мы можем изготовить для вас, может выступать надпись, фото, иллюстрация или рисунок со множеством цветотеней. В пределах нашего огромного ассортимента ниток для вышивания мы сможем выполнить любой ваш каприз.

Все, что нужно для того, чтобы получить желаемый вами предмет одежды с вышивкой: определить рисунок, который вы хотите получить в итоге; прислать нам в электронном виде изображение, а также, если захотите, можете выбрать рисунок из огромного количества в наших каталогах; подождать несколько дней, пока будет идти вышивка (от двух дней), и потом забрать ваш заказ в удобное для вас время.

Кроме вышивки популярного в нашей мастерской направления — футболок или толстовок с миньонами — мы можем нанести и множество других изображений для вас:

С помощью современных тенологий, оборудования, которое управляется компьютером, можно выполнить вышивку на ткани с большей бережностью, при этом, изображение будет более четким и аккуратным. Для нас практически нет сложной работы — нам под силу все! Нанесенное с помощью вышивки изображение невозможно поподтить стиркой, оно не выгорит на солнце, и долго будет хранить вид, как будто только вчера вышло из-под иглы мастера. Мы используем в работе оборудование мировых брендов, которые обладают всеми необходимыми сертификатами. Это гарантирует качественное выполнение заказа на всех этапах работы.

Заказать ростовую куклу Миньон: костюмы от Арт-Эш

Артикул: не указан

Ростовая кукла в подарок на праздник близкому человеку будет лучшим решением, чтобы сделать ему сюрприз и удивить всех гостей. Когда игрушка-великан из любимого фильма, мультфильма или рассказа появится на мероприятии, восторгу именинника и окружающих людей не будет предела. Это прекрасный подарок не только для детей, но и для взрослых, ведь каждый из нас до сих пор хоть немножко верит в сказки.

Яркий костюм для создания неповторимой атмосферы праздника

Самой популярной ростовой куклой является Миньон, ведь герои из мультфильма «Гадкий Я» покорили весь мир своей харизмой. Этот герой украсит любой праздник и Вы получите действительно яркую и позитивную атмосферу торжества. Вы или Ваш ребенок почувствуете себя в роли смешного персонажа, что оставит незабываемые эмоции еще на долгое время.

Купить костюм ростовой куклы Миньон можно онлайн, выбрав подходящую модель в нашем каталоге. Такую экипировку можно даже использовать в коммерческих целях: для привлечения целевой аудитории на многолюдных улицах, выставках, презентациях, фестивалях либо для проведения детских праздников, утренников, корпоративов, рекламных акций.

Творческая команда «Арт-Эш» также готова создать индивидуальный костюм на заказ, украсив его соответствующими цветами, символикой или логотипом бренда. Все цены на наши товары указаны на сайте, а разработка уникального заказа рассчитывается и согласовывается отдельно с заказчиком. Чтобы подробнее узнать об услугах или оформить разработку проекта, напишите нам в онлайн-чат или позвоните по одному из номеров телефона +7 (495) 979-1990 / +7 (901) 555-5505. Будем ждать.

пошив Из Выбранных Вами материалов По индивидуальным меркам заказчика По образцам костюмов имеющихся в каталоге или по Вашим эскизам

дополнительно

Заказать понравившийся костюм, или узнать информацию по его изготовлению Вы можете по контактам:

Телефоны: +7 (495) 979-19-90 +7 (901) 555-55-05 Email: [email protected] Мы работаем с 9:00 до 21:00, Вс — выходной

Торт Миньон на заказ в Москве

Выберите категорию:

Все Детские торты » Торты для девочки »» Розовые »» Без мастики (кремовые) » Торты для мальчика »» Без мастики (кремовые) для мальчика » Торты для близнецов и двойняшек » Торты с животными »» Акула »» Божья коровка »» С динозаврами »» С драконом »» Кот »»» Пушин »» Цыпленок »» Лев »» Мишка »» Мышка »» Обезьяна »» Овечка »» Собака »» Сова »» Свинка » Пряничные торты » Детские торты без мастики » Детские торты на выпускной »» В детский сад »» 4 класс »» 9 класс »» 11 класс »» Торт на последний звонок » Спортивные торты »» Балерине »» Баскетболисту »» Бильярдный стол »» Боксеру »» Борцу »» Гимнастке »» Каратисту »» Путешественнику »» Теннисисту »» Фигуристке »» Футболисту »» Хоккеисту »» Шахматисту » Торты в виде цифры »» 1 »» 2 »» 3 »» 4 »» 5 »» 6 »» 7 »» 8 »» 9 »» 10 » Торт на определение пола ребенка » На выписку »» Детские торты на рождение девочки »» На рождение мальчика » Торт на крестины » Торты на 1 годик »» На годик мальчику »» На годик девочке »» На годик без мастики » На первый зубик » Торты с метрикой » Торты с короной » Торты с ангелочками Для Мамы Мультяшные » 101 Далматинец » Аватар Аанг » Автобус Тайо » Жасмин и Алладин » Алиса в Стране Чудес » Ам Ням » Американский Папаша » Аниме » Атомный Лес » Бакуган » Барашек Шон » Бейблэйд Берст » Белоснежка и семь гномов » Бен Тен (10) » Босс Молокосос » Бременские музыканты » Буратино » Бурёнка Даша » В Поисках Немо » Валли » Вампирина » Винкс (Winks) » С Винни Пухом Дисней » Время приключений » Вспыш и Чудо Машинки » Гравити Фоллс » С Гринчем » С Гриффинами » Грузовичок Лева » Губка Боб (Спанч Боб) » Дамбо » Даша Путешественница » Деревяшки » Джейк и Пираты Нетландии » Джимми Нейтрон » Джинглики » Джинджер » Дружные Мопсы » Доктор Плюшева » Дональд Дак » Душа » Зак Шторм » Зверопой » История Игрушек » Как приручить Дракона » Каспер » Колобанга » Король Лев » Корпорация Монстров » Кот Леопольд » Кот Саймона » Коты-Воители » Кошечка Мари » Кролик Питер » Кротик » Кукутики » Куми-Куми » Кунг-фу Панда » Лалалупси » Лего Фильм Бэтмен » Леди Баг » Ледниковый Период » Лило И Стич » Мадагаскар » Май Литл Пони (My Little Pony) » Маленькое королевство Бена и Холли » Малыш И Карлсон » Мамонтенок » Масяня » Микки Маус » Мимимишки » Миньон » Мишки Гамми » Моана » Монстр Хай (Monster High) » Монстры на каникулах » Незнайка » Ниндзяго » Ну Погоди » Октонавты » Паровозик Томас » Пикачу » Простоквашино » Ральф » Рапунцель » Рататуй » Рик И Морти » Рио » Робокар Поли » Русалочка » Симпсоны » Синий Трактор » Сказочный Патруль » Смешарики » Смурфики » Советские Мультики » Супер Крылья » Тайная жизнь домашних животных » Тачки (Молния Маквин) » Том и Джерри » Тоторо » Три кота » Тролли » Удивительный мир Гамбола » Унесенные призраками » Утиные истории » Фиксики » Финес и Ферб » Футурама » Хитрый Койот » Холодное Сердце » Чаггингтон » Чебурашка » Черепашки ниндзя » Черный Плащ » Чип и Дейл » Шопкинс » Шрек » Эй Арнольд » Элвин и Бурундуки » Энгри Бердз (Angry Birds) » Южный Парк Торты на тему кино » Аватар » Алиса в Зазеркалье » Бэтмен » Веном » Вилли Вонка » Властелин Колец » Гарри Поттер » Heroes (Герои) » Дневники Вампира » Дэдпул » Железный человек » Закрытая Школа » Звездные Войны (Star Wars) » Звездный Путь » Игра Престолов » Люди Икс » Назад в Будущее » Пираты Карибского Моря » Сверхъестественное » Сумерки » Теория Большого Взрыва » Тор » Трансформеры » Третий Лишний » Фантастические Твари » Хоббит » Ходячие Мертвецы » Часодеи » Человек-паук Торты с супергероями » Марвел »» Железный Человек »» Капитан Америка »» Стражи Галактики »» Молот Тора »» Халк »» Человек Паук » Бэтмен » Росомаха » Супермен » Трансформеры » Черепашки Ниндзя Торты для геймера » Майнкрафт (Minecraft) » Браво Старс (Brawl Stars) » Фортнайт (Fortnite) » Роблокс (Roblox) » с Соником (Sonic) » ГТА (GTA) » World of Tanks (Ворлд оф Танк) » Мортал Комбат (Mortal Combat) » Зомби против растений » Марио » Варкрафт (Warcraft) » Бенди и чернильная машина » Call of Duty (Кол оф Дьюти) » Ассасин (Assassin’s Creed) » Half Life » Need For Speed » Diablo » Resident Evil » Allods » Dragon Age » Contrast » Legend of Zelda » Lineage » Max Payne » PAYDAY » Старкрафт (StarCraft) » The Walkin Dead » World of Planes » XCOM » Battlefield Праздничные » На 1 сентября » На День Учителя » На Хэллоуин » Новогодние »» Бычок »» Новогодний шар »» Снежный Шар »» Новогодняя елка »» Снеговик »» С оленем »» С Дедом Морозом »» Новогодний подарок »» Свеча » День студента » На 23 февраля » На 14 Февраля » На 8 Марта Тематические » Айфон » Антиторты (В виде еды) »» Гамбургер » Барабан » Вертолет » Гитара » В виде дома » Единороги » Замок » Игровая приставка » В виде Киндера » Книга » Корабль » Космос » Кукла »» Лол (Lol) »» Барби » Лав из (Love is) » Лего »» Нексо Найтс »» Лего Френдс » Ммдемс (M&M’s ) » Машина »» Автобус »» Ауди »» BMW »» Гоночная машина »» Пожарная машина »» Мерседес »» Ламборджини »» Мини Купер »» Паровозик »» Порше »» Торт Рендж Ровер »» Танк »» Трактор »» Феррари »» Фура »» Мотоцикл » Ноутбук » Паспорт » Платье » Русалка » Самолет » В форме сердца » Сундук » Фотоаппарат » Футбольный мяч » С цветами » Цирк 3д торты Торты с соц сетями » Лайк » Смайлик Торты в стиле Поп Арт Буквы Радужные торты Торты с фотопечатью Торты с ягодами Недорогие Шоколадные наборы » Выпускной » Медали » Женский » Для мужчин » Футбольный » Новогодний » Подарки на пасху »» Пасхальные куличи »» Пасхальные пряники и шоколад Безе Имбирные пряники » Имбирные пряники на 23 февраля » Имбирные пряники на 8 марта Капкейки детские Кейк попсы Макаруны Маршмеллоу Аксессуары для праздника » Воздушные шарики »» На выписку из роддома »» Для детей »» На день рождения »» Сердечки »» На свадьбу »» Шары на 8 марта » Гирлянды » Мыльные пузыри » Одноразовая посуда » Свечи » Хлопушки

Быстрая повторная идентификация образцов человека с помощью портативного устройства для секвенирования ДНК

[Примечание редакции: следует апелляционное письмо авторов в ответ на первый раунд рецензирования.]

Из комментариев рецензентов ниже вы увидите, что они согласились с тем, что методология идентификации индивидуумов или клеточных линий с использованием данных MinION с очень низким охватом, при условии наличия существующей справочной базы данных, является надежной и что результаты применения подхода к Идентификация индивидуума и клеточной линии стала убедительной теоретической демонстрацией этого метода.Тем не менее, рецензенты выразили серьезную озабоченность по поводу практической полезности этого подхода в судебной экспертизе и идентификации клеточных линий, например, из-за отсутствия справочных материалов и влияния контаминации. Учитывая, что выделенные приложения являются центральным элементом статьи, рецензенты рекомендовали рассмотреть другие приложения, потенциально выходящие за пределы области генетики человека, которые в более широком смысле увеличили бы влияние метода.

Большое спасибо за ваше внимательное чтение нашей статьи и за комментарии рецензентов.Мы очень рады, что все рецензенты единогласно согласились с тем, что наш метод надежен и убедителен. Однако мы были удивлены, обнаружив, что был также сделан вывод об отсутствии (потенциальных) приложений. Мы твердо уверены, что существует набор очень эффективных приложений нашего метода, которые могут только расшириться в будущем. Мы опасаемся, что нам не удалось передать это в достаточной степени в нашей рукописи, и надеемся, что вы пересмотрите свое решение на основе аргументов, которые мы приводим ниже:

Загрязнение клеточной линии — давняя и постоянная проблема академических, клинических и коммерческих исследований.Доступных решений для аутентификации клеточных линий явно недостаточно, поскольку загрязнение по-прежнему является серьезным экономическим бременем для общества, несмотря на то, что оно было признано почти 50 лет назад. Проблемы контаминации клеточной линии и аутентификации очень хорошо описаны Almeida et al 2016 PLOS Biology. Мы хотели бы пояснить пару поднятых вопросов:

1. Загрязнение и быстрая идентификация: аутентификация клеточной линии выигрывает от возможности идентифицировать контаминацию образца на самой ранней стадии.Текущие национальные руководящие принципы США по ASN0002 заявляют, что линия клеток является чистой, если STR имеют 80% совпадение с одной из записей в базе данных. Только при совпадении STR <56% клеточная линия считается загрязненной. Наш метод лучше и применим по сравнению с существующими в двух важных аспектах:

1. Аутентификация линии клеток не является статическим одноразовым тестом: перенос пары клеток из одной культуры в другую происходит по ошибке человека. Только клетки, которые быстро размножаются по сравнению с исходной линией клеток, могут поставить под угрозу исследования, проводимые с течением времени.Поэтому периодическое тестирование всех клеточных линий в лаборатории имеет решающее значение, поскольку только периодическое тестирование покажет, что линия клеток загрязнена. ATCC требуется две недели, чтобы получить результаты теста , а это означает, что к тому времени, когда исследователь получит свои результаты, загрязнитель может перерасти культуру. Наш метод создания эскизов MinION обеспечивает быстрое и локальное решение для периодического тестирования клеточных линий, позволяя исследователям быть полностью осведомленными о состоянии своей клеточной линии (линий) во время эксперимента.Даже при загрязнении 10% наш метод редко обеспечивает надежное совпадение, что свидетельствует о загрязнении в клеточной линии. Кроме того, мы можем надежно определить загрязнение до 20%, что является важным двукратным улучшением по сравнению со стандартом ASN0002, который отклоняет чистую клеточную линию только при совпадении <56%.

2. Перемешивание образцов: замена клеточных линий время от времени происходит в лабораториях, и это будет 100% -ное заражение. Скетч MinION обеспечит идеальную, мгновенную проверку работоспособности любого исследователя перед началом эксперимента.

2. Анализ загрязнения с использованием SNP в сравнении с STR: линии раковых клеток обычно очень нестабильны и быстро размножаются. STR с большей вероятностью несут мутации, чем SNP, и поэтому даже чистая линия раковых клеток обычно приводит к неоднородному сочетанию длин повторов. Следовательно, рекомендации ASN0002 устанавливают порог при 80% -ном совпадении для чистых линий раковых клеток. Таким образом, наш эскиз MinION на основе SNP обеспечивает более высокую точность обнаружения загрязнений в линиях раковых клеток.

3. Доступность справочной базы данных: энциклопедия линий раковых клеток, созданная Институтом Броуда, предоставляет около 1099 справочных файлов для широкой публики. Это только начало, и база данных будет обновляться по мере увеличения количества доступных клеточных линий. Когда наш метод используется для целей судебной экспертизы, необходимо учитывать этические вопросы, однако соответствующие (государственные) органы, регулирующие судебно-медицинские исследования и расследования, должны иметь возможность формулировать правила, позволяющие использовать наш метод вместе с соответствующими справочными базами данных (см. Ниже ) в криминалистике.

4. Стоимость: Стоимость секвенирования продолжает резко падать, и эта тенденция, скорее всего, сохранится в ближайшем будущем. Когда образцы мультиплексируются с использованием 12 штрих-кодов, стоимость нашего метода создания эскизов MinION в настоящее время уже сопоставима с доступным методом аутентификации клеточной линии через ATCC и даже ниже его. Разница между нашим методом создания эскизов MinION и методом ATCC заключается в том, что исследователям не нужно ждать две недели, чтобы получить результаты теста.

5.Концентрация ДНК: для аутентификации клеточной линии нам не нужно беспокоиться о доступности входящей ДНК так сильно, как это необходимо для судебной экспертизы. Даже не расширяя границы возможного, мы смогли идентифицировать человека с помощью ДНК размером 50 нг. Наш метод может использоваться в дополнение к этапу ПЦР-амплификации информативных SNP, что может быть расширением метода в ситуации с чрезвычайно низким входным образцом ДНК. Однако мы допускаем, что это добавило бы трудоемкого этапа в протоколе.

6. Расширение до других областей: наш метод вполне может быть подходящим для других областей, таких как аутентификация линии клеток мышей, и для тестирования чистоты C. elegans , дрозофилы, растений и даже дрожжевых стоков. Эта статья может стать первым шагом к тому, чтобы сделать тестирование на чистоту более удобным для исследователей из разных областей наук о жизни — это причина, по которой мы считаем, что эта статья будет идеальной для eLife с ее широким кругом читателей.

Криминалистические приложения: мы очень хорошо знаем область исследований STR, и лаборатория Эрлиха опубликовала несколько ключевых статей в этой области (например,грамм. Gymrek et al., Nature Genetics, 2016). Мы полностью согласны с рецензентом 2, что судебно-медицинское сообщество не заменит свою систему STR CODIS только из-за нашей рукописи.

Сказав это, кажется, что наш MinION

вызывает некоторое волнение. Метод

зарисовок в криминалистическом сообществе. Национальный институт юстиции (NIJ) финансировал нашу работу, а Американская академия судебных наук (AAFS) пригласила нас представить эту работу на сессии по судебной экспертизе ДНК на их ежегодном собрании 2016 года в Лас-Вегасе.После нашей презентации на собрании AAFS с нами связалась группа исследователей из группы судебно-медицинских экспертов Battelle, одного из крупнейших государственных подрядчиков в этой области. Они были заинтересованы в том, чтобы протестировать наш метод на своих образцах для специального отчета Министерству обороны (DoD). Нас также пригласили представить эту работу на заседании группы Oxford Nanopore Technologies, и мы получили запросы от Нью-Йоркского университета и немецких сотрудников на использование нашего метода для портативной повторной идентификации сельскохозяйственных культур и животных в полях.

Мы не предполагаем, что в ближайшем будущем наш метод будет конкурировать с методом STR в регулярной судебной экспертизе. Тем не менее, мы действительно наблюдаем такие ситуации, как массовые бедствия масштаба 11 сентября, цунами 2004 года или землетрясение Тохоку, которые потребуют идентификации большого количества жертв в обстоятельствах, когда транспортировка тканей в лаборатории является логистически сложной. Создание эскизов MinION позволит быстро генерировать сигнатуры ДНК на месте с помощью недорогого стандартного портативного устройства.Есть также другие криминалистические задачи, особенно в Министерстве обороны, которые сильно выиграют от создания эскизов MinION.

Приносим извинения за то, что текст нашей рукописи не был достаточно ясным, чтобы описать преимущества нашего метода и наши мотивы, стоящие за его разработкой. В свете вышеизложенной информации, не могли бы вы рассмотреть вопрос о предоставлении нам возможности повысить ясность нашего текста, учесть все комментарии рецензентов и повторно отправить?

[Примечание редакции: теперь следует поэтапный ответ авторов на первый раунд рецензирования.]

Рецензент № 1:

Меня не беспокоит статистический подход, но мне было непонятно, как производительность алгоритма зависит от свойств используемых SNP. С общими SNP будет больше вероятность совпадения генотипа со случайным образцом ДНК? Но, предположительно, общие SNP с большей вероятностью будут указаны в соответствующих базах данных? Может ли база данных из 31 000 человек быть репрезентативной для баз данных ДНК, используемых в судебной экспертизе (которые, как я все еще думал, в основном основывались на STR, а не на SNP)? Насколько подход зависит от количества индивидуумов и количества SNP в ссылке? Точно так же с аутентификацией клеточной линии, какое влияние использование другой технологии в справочнике оказывает на полезность и интерпретацию результатов? Я также не видел обсуждения «правил остановки» — как метод определяет наличие достаточных доказательств того, что совпадения нет (поскольку априорная вероятность совпадения будет мала)?

Большое спасибо за эти замечательные вопросы.Мы рассмотрим их один за другим, и в документе мы также прояснили поднятые вопросы.

SNP:

При сопоставлении двух профилей ДНК (эскиза MinION и данных массива SNP) наш алгоритм учитывает вероятность совпадения и отсутствия совпадения (то есть вероятность случайного совпадения). Например, для вероятности «совпадения»: если в позиции chr1: 10,000 MinION сообщил «C», а dbSNP сообщил о варианте «C / G», тогда вероятность совпадения получит значение: 1- (коэффициент ошибок).

Для вероятности «несоответствия» учитывается частота аллеля.Скажем, последовательность C в этой позиции очень часто встречается в популяции (например, 90% людей в популяции имеют C на chr1: 10 000). В этом случае мы рассматриваем вероятность «несоответствия» (насколько вероятно, что мы увидим этот аллель в популяции, если бы мы случайным образом секвенировали индивидуума?). С другой стороны, если бы этот вариант был G, мы получили бы много информации, так как вряд ли кто-то случайно встретит этот упорядоченный вариант. Вы можете найти это отражение в знаменателе нашего алгоритма в разделе «Материалы и методы».В разделе «Материалы и методы» мы более подробно описываем все детали модели. Обратите внимание, что мы используем только общие SNP с частотами аллелей от 1 до 99%.

База данных:

Большинство баз данных для криминалистики, а также многие базы данных по линиям клеток основаны на STR. Судебные базы данных содержат миллионы профилей ДНК (https://www.fbi.gov/services/laboratory/biometricanalysis/codis/ndis-statistics). Действительно, эти базы данных несовместимы с нашим методом эскиза MinION. Однако для исследовательских и клинических целей клеточные линии и образцы тканей обычно генотипируются с использованием массивов SNP или WGS, и эти справочные файлы данных совместимы с эскизами MinION (пример: справочные файлы CCLE, которые мы приводим в этой рукописи).В криминалистике люди все еще не решаются использовать базы данных на основе SNP, однако для конкретных приложений, таких как идентификация жертв массовых бедствий, могут быть полезны ссылочные файлы массивов SNP, которые были созданы либо правоохранительными органами, либо DTC. Все больше людей уже публикуют свои справочные файлы в Интернете через openSNP, и эта общедоступная база данных растет. База данных DNA.land не является общедоступной, но служит доказательством принципа базы данных для тестирования нашего метода.

Размер базы данных: наш метод сопоставляет эскиз MinION с одним справочным файлом в базе данных за раз и вычисляет апостериорную вероятность совпадения. Эти расчеты не зависят от размера используемой базы данных. Однако чем больше база данных, тем больше вероятность того, что эталонный файл, который должен соответствовать скетчу MinION, присутствует в базе данных. У нас действительно есть априор, который отражает пространство поиска — на рисунке 2 — рисунок в дополнении 1 присутствует в данных, мы исследуем эффект изменения априорного значения и обнаруживаем, что наш метод является надежным, даже если мы предполагаем, что население всего мира (7.5 * 10 ⁹ ).

Количество SNP в справочном файле: в качестве примера; запуск MinION в течение одного часа (для SZ001) привел к выделению 13 453 распространенных вариантов. Пересекаясь с ее справочным файлом (560 тыс. SNP), пересеклись только 457 вариантов. Конечно, каждый запуск MinION дает разные результаты. Таким образом, чем больше считываний проходит через нанопоры за единицу времени, тем большее количество вариантов зарисовывается и пересекается с эталонными файлами, и тем быстрее может быть достигнута повторная идентификация образца.И действительно, большее количество SNP в эталонных файлах увеличивает вероятность пересечения SNP из скетча MinION.

Большое спасибо за то, что подняли «правила остановки». Мы добавили анализ, чтобы найти минимальное количество SNP, чтобы сделать вывод о совпадении. (Рисунок 4B). Пересечения 300 SNP было достаточно, чтобы найти правильный соответствующий эталонный файл для 99,6% скетчей MinION, которые мы смоделировали. Пройдя мимо этого количества SNP, не соблюдая апостериорную вероятность, которая не достигает 99 и остается на ней.9% означает, что соответствующий справочный файл, скорее всего, отсутствует в базе данных.

Хотя алгоритм в настоящее время определен как обеспечивающий вероятности совпадения, можно ли расширить этот подход, чтобы обеспечить вероятности того, что образцы взяты от близких родственников?

Это отличный момент. В этой рукописи мы хотели установить надежный метод для определения точного совпадения. Даже родственник первой степени не идентифицируется как подходящий кандидат с помощью нашего метода, что было важным тестом для проверки нашего метода.Мы полностью согласны с тем, что семейное сопоставление было бы ценным обогащением пространства поиска, и поэтому в настоящее время мы работаем над этим расширением метода. Однако для того, чтобы сделать наш алгоритм надежным и подходящим для определения семейных совпадений, потребуются серьезные дополнения, и мы считаем, что это заслуживает отдельной рукописи. Вдобавок к этому, хотя семейное сопоставление потенциально откроет ряд дополнительных приложений в судебной медицине, оно не повлияет на применимость нашего метода в аутентификации клеточных линий и тканей в биобанках и клинике.Добавление этого ослабило бы нашу способность выделять основные проблемы с аутентификацией, которые вызывают давние и постоянные проблемы с воспроизводимостью исследований и для которых наш метод может быть важной частью решения.

Утверждается, что новый подход является быстрым и недорогим, но так ли важна потребность в «быстром» ответе в приложениях судебной экспертизы или аутентификации по клеточным линиям? Как новый подход сравнивается с точки зрения необходимого количества ДНК по сравнению с используемыми в настоящее время методами, и снижает ли это полезность?

Мы благодарим рецензента за то, что он поднял этот вопрос, так что у нас есть возможность пояснить наши рассуждения.

Зачем нужна быстрая аутентификация по клеточной линии?

1) Клеточные линии и их потенциальные загрязнители — это живые и динамичные сущности. Две недели в культуре могут кардинально изменить состав клеточной культуры. Мы добавили в рукопись имитационный анализ, который показывает этот эффект с течением времени (рисунок 5 — приложение к рисунку 1). Крайне важно иметь возможность периодически контролировать геномный состав популяции клеток в культуре, чтобы исследователи могли быть уверены, что все эксперименты проводятся с чистыми и проверенными клеточными линиями.Мы добавили в Обсуждение разделы, в которых подробно рассматривается этот вопрос.

2) Поскольку периодические испытания необходимы всякий раз, когда кто-то работает с биологическими материалами и, в частности, клеточными линиями, метод повторной идентификации должен быть простым и быстрым для исследователей или клиницистов. Основная причина давних проблем с аутентификацией по клеточной линии — человеческое поведение. Ни у кого нет времени. Поэтому предоставление метода, который можно выполнить за час, потенциально может иметь большое значение в решении проблемы нежелания тестировать клеточные линии.

Зачем нужна быстрая повторная идентификация в криминалистике?

В настоящее время профилирование ДНК для целей судебной экспертизы страдает от задержки, необходимой для транспортировки и тестирования образца, в дополнение к доступности соответствующего оборудования. Известно, что существует огромная задержка обработки образцов для профилирования ДНК, например, из наборов для изнасилования, что, среди прочего, связано с нехваткой доступной рабочей силы и оборудования

(http://www.endthebacklog.org/backlog/what-rape-kit-backlog).Задержка с тестированием означает, что тем временем преступник может совершать дальнейшие преступления.

На месте преступления зарисовка MinION может быть первой проверкой на месте, чтобы иметь возможность действовать быстро и предотвратить дальнейшее преступление.

Стоимость упоминается как проблема судебной экспертизы; тем не менее, такое недорогое устройство, как MinION, потенциально может быть распространено среди большей части полицейского корпуса и управляться слабо обученными полицейскими. Это могло бы помочь повысить эффективность работы полиции.Мы уже полностью там? Пока нет, нам нужны такие устройства, как «Zumbador» для выделения ДНК и подготовки образцов (в разработке в ONT), чтобы иметь возможность проводить повторную идентификацию образцов ДНК на месте с минимальными усилиями. Дальнейшие исследования также позволят идентифицировать смешанные образцы. Широкомасштабное внедрение потребует снижения стоимости одной проточной кюветы. Даже в этом случае наш метод может внести свой вклад в еще один важный шаг на пути к новой системе, в которой ни один образец ДНК в судебной медицине не остается непроверенным.

Концентрация ДНК:

Для аутентификации клеточной линии концентрация ДНК не является проблемой, в большинстве ситуаций присутствует достаточно материала ДНК.

Для криминалистов концентрация ДНК действительно может быть важной ограничивающей проблемой. Шаг амплификации всего генома для разреженных участков генома, обнаруженных в образце, можно добавить в протокол подготовки библиотеки для создания эскизов MinION. В частности, в этих случаях мы думаем, что отсутствие необходимости полагаться на определенные сайты, но возможность случайного отбора SNP по всему геному увеличивает шанс нахождения совпадения, если в используемой справочной базе данных присутствует правильный файл соответствия.

Рецензент № 2:

В этой рукописи описывается использование коммерчески доступной системы MinION, основанной на секвенировании с помощью технологии нанопор, для анализа ограниченного числа 4 (прописью: четырех) образцов ДНК в различных технических сценариях.Затем авторы сравнили результат MinION с базой данных микрочипов SNP, которую они собрали у компаний, напрямую обращающихся к потребителю, и из других источников, чтобы установить выборочные совпадения с использованием разработанного ими байесовского алгоритма. Они утверждают, что, помимо относительно высокой частоты ошибок MinION, их алгоритм предоставляет доказательства соответствия выборки, вероятно, из-за большого количества SNP, генерируемых обоими подходами. Основываясь на своих результатах, авторы предлагают будущее практическое использование этого подхода для целей повторной идентификации в криминалистике и других областях и отстаивают его преимущество в виде дешевого, быстрого и без ПЦР подхода, который контрастирует с более дорогим и медленным подходом ПЦР. в настоящее время используется, например, в криминалистике.Помимо того, что неясно, в чем преимущество ускорения повторной идентификации за счет использования подверженного ошибкам устройства секвенирования (которое, в свою очередь, требует статистического подхода для компенсации ошибок), также неясно, почему ПЦР- свободный подход дает преимущество для данных такого типа.

Мы благодарим рецензента за то, что он поднял этот вопрос, так что у нас есть возможность пояснить наши рассуждения.

Зачем нужна быстрая аутентификация по клеточной линии?

1) Клеточные линии и их потенциальные загрязнители — это живые и динамичные сущности.Две недели в культуре могут кардинально изменить состав клеточной культуры. Мы добавили в рукопись имитационный анализ, который показывает этот эффект с течением времени (рисунок 5 — приложение к рисунку 1). Крайне важно иметь возможность периодически контролировать геномный состав популяции клеток в культуре, чтобы исследователи могли быть уверены, что все эксперименты проводятся с чистыми и проверенными клеточными линиями. Мы добавили в Обсуждение разделы, в которых подробно рассматривается этот вопрос.

2) Поскольку периодические испытания необходимы всякий раз, когда кто-то работает с биологическими материалами и, в частности, клеточными линиями, метод повторной идентификации должен быть простым и быстрым для исследователей или клиницистов.Основная причина давних проблем с аутентификацией по клеточной линии — человеческое поведение. Ни у кого нет времени. Поэтому предоставление метода, который можно выполнить за час, потенциально может иметь большое значение в решении проблемы нежелания тестировать клеточные линии.

Зачем нужна быстрая повторная идентификация в криминалистике?

В настоящее время профилирование ДНК для целей судебной экспертизы страдает от задержки, необходимой для транспортировки и тестирования образца, в дополнение к доступности соответствующего оборудования.Известно об огромном отставании в обработке образцов для профилирования ДНК, например, из наборов для изнасилования, что, среди прочего, связано с нехваткой доступной рабочей силы и оборудования

(http://www.endthebacklog.org/backlog/what-rape-kit-backlog). Задержка с тестированием означает, что тем временем преступник может совершать дальнейшие преступления.

На месте преступления зарисовка MinION может быть первой проверкой на месте, чтобы иметь возможность действовать быстро и предотвратить дальнейшее преступление.

Стоимость упоминается как проблема судебной экспертизы; тем не менее, такое недорогое устройство, как MinION, потенциально может быть распространено среди большей части полицейского корпуса и управляться слабо обученными полицейскими.Это могло бы помочь повысить эффективность работы полиции. Мы уже полностью там? Пока нет, нам нужны такие устройства, как «Zumbador» для выделения ДНК и подготовки образцов (в разработке в ONT), чтобы иметь возможность проводить повторную идентификацию образцов ДНК на месте с минимальными усилиями. Дальнейшие исследования также позволят идентифицировать смешанные образцы. Широкомасштабное внедрение потребует снижения стоимости одной проточной кюветы. Даже в этом случае наш метод может внести свой вклад в еще один важный шаг на пути к новой системе, в которой ни один образец ДНК в судебной медицине не остается непроверенным.

Почему метод без ПЦР дает преимущество? Наши рассуждения следующие:

• Во-вторых, текущие протоколы в основном используют специфические для человека праймеры для ПЦР, и поэтому загрязнители от других видов невозможно обнаружить [Alston-Roberts, Nature reviews 2010].

• В-третьих, линии раковых клеток генетически нестабильны, и потеря гетерозиготности или микросателлитная нестабильность приводят к снижению точности сопоставления. Независимо от того, выбираете ли вы амплификацию ДНК с использованием подхода амплификации всего генома или вообще не используете ПЦР, любой подход может быть частью надежного метода повторной идентификации, поскольку нет необходимости полагаться на ограниченное количество конкретных биаллельных сайтов. .Использование небольшого набора маркеров делает метод повторной идентификации чувствительным к выпадению аллелей.

Очевидно, что STR-типирование выигрывает от избегания PCR, поскольку это устраняет мешающие артефакты проскальзывания, которые могут затруднять повторную идентификацию; однако SNP не создают артефактов проскальзывания. Очевидно, что общее преимущество использования ПЦР для целей идентификации состоит в том, что можно успешно использовать небольшие количества ДНК, что особенно подходит для судебной идентификации.Однако я не могу найти в рукописи пределы чувствительности этого подхода, которые, как я ожидаю, будут выше (т. Е. Требуется больше ДНК), чем это возможно при использовании ПЦР, что ограничит применение.

Концентрация ДНК:

Для аутентификации клеточной линии концентрация ДНК не является проблемой, в большинстве ситуаций присутствует достаточно материала ДНК.

Для криминалистов концентрация ДНК может быть важным ограничивающим фактором. Шаг амплификации всего генома для разреженных участков генома, обнаруженных в образце, можно добавить в протокол подготовки библиотеки для создания эскизов MinION.В частности, в этих случаях мы думаем, что отсутствие необходимости полагаться на определенные сайты, но возможность случайного отбора SNP по всему геному увеличивает шанс нахождения совпадения, если в используемой справочной базе данных присутствует правильный файл соответствия.

Более того, предлагая использовать свой подход в судебной экспертизе, авторы, кажется, игнорируют тот факт, что SNP не используются в рутинном судебном анализе ДНК, несмотря на их технические преимущества, заключающиеся в предотвращении артефактов проскальзывания и т. Д. Просто потому, что базы данных судебных справок состоят из СПО.Следовательно, даже игнорируя различные предостережения этого подхода, когда речь идет о надежности и надежности судебно-медицинской экспертизы ДНК, которую я не вижу подтвержденной в этом исследовании, полезность их подхода для целей идентификации в судебной экспертизе, как предлагается авторами, делает на практике не существует.

Приносим извинения за то, что не указали это четко в тексте. Мы добавили в обсуждение, надеюсь, более четкие указатели, чтобы подчеркнуть важность подходящих справочных баз данных и тот факт, что текущие базы данных основаны на STR.

В настоящий момент частота ошибок MinION слишком высока для последовательности STR, см., Например: https://nanoporetech.com/publications/2015/08/04/sequencing-analysing-and-counting-shorttandem-repeats -он-миньон-2. Мы не чувствовали, что дополнительный эксперимент принесет пользу рукописи, чтобы продемонстрировать это дальше.

Прямое сравнение статистической мощности с использованием STR и маркеров SNP для повторной идентификации выполнено (среди прочих) Sanchez et al., 2010 и Yu et al., 2015, в ходе обсуждения мы поясняем это дополнительно.

И даже если базы данных судебно-медицинской экспертизы ДНК когда-либо перейдут на SNP, что обсуждается в течение многих лет, но ни одна страна не адаптировала это, предложенный подход не будет подходящим, потому что он потребует, чтобы контрольные образцы и следовые образцы были проанализированы. с разными технологиями, что вызывает дополнительные сложности, которых можно избежать за счет использования одних и тех же маркеров и технологий для обоих типов криминалистических образцов, как это имеет место в настоящее время.

В криминалистике идеально было бы использовать одно и то же устройство для повторной идентификации и для создания профиля, чтобы сделать создание базы данных эффективным с точки зрения логистики.Тем не менее, что имеет наивысший приоритет; тот факт, что вы потенциально можете повторно идентифицировать ДНК быстро и на месте, или эффективность построения системы баз данных? Этот вопрос необходимо будет рассматривать для каждой возможности применения (возможно, не для регулярного тестирования на месте преступления прямо сейчас, но после массовых бедствий, возможно, придется создать новые справочные базы данных, которые выиграют от того, что они основаны на SNP, поскольку люди могут отправлять свои файлы, созданные DTC для пример — здесь цель найти любимого человека, и люди будут готовы помочь).Наш метод может открыть новые возможности.

Для применения аутентификации по клеточной линии в этой рукописи показано, что мы можем надежно использовать массивы SNP в сочетании со скетчем MinION для повторной идентификации образца. Это имеет особое применение для тестирования клеточной линии после прибытия в лабораторию и для критической проверки работоспособности или после обширного пассирования. Для этого приложения не представляется очевидным преимущество создания базы данных и повторной идентификации одним и тем же устройством.

Является ли их разработанный байесовский подход, который позволяет сопоставлять подверженные ошибкам данные MinION с данными микроматрицы SNP с низким уровнем ошибок, которые для меня являются сердцем этой рукописи, но не ее приложением, технически обоснованным и достаточно новым, чтобы оправдать публикацию в высокопрофессиональной публикации. журнал наук о жизни, ускользающий от технических знаний этого рецензента и должен оцениваться экспертом по статистической генетике; предлагаемое применение их подхода для целей повторной идентификации, по крайней мере, в области судебной экспертизы — нет.Другой вопрос статистической генетики, который должен быть оценен соответствующим экспертом, заключается в том, действительно ли количество SNP, сопоставленных между MinION и набором данных эталонного массива, действительно достаточно для статистически обоснованной индивидуальной идентификации, которая зависит не только от номеров SNP, но и по степени вариации. Однако из того, что я вижу, я ожидаю, что совпадения SNP между обоими наборами данных будут разными у разных людей, этот вопрос потребует тщательной оценки с использованием гораздо большего количества данных, чем представлено здесь.

Мы благодарим рецензента за разъяснение этих моментов. Мы изменили рукопись и надеемся, что она передает наше сообщение более ясно и убедительно.

Во-первых, мы перенаправили фокус нашей рукописи на незамедлительно реализуемое приложение нашего метода, а именно на аутентификацию по клеточной линии. Наш метод может быть реализован очень быстро на месте и сразу же может быть принят лабораториями. Мы надеемся, что это будет способствовать значительному прогрессу в сокращении использования неизвестных клеточных линий.

Во-вторых, для области криминалистики:

• Множественные исследования показали, что статистическая мощность 48-52 SNP сопоставима с используемыми в настоящее время 10-15 STR (например: Sanchez et al., 2010 и Yu et al., 2015. Кроме того, Lin et al. , 2004 показал теоретически, что ~ 80 случайных SNP достаточно, чтобы отличить людей друг от друга. Наше исследование показывает, что мы действительно повторно идентифицируем ДНК, используя только 60-300 маркеров SNP. Причина нашего диапазона: A) мы произвольно выбираем из генома и встречаются варианты, которые более информативны, чем другие, из-за их частоты аллелей.Это преимущество, поскольку мы не полагаемся на определенные участки генома и, следовательно, не страдаем от выпадения аллелей. Б) Мы должны работать с относительно высоким уровнем ошибок. Тем не менее, в нашей рукописи мы показываем, что мы надежно идентифицируем людей без исключений.

• Мы признаем, что еще предстоит преодолеть ряд серьезных препятствий, прежде чем этот метод можно будет внедрить в полевых условиях. Однако разве рецензент не согласен с тем, что есть возможности для улучшения наших методологий судебной экспертизы с точки зрения скорости и эффективности? Эта рукопись предлагает надежный способ сделать это с использованием передовых технологий и предлагает еще один шаг вперед, чтобы это произошло.

Рецензент № 3:

[…] Мои основные опасения по поводу этой работы в основном связаны с тем, имеет ли она подлинное практическое применение. Первый пример идентификации человека кажется ограниченным по полезности по следующим причинам:

1) Для работы требуется справочная база данных, созданная на основе полногеномных последовательностей или панелей генотипирования. (И данные, сгенерированные этим методом, не могут быть использованы для заполнения такой базы данных, что означает необходимость параллельного построения базы данных ссылок).

2) База данных, используемая для этой работы с веб-сайта DNA.land, не является общедоступной (и не может быть по соображениям конфиденциальности), чтобы другие могли воспроизводить эту работу.

3) Даже если бы было — надо ли поощрять такую ​​работу? Мне немного сложно представить себе вне судебно-медицинских расследований, когда способность идентифицировать людей по их ДНК была бы чем-то обычным.

В отсутствие крупномасштабных генетических баз данных трудно понять, как это может быть полезно.Будут ли авторы выступать за сбор властями идентифицируемых крупномасштабных генетических баз данных? Как это будет работать на практике? Если нет, то это чисто теоретическая демонстрация?

Большое спасибо за вдумчивое введение и положительные отзывы.

Файлы

DNA.land не публикуются по причинам защиты конфиденциальности пользователей — однако обратите внимание, что эта база данных включает 1446 справочных файлов, доступных на OpenSNP.org (описанных в разделе «Материалы и методы»).Эти файлы можно загрузить и использовать в качестве базы данных для воспроизведения наших результатов. Каждому судебно-медицинскому органу необходимо будет создать свою собственную базу данных (защищенную конфиденциальностью), аналогичную применяемой в настоящее время системе CODIS. Поскольку использование массивов SNP и WGS для генотипирования пациентов становится стандартной практикой в ​​биобанках и больницах в рамках усилий по « персонализированной медицине », каждое учреждение, по сути, создаст (d) свою собственную справочную базу данных, которая может использоваться для выборки. аутентификация в доме, когда это необходимо.

Кроме того, наша работа, безусловно, может быть воспроизведена:

• Геномы YE001, JP001 и образцы HapMap (NA12890) доступны в Интернете (https://dna.land/consent). Чтобы увеличить размер базы данных, можно загрузить справочные файлы OpenSNP.org. Можно приобрести образцы ДНК NA12890 — и можно запросить ДНК из YE001, SZ001 и JP001, если это необходимо, по разумному запросу.

• Для аутентификации клеточной линии мы обращаемся к базе данных CCLE (1099 справочных файлов).Наш метод можно протестировать, и наши данные могут быть воспроизведены с использованием этой базы данных и ДНК из любой клеточной линии в базе данных CCLE.

Базы данных криминалистической экспертизы действительно сложнее построить по сравнению с базой данных клеточных линий. Это потребует изменения применяемых в настоящее время методологий, на что могут уйти годы. Однако конкретные приложения могут быть применимы сразу же. Например, для внезапных крупномасштабных событий (массовые бедствия, такие как 9/11) можно использовать массивы SNP, что является эффективным способом определения вариантов одного человека.Это может использоваться вместе с эскизами MinION для быстрой идентификации жертв. Мы понимаем, что это займет некоторое время.

Первой возможностью реализации этого метода будет проверка подлинности клеточных линий и образцов тканей — наш метод сразу же может быть использован в лабораториях.

Второй приведенный пример — идентификация клеточной линии — действительно кажется потенциальным практическим применением, хотя в настоящее время стоимость такого анализа, вероятно, будет препятствовать его внедрению по сравнению с более простым подходом к идентификации на основе STR-панелей.Хотя авторы заявляют, что это делается путем отправки образцов и за большие деньги, это также доступно исследователям для проведения в их собственных лабораториях по невысокой цене (система GenePrint от ProMega по цене <10 долл. / Шт.). Авторы могут захотеть обсудить, как снизить стоимость до аналогичного уровня.

Баланс между затратами на рабочую силу и стоимостью амортизации оборудования и расходных материалов представляет собой компромисс для всех методологий. Тем не менее, потребность в обширной практической лабораторной работе, по-видимому, является основным фактором, позволяющим избежать проверок аутентификации.Это, в свою очередь, обходится сообществу в целом гораздо дороже, поскольку публикуются все более невоспроизводимые исследования, основанные на загрязненных или смешанных биологических материалах.

Система Geneprint требует практической работы в лаборатории для амплификации и проверки STR-фрагментов. Как подробно описано в нескольких ссылках, которые мы цитируем в рукописи, каким-то образом современные методы аутентификации не используются в качестве рутинных лабораторных тестов. Более того, система GenePrint может быть дешевой в расчете на образец, для этого необходимо приобрести устройство для капиллярного электрофореза от Thermo Fisher Applied Biosystems®, которое стоит ~ 120 тысяч долларов.Это резко контрастирует с MinION, где начальные затраты составляют всего 1000 долларов США, после чего можно приобрести расходные материалы (~ 100 долларов за образец) и использовать их для метода аутентификации, который мы представляем, который требует минимальных затрат усилий в лаборатории.

Для единственного относительно небольшого количества образцов, которое требуется многим лабораториям для аутентификации, MinION, таким образом, будет более рентабельным. Для сравнения: метод, использующий GenePrint и ThermoFisher Biosystem, не становится рентабельным до тех пор, пока не потребуется аутентификация более 1000 образцов.

Показанный метод также вряд ли будет хорошо работать с более низкими уровнями загрязнения и / или загрязнения от нескольких клеточных линий и, похоже, не обеспечивает идентификацию в таких смесях.

Большое спасибо за указание на это. Добавили абзац в Обсуждение:

«Предполагается, что основной причиной смешения клеточных линий является человеческая ошибка (Alston-Roberts et al., 2010; Yu et al., 2015; Almeida et al., 2016). […] Ключом к обнаружению заражения клеточной линии человеческими и нечеловеческими клетками является периодическое тестирование.«

Таким образом, я думаю, что для улучшения этой статьи авторам действительно следует потратить время на обрисовку потенциальных практических применений этой техники (в том числе за пределами генетики человека), а затем более подробно обсудить этические проблемы, связанные с таким использованием.

Мы благодарим рецензента за разъяснение этих моментов. Мы изменили рукопись и надеемся, что она передает наше сообщение более ясно и убедительно.

Во-первых, мы перенаправили фокус нашей рукописи на незамедлительно реализуемое приложение нашего метода, а именно на аутентификацию по клеточной линии.Мы надеемся, что это будет способствовать значительному прогрессу в сокращении использования неизвестных клеточных линий.

Во-вторых, для области криминалистики:

Мы согласны с тем, что этические вопросы имеют решающее значение и имеют большое значение для криминалистических приложений и не только. Мы описываем эти моменты в предыдущей версии нашей рукописи, которую все еще можно найти на BioRxiv:

http://www.biorxiv.org/content/early/2016/06/30/061556.article-metrics

Мы считаем, что это выходит за рамки текущей версии нашей статьи, в которой основное внимание уделяется аутентификации клеточных линий и образцов тканей, а также некоторым приложениям в судебной экспертизе.

Применение этого метода для других организмов очень интересно, и в настоящее время мы работаем над этим. Однако, как мы объяснили в нашем ответе на комментарии рецензента 1, это отвлечет нас от нашего внимания к аутентификации клеточных линий и образцов ткани, и мы считаем, что такие приложения заслуживают описания в отдельной рукописи.

[Примечание редакции: автор откликается на повторную рецензию.]

Чтобы быть приемлемыми для публикации, рецензенты запросили внести следующие изменения:

1) Убрать из названия слова «и криминалистика».

2) Убрать из заголовка «или в некоторых судебных приложениях».

3) Убрать из введения четвертый абзац, описывающий судебную экспертизу.

4) Удалите из Обсуждения абзацы, в которых обсуждается полезность подхода для судебной экспертизы, то есть первые два абзаца подраздела «Криминалистика».

5) Убрать «и предоставить альтернативный метод для судебной экспертизы на основе ДНК» из заключительных замечаний.

Мы улучшили рукопись следующим образом: Мы изменили заголовок на «Быстрая повторная идентификация образцов человека с помощью портативного секвенирования ДНК» и удалили все разделы, относящиеся к приложениям судебной экспертизы, как указано в пунктах 1-5.

Кроме того, просьба решить следующие проблемы:

1) Справочная база данных (http://files.teamerlich.org/pidp/CCLE_genotypes.tar.gz) должна храниться в общедоступном репозитории (а не на веб-сайте лаборатории).

2) Была высказана озабоченность по поводу доступности кода, который должен быть опубликован, например, с помощью какой-либо лицензии Creative Commons.

3) Заявление о конкурирующем интересе (Y.E. — консультант компании, занимающейся судебно-медицинской экспертизой ДНК) должно быть более четким.

Спасибо за указание, что мы не можем опубликовать базу данных CCLE через веб-сайт лаборатории — мы удалили ее, так как оказалось, что мы не можем повторно опубликовать базу данных CCLE. Мы предоставляем код, который сразу переводит читателя на веб-сайт CCLE, откуда люди могут загрузить данные.

Мы изменили код GitHub на лицензию GPLv3.

Мы добавили подробности о принадлежности Янива к ArcBio.

https://doi.org/10.7554/eLife.27798.019

В этом видео вам захочется нарисовать миньона, даже если у вас не получается рисовать

Меня поражают мультфильмы и мультфильмы.Это блестящая мысль, которая стоит за каждым персонажем. Рост, одежда, цвета, детали … все это должно идеально соответствовать характеру персонажа. Как только все обдумано, наступает самое сложное — воплотить это в жизнь. И все начинается с наброска.

Конечно, эти зарисовки выглядят устрашающими. Но Роб из Mad Stuff с Робом делает это очень легко с помощью этого урока. Посмотрите это видео, и вы сможете сделать набросок самостоятельно в течение минуты!

Кто бы мог подумать, рисовать миньонов так просто! Вот мой набросок —

Вдохновляйтесь, придайте своему миньону индивидуальный вид и поделитесь своими набросками со мной в Твиттере — @enigmintage

Я рад поделиться с читателем скетчем Джуи Оберой.Продолжайте, ребята! 🙂

Feature Image Источник: Yana G через pinterest.com

эскиз рисунка миньона

Сегодня я покажу вам, как рисовать симпатичных персонажей Миньонов из новейшего фильма «Гадкий Я 3», который выйдет этим летом. Теперь обведу контуры глаз… Нарисуйте 2 больших круга в верхней части тела. Веб-хостинг для малого бизнеса, предлагающий дополнительные бизнес-услуги, такие как: регистрация доменных имен, учетные записи электронной почты, веб-службы, справка FrontPage, ресурсы онлайн-сообщества и различные решения для малого бизнеса.Шаг 3: Раскрасьте индейку. Шаг 4: Добавьте детали, чтобы замаскировать хвостовые перья как больше миньонов… Установите Горизонтальность и Изгиб на -11%, оставьте остальные на 0, нажмите кнопку ОК для подтверждения. Теперь у вас есть красивый набросок миньона из «Гадкий я». Спасена Сюзаной. Сделайте красный / коричневый и нажмите ОК. Затем возьмите инструмент «Круг», нарисуйте круг коричневого цвета и поместите его вокруг… Рисунок миньона. Minion (Sketch) от Kat0365 на DeviantArt DeviantArt — крупнейшее в мире социальное онлайн-сообщество для художников и энтузиастов искусства, позволяющее людям общаться посредством создания и обмена произведениями искусства.Теперь переместите овал через вертикальную линию сверху вниз, как показано на рисунке выше. Сегодня. Dcoloringpages.com — это сайт для выплаты наличных. Шаг 3. В любом случае эти миньоны находятся в тюрьме / тюрьме и хотят, чтобы их нарисовали. Шаг 2. Нарисуйте карман в середине одежды U-образной линией. Рисунки каракули Doodle Art Рисование эскизов Идеи рисования Карандашные рисунки Клубок Рисование каракулей Советы по рисованию Набросок каракули Хорошо, теперь нарисуйте вертикальные и горизонтальные линии симметрии лица.Помогите им. Сначала нарисуйте общие формы тел. Я уверен, что большинство из вас знают, что Гадкий Я 2 выходит, и из-за этого мне просто пришлось сделать урок «как нарисовать злого миньона. Обратите внимание, что формы очень похожи на картофель. Нарисуйте или начертите что угодно на многоразовых пластиковых листах со специальными маркерами — даже используйте изменяемые наклейки, чтобы создать своего собственного миньона на устройстве! Узнайте больше о рисунках из мультфильмов, рисунках миньонов, рисунках. Стюарт игривый, дружелюбный, умный и забавный.6 ноября 2017 г. — Изучите новую доску Тима «Эскиз миньона» на Pinterest. Эти…. Удачи и счастливого рисования! Aquí está el Drawing About de los secuaces amarillos Favoritos de todo el mundo! Раскраска с миньонами. Войдите в систему. Шаг 2: Набросайте и нарисуйте детали миньона, такие как очки и комбинезон. Июль 2020 года. Соедините его с нижней частью одежды с помощью… Кстати, на последнем шаге я нарисовал тело Миньона. Но лучшая часть этого урока рисования может заключаться в том, как воплотить рисунок Миньона в жизнь.Следуйте нашему руководству ниже, чтобы получить простой (и быстрый) способ замаскировать индейку под миньона. Шаг 19: Чтобы получить более законченный вид, аккуратно нарисуйте окончательные линии эскиза ручкой или маркером. Найдите идеальный подарок ручной работы, винтажную и модную одежду, уникальные украшения и многое другое … многое другое. Не стесняйтесь исследовать, изучать и наслаждаться картинами с PaintingValley.com. затем проецируйте свои творения на стены или потолок в 20 раз больше, чем исходный размер. Шаг 3. По сути, это простой трафарет, чтобы нарисовать действительно сложный вид.Это будут очки вашего миньона. Роберт Боб — один из миньонов и дейтерагонист в фильме «Миньоны». Плакат Minions Abbey Road, цена: 3,99 фунта стерлингов — купить онлайн на PopArtUK.com. Не стесняйтесь исследовать, изучать и наслаждаться картинами с PaintingValley.com Minion Drawing Bob. Вырежьте этот овал через две горизонтальные линии, как показано на изображении выше. Рисование миньонов Художественные зарисовки Художественные рисунки Картины дикой природы Рисунки Диснея Каракули Американские девушки Трафареты Персонажи Диснея. Художник Фабиан Нуньес (Fabian Nuñez) создал забавный рисунок, изображающий миньонов из «Гадкого Я» в образе черепашек-ниндзя-подростков.Обычно они создаются как предварительные рисунки, чтобы подготовиться к более законченному произведению искусства. Иллюминация / Youtube. Все лучшие рисунки миньонов 38+ собраны на этой странице. Шаг 1: Распечатайте или нарисуйте индейку. Рисунок Миньона Боба — шаг 11. Покажите свои крутые рисунки с размахом! … Рисунок миньона для детей. Обведите круги (вроде… Как рисовать миньонов. Шаг 1. Найдите изображения и видео о девушках, любви и моде в We Heart It — приложении, чтобы потеряться в том, что вам нравится. Вытяните линию наружу с каждой стороны одежды.Найдите денежный аванс, консолидацию долга и многое другое на Dcoloringpages.com. Бесплатная доставка для многих товаров! Загружено пользователем • Fashion •. Больше информации … Больше идей для вас Pinterest. Сначала щелкните значок «изменить цвета». Minion (Sketch) от Kat0365 на DeviantArt DeviantArt — крупнейшее в мире социальное онлайн-сообщество для художников и энтузиастов искусства, позволяющее людям общаться посредством создания и обмена произведениями искусства. Покадровая версия: youtu.be/xUFctGuEqts Minion Despicable Me. Все самое лучшее Minion Sketch 39+ собрано на этой странице.Los Minions han vuelto !!! Эскиз миньона Рисунок миньона Искусство миньонов Симпатичные миньоны Эскизы из мультфильмов Эскизы животных Эскизы рисунков Эскизы персонажей Миньоны — 10 от Mitch-el на DeviantArt DeviantArt — крупнейшее в мире социальное онлайн-сообщество для художников и любителей искусства, позволяющее людям общаться посредством создания и обмена Изобразительное искусство. #minions #despicableme Закажите миньонов здесь: http://www.amazon.com/Silicandy-Despicable-Quotable-Silicone-Bracelets/dp/B00XK5B9IY/?keywords=rsb+innovations&qid=1446038232&ref=sr_1_68&ie=UTF8&sr изображение миньоны, рисунок, юмор, арт, фильм, гадкий я, смешное # 1240482 автор: awesomeguy — Разрешение 300x244px — Найдите изображение на свой вкус.Нарисуйте отдельные линии для волос в виде колючек. 29. 19 февраля 2019 г. — Изучите рисунок миньона на доске ATC1 на Pinterest. Нарисуйте «X» внутри каждого кружка кнопки. Нарисуйте глаза и очки. На этой странице собраны все лучшие шаблоны для рисования миньонов 38+. Ваши произведения искусства будут надежно упакованы и отправлены в твердом конверте A4 на картонной основе. При желании также доступны распечатки формата A3. Вы можете остановиться на этом быстром рисунке, чтобы получить грубый, схематичный вид, или перейти к шагу ниже, чтобы получить более законченный вид.Рисунок девушки-миньона. Теперь мы собираемся нарисовать цветную часть глаза Миньона. См. Больше идей о эскизах миньонов, миньонах, рисовании миньонов. Рисунок миньона Дэйва. Найдите много отличных новых и подержанных вариантов и получите лучшие предложения на 3D Вулканическая Магма Трещина ПВХ Стикер Стены Детская Комната Пол Виниловая Наклейка Художественная Фреска по лучшим онлайн ценам на eBay! он искусен в видеоиграх и может быть самым искренним из всех миньонов. Посмотрите наше пошаговое видео-руководство о том, как нарисовать миньона, чтобы улучшить свои художественные навыки.Сначала нарисуйте фигуру в форме капсулы, у которой голова и тело изображены на одной иллюстрации. Добавьте немного… Рисунок Миньона Боба. Смотрите больше идей о эскизе миньона, миньонах, рисовании миньонов. Нарисуйте овал по оси Y. DeviantArt — крупнейшее в мире социальное онлайн-сообщество для художников и любителей искусства, позволяющее людям общаться посредством создания и обмена произведениями искусства. Все карты поставляются в плотных виниловых защитных чехлах. Все самое лучшее, что нарисовать миньон шаг за шагом 37+ собрано на этой странице. Подождите, пока чернила высохнут, а затем сотрите карандашные следы.Обведите фигуру прямой линией. Теперь нарисуйте линии рук и ног с небольшими концами овальной формы, как показано выше. Это просто руководство для… Рассеките его пересекающимися горизонтальными и вертикальными линиями. Это глянцевый принт с оригинальным рисунком Миньонов из «Гадкого Я» ограниченным тиражом. На обратной стороне отпечатка я также буду подписывать его от руки. Стюарт — одноглазый невысокий миньон с зачесанной шерстью. Как нарисовать Боба из миньонов. Он не обязательно должен быть идеальным. Инструментом «Прямоугольник» (M) нарисуйте прямоугольник, как на изображении ниже, затем на панели «Обработка контуров» нажмите кнопку «Минус передний», чтобы получить первую часть формы.Набор из 4-х скетч-карт с изображениями персонажей из мультфильма «Гадкий я». Шаблон рисунка миньона. Аблсон делится своим пошаговым руководством по рисованию приспешников Гру. Получите лучшее из страховки или отчета о бесплатном кредите, просмотрите наш раздел о мобильных телефонах или узнайте о страховании жизни. Для второго нарисуйте еще один прямоугольник и в строке меню выберите «Эффект»> «Деформация»> «Выпуклость». Внутри второго круга нарисуйте круг немного меньшего размера. Нарисуйте длинную форму с закругленными углами. Пошаговое руководство по рисованию на тему «Как нарисовать Стюарта из миньонов» Стюарт — один из миньонов и тритагонист в фильме «Миньоны».Как нарисовать миньона. Один из персонажей гнусного меня — Миньон, и сегодня мы узнаем основные принципы того, как нарисовать такой хороший рисунок. 6 ноября 2017 г. — Изучите новую доску Тима «Эскиз миньона» на Pinterest. Я думаю, что это Джерри, Кевин и Карл, но я не могу найти нигде, где я мог бы узнать наверняка. Миньоны; Найдено 7 бесплатных руководств по рисованию миньонов, которые можно рисовать с помощью карандаша, Market, Photoshop, Illustrator, просто следуйте пошаговым инструкциям. Шаг 1. Этот отпечаток представляет собой репродукцию оригинального произведения искусства в высоком разрешении (1200 dpi), и он будет напечатан на высококачественной глянцевой фотобумаге толщиной 8.25 «x 11,5» (A4) Доставка: Я отправлю по всему миру. Боб — невысокий и лысый миньон … Начните с круга в верхней половине страницы. Не стесняйтесь исследовать, изучать и наслаждаться картинами с PaintingValley.com Шаг 2. Эскизы немного отличаются от рисунков. 4 марта 2020 г. — Изучите доску Джерри Митчелла «Рисунок миньона» на Pinterest. Проводить исследования. Все самые лучшие рисунки из мультфильмов миньонов 36+ собраны на этой странице. Игры про рисование миньонов. Детский фильм Макси-плакат: Кажется, нет ничего, что не смогли бы сделать эти авантюрные и веселые персонажи-миньоны! Обращается на 3.Бристольные карточки размером 5 x 2,5 дюйма с ручками Micron и маркерами Warm Grey Prismacolor. Бесплатная раскраска раскраски-многочисленные-миньоны. См. Больше идей о рисовании миньонов, миньонах, смешных миньонах. Не стесняйтесь исследовать, изучать и наслаждаться картинами с PaintingValley.com Не стесняйтесь исследовать, изучать и наслаждаться картинами с PaintingValley.com

Оптовая торговля упаковкой семенной бумаги, Haribo Giant Strawbs Австралия, Выпуски журнала Barron’s, Onkyo A 9110 более богатые звуки, Fútbol Chileno En Vivo, Инновации в технологиях здравоохранения и безопасности, Кондо Litchfield Inn на продажу, Giant Pixy Stix Nutrition,

Купить Коробка для ручки Minion Sketch онлайн

Это красивая цветная коробка с миньоном.Он включает в себя 1 пенал в форме миньона и 12 ручек для рисования …

Примечание:

• В случае срочной доставки, пожалуйста, подтвердите дату доставки, прежде чем переходить к оплате. Срок доставки зависит от местоположения. При отмене заказа взимается минимальная плата за обработку заказа.
• Однако мы стараемся, чтобы ваш подарок был доставлен в соответствии с указанной вами датой, пока он не может быть доставлен до или после выбранной даты доставки.

Политика возврата

• Товар подлежит возврату, если он получен курьерской службой с повреждениями или имеет производственный брак. В этом случае электронное письмо должно быть отправлено с идентификатором заказа, указанным в теме, и должны быть прикреплены четкие изображения. Электронное письмо следует отправить на адрес contact @ liftngiftcom в течение 48 часов с момента доставки.
• Предметы со скидкой не подлежат обмену или возврату.
• Специальные заказы возврату не подлежат.
• Возвращаемые товары должны быть в оригинальной упаковке в целости и сохранности с бирками.
• Возвращенные предметы не должны быть повреждены, использованы или изменены.

Политика отмены

• Отмена недействительна для доставок в тот же день заказчиком.
• Плата за отмену применяется к отмене продукта или переносу сроков, которые были сделаны через день.
• Плата за обработку составляет минимум 5 процентов.
• Отмена распространяется на курьерское отправление до тех пор, пока заказ не будет отправлен.
• При аннулировании будет полный возврат средств по заказам, которые были отменены магазином.

Политика возврата

• Возврат средств за отмену заказа будет осуществлен в течение следующих 3 рабочих дней после запроса на отмену заказа.
• Возврат осуществляется в случае, если покупатель не получил курьерской продукции.
• Возврат инициируется только после того, как возврат сделан и получен. После получения возврата потребуется 4 рабочих дня.
• Возврат может быть инициирован по запросу о доставке неправильного товара. Его также можно заменить, подав запрос на возврат или обмен.

Миньоны были почти роботами

Дизайн персонажей Эрика Гийона из анимационной студии Illumination иллюстрируя эволюцию Миньонов, которые были созданы в сотрудничество с режиссерами Пьером Коффином и Крисом Гадкий Я Рено.

У «Летающих обезьян» так и не было собственного фильма. И Имперский Штурмовики. И Роза Клебб, Одджобб или Челюсти — кореша Moonraker , а не акула. Вы знаете, у кого был собственный фильм? В Миньоны, что по голливудскому закону делает их величайшими прихвостнями в кино за все время. Безусловно, самые смешные и чаще всего имитируемые, поскольку родители маленьких детей вам скажут. Миньоны сами по себе малолетки в их энтузиазме. Симпсоны желтые и похожие на чахлые кислородные баллоны, они говорят что-то вроде скоростной тарабарщины в которых приятные для публики слова, такие как «банан» и «какашки» изредка выходят целыми.Впервые они появились в Гадкий Я (2010), анимационный фильм, который они украли у своего злого хозяина (не все этот злодей, Гру, озвученный Стивом Кареллом). Затем последовали Гадкий Я 2 и 3, также украдены, и вышеупомянутые Миньоны (2015), история происхождения. Но вот их настоящая история происхождения — эксклюзивный взгляд на их ископаемую историю. . .

Команда, создавшая Миньонов для Гадкого Я, состояла из дизайнер персонажей Эрик Гийон и режиссеры Пьер Коффин и Крис Рено.

Дизайн персонажей Эрика Гийона.

1. Здесь мы видим первоначальную концепцию Миньонов как невысоких человеческих фабричных рабочих, созданную, по словам их создателей, в основном для контраста. с гораздо более высоким ГРУ.

Дизайн персонажей Эрика Гийона.

2. По мере развития сюжета и сюжета фильма рабочие превращались в роботов. Идея заключалась в том, что роботы будут более наивными, а также более забавными. Единственные глаза предназначены для того, чтобы передать слабость ума.

Дизайн персонажей Эрика Гийона.

3. В конце концов создатели фильма остановились на неком синтезе человека и робота (или, если не человека, то хотя бы чего-то более или менее органического), соединив невинность первое с «относительностью» второго.

Дизайн персонажей Эрика Гийона.

4-6. Краткий эксперимент с красной пигментацией с последующим усилением упрощения формы, приблизили Миньонов к уникальному, не совсем органическому, не совсем искусственному, но широко раскрытому и полностью детскому какими бы они ни были, мы знаем и любим сегодня.

Дизайн персонажей Эрика Гийона.

7. Первый эскиз Миньона в окончательной форме, с руками в стороны. Обратите внимание, что теперь усаживающийся комбинезон также предполагает подгузник или нижнее белье. Это называется знанием ваша аудитория.

Нет файлов cookie | Daily Telegraph

Нет файлов cookie

Для использования этого веб-сайта в вашем браузере должны быть включены файлы cookie. Чтобы включить файлы cookie, следуйте инструкциям для вашего браузера ниже.

Приложение Facebook: открывать ссылки во внешнем браузере

Существует конкретная проблема с браузером в приложении Facebook, который периодически отправляет запросы на веб-сайты без ранее установленных файлов cookie.Похоже, это дефект в браузере, который необходимо исправить в ближайшее время. Самый простой способ избежать этой проблемы — продолжать использовать приложение Facebook, но не использовать встроенный в приложение браузер. Это можно сделать, выполнив следующие шаги:

1. Откройте меню настроек, щелкнув меню гамбургера в правом верхнем углу
2. Выберите «Настройки приложения» в меню
3. Включите параметр «Ссылки открываются извне» (будет использоваться браузер устройства по умолчанию)

Включение файлов cookie в Internet Explorer 7, 8 и 9
1.Откройте Интернет-браузер
2. Щелкните Инструменты> Свойства обозревателя> Конфиденциальность> Дополнительно
. 3. Установите флажок Переопределить автоматическую обработку файлов cookie
. 4. Для основных и сторонних файлов cookie нажмите Принять
. 5. Нажмите ОК и ОК

.

Включение файлов cookie в Firefox
1. Откройте браузер Firefox
. 2. Щелкните Инструменты> Параметры> Конфиденциальность> Использовать пользовательские настройки для истории
. 3. Установите флажок Принимать файлы cookie с сайтов
. 4.Установите флажок Принимать сторонние файлы cookie
5. Выберите «Хранить до истечения срока действия»
. 6. Нажмите ОК

.

Включение файлов cookie в Google Chrome
1. Откройте браузер Google Chrome
. 2. Щелкните Инструменты> Параметры> Параметры конфиденциальности> Под капотом> Настройки содержимого
. 3. Установите флажок Разрешить установку локальных данных
. 4. Снимите флажок Блокировать установку сторонних файлов cookie
5. Снимите флажок Удалить файлы cookie
. 6. Закройте все

.

Включение файлов cookie в Mobile Safari (iPhone, iPad)
1.Перейдите на главный экран, нажав кнопку «Домой» или разблокировав свой телефон / iPad
. 2. Выберите значок «Настройки».
3. Выберите Safari в меню настроек.
4. Выберите «принять файлы cookie» в меню сафари.
5. Выберите «из посещенных» в меню принятия файлов cookie.
6. Нажмите кнопку «Домой», чтобы вернуться на главный экран iPhone.
7. Щелкните значок Safari, чтобы вернуться в Safari.
8. Прежде чем изменение настроек файлов cookie вступит в силу, необходимо перезапустить Safari.Чтобы перезапустить Safari, нажмите и удерживайте кнопку «Домой» (около пяти секунд), пока дисплей iPhone / iPad не погаснет и не появится главный экран.
9. Щелкните значок Safari, чтобы вернуться в Safari.

Как нарисовать миньона краской: 19 шагов

Введение: Как нарисовать миньона краской

Привет! Это моя первая инструкция, поэтому я решил начать с легкости. В этой инструкции я покажу вам, как нарисовать Миньона из Гадкого Я 1 или 2 (на самом деле это не имеет значения, поскольку все Миньоны выглядят одинаково).Я использую программу под названием Paint. Вероятно, он установлен на вашем компьютере, если у вас Windows. Я действительно не знаю, есть ли это в каких-либо других ОС, но вы, вероятно, можете найти его в Интернете. Все, что вам нужно для этого руководства, — это программа Paint или что-то подобное, изображение Миньона из фильма (для справки), тачпад или мышь и немного терпения.

Добавить TipAsk QuestionDownload

Шаг 1. Измените размер страницы

Откройте Paint на пустую страницу. Теперь вверху страницы будет значок с надписью «изменить размер».Нажмите это. Появится маленькая коробочка. Внизу написано «перекос». На полосе будет табличка с надписью «вертикальная». Введите 20 и нажмите ок.

Добавить TipAsk QuestionDownload

Шаг 2: Рисование тела

Выберите желтый цвет на цветной полосе вверху страницы. Затем выберите инструмент «круг» и сделайте овал посередине страницы. Затем заполните его, используя инструмент «баллончик».

Добавить TipAsk QuestionDownload

Шаг 3: Рисование глаза (ов)

Выберите серый цвет.Сделайте один (или два) круга на голове вашего миньона. Я выбрал этого миньона, чтобы у него был только один глаз. Залейте круг белым цветом для его глаза. Затем выберите черный цвет, залейте черным цветом и нарисуйте зрачок в виде круга, как показано на рисунке.

Добавить TipAsk QuestionDownload

Шаг 4: Рисование рта

Щелкните значок «изменить цвета». Нажмите на желтый и сделайте его немного темнее. Нажмите ок. Затем выберите инструмент «Кривая» и нарисуйте изогнутую линию для рта Миньона.

Добавить TipAsk QuestionDownload

Шаг 5: Рисование другой части глаза

Теперь мы собираемся нарисовать цветную часть глаза миньона.Сначала щелкните значок «изменить цвета». Сделайте красный / коричневый и нажмите ОК. Затем возьмите инструмент «Круг», нарисуйте круг коричневого цвета и поместите его вокруг зрачка. Затем возьмите более темный коричневый цвет (чем тот, который вы только что сделали) и сделайте «остров» вокруг цветной части и зрачка. Затем возьмите немного более светлых коричневых оттенков и нанесите «завитки» на глаза, как показано на картинке.

Добавить TipAsk QuestionDownload

Шаг 6: Рисование века (ов) (необязательный шаг)

Этот шаг вы можете выбрать или не делать.Я сделал этому Миньону веко на дне глаза, чтобы он выглядел виноватым, что они, кажется, так часто имеют. Берем инструмент «Кривая» и выбираем желтый. Сделайте изгиб в нижней части его глаза (глаз), как показано на картинке. Затем залейте его инструментом «банка с краской».

Добавить TipAsk QuestionDownload

Шаг 7: Улучшение очков

Сначала возьмите темно-серый цвет и обведите круг вокруг уже существующих очков. Затем выберите инструмент белый и круг.Залейте его белым. Затем нарисуйте круг сверху на очках, куда попадает лайт. Затем сделайте под ним меньший. * ПРИМЕЧАНИЕ * убедитесь, что вы поставили «облегченный указывает», где «облегченный» поражает … Я злюсь за ошибку, не сделав этого, потому что, когда вы затеняетесь, темная сторона должна быть на противоположной стороне от «облегченного указывает» «. Теперь, чтобы сделать ремешок очков, выберите черный и инструмент «Кривая». По обеим сторонам очков проведите «извилистую» линию. Используйте изображение или ссылку Миньон, чтобы помочь вам.

Добавить TipAsk QuestionDownload

Шаг 8: Рисование его комбинезона и ботинок

Теперь мы нарисуем его комбинезон. Сначала сделайте джинсовую ткань синего цвета. Затем с помощью инструмента «Кривая» нарисуйте линию под его глазом (ами), как показано на картинке. Затем нарисуйте две другие изогнутые линии, идущие вниз от краев первой. Затем нарисуйте еще две изогнутые линии, выходящие со стороны только что созданных изогнутых линий. Затем залейте нижнюю часть комбинезона тем же синим цветом, используя инструмент «банка с краской».Теперь, чтобы сделать его ноги, нарисуйте две изогнутые линии на нижней части его одежды на небольшом расстоянии друг от друга и сделайте это с другой стороны, как показано на рисунке. Сделайте ремешки таким же образом, только сделайте их тоньше и немного ниже ремешка (ов) очков. Теперь сделаем сапоги. Берем инструмент «Кривая» и выбираем черный. Создайте фигуру, как показано на рисунке ниже, сделав различные кривые, чтобы получить желаемую форму. Выберите загрузку с помощью инструмента выбора «свободной формы» и скопируйте ее. Затем приклейте его на другую сторону штанины и залейте их черным цветом. Если нужно, вы можете укоротить ноги, выделив их, а затем подтолкнув вверх.

Добавить TipAsk QuestionDownload

Шаг 9: Рисование кармана и товарного знака «Gru»

Чтобы сделать карман, выберите инструмент «кривой» и нарисуйте слегка изогнутую линию немного ниже верхней части его комбинезона. Затем сделайте нижнюю часть, сделав две изогнутые линии, идущие вниз от первой линии, и затем соединив их с другой линией посередине. Теперь, чтобы сделать товарный знак «Gru» … Возьмите инструмент круга и нарисуйте черный круг, который почти касается краев кармана (используйте ваш эталонный Миньон для этой следующей части).С помощью инструмента «линия» нарисуйте ромбовидную форму в круге, оставив правый край открытым. Затем, используя ваш эталонный миньон, сделайте внутри него букву «G» для «Gru».

Добавить TipAsk QuestionDownload

Шаг 10: Рисование рук и кистей

Теперь, чтобы сделать руки … Возьмите тот же желтый цвет, который вы использовали для создания рта, и проведите линию (или две из них обоих). его руки за спиной) сбоку от тела, как показано на рисунке. Я заставил этого Миньона размахивать одной рукой, а вторую — за спиной…. может, что-то скрывает. Теперь на той стороне, где вы хотите, чтобы его рука находилась за спиной (или рядом с ним), проведите желтую извилистую линию, идущую от верхней части его комбинезона до середины нижней части его комбинезона (для его руки за спиной). его спину). Это укажет на его руку … за спину. Теперь залейте это желтым. Для его размахивания нарисуйте две изогнутые линии, выходящие из верхней части его комбинезона, так, чтобы они выглядели так, как на картинке. Заполните это, а затем сделайте его перчатки, используя вашего эталонного миньона.

Добавить TipAsk QuestionDownload

Шаг 11: Рисование волос

Теперь нарисовать волосы очень просто. Просто сделайте пучок на пышных линиях, выходящих из его головы. Чтобы улучшить его прическу, проведите еще одну линию посередине линии, которую вы уже нарисовали. Это придает ему более «волосяную» текстуру.

Добавить TipAsk QuestionDownload

Шаг 12: Сделайте шаг назад

Теперь уменьшите изображение и посмотрите на свою работу. Ваш Миньон почти готов !!!

Добавить TipAsk QuestionDownload

Шаг 13: Затенение головы

Для первого шага затенения возьмите инструмент «Кривая» и выберите темно-желтый цвет.Затем проследите за верхней частью века и сделайте более темную кривую. Теперь возьмите тот же желтый цвет и с помощью «масляной» кисти нарисуйте линию, очерчивающую нижнюю часть его очков и ремешок очков. Затем сделайте немного светлее желтого цвета и обведите контур последнего желтого цвета, который вы сделали для затенения. Теперь сделайте более легкий и проделайте то же самое. Также не забудьте смешать цвета. Теперь уменьшите изображение и посмотрите на свой прогресс. * ПРИМЕЧАНИЕ * НЕ ПРИ КАКИХ-ЛИБО ОБСТОЯТЕЛЬСТВАХ НАРИСЫВАЙТЕ ОГНЕТУ НА ЕГО ОЧКАХ НА ТАКОЙ СТОРОНЕ, КАК ТЕМНОЕ ЗАТЕМНЕНИЕ !!!

Добавить TipAsk QuestionDownload

Шаг 14: Затенение его века (век)

Затеняя его веко (а), сделайте то же самое, что и с последним затенением.

Добавить TipAsk QuestionDownload

Шаг 15: Затенение его подмышек, рук, рта и тела и изготовление болтов на его очках (ах)

Чтобы сделать болты на его очках, используйте инструмент «аэрограф» и используйте для этого свой эталонный миньон. Теперь все оттенки на этом Instructable одинаковы. Заштрихуйте его подмышки, руки, рот и тело, как показано на фотографиях.

Добавить TipAsk QuestionDownload

Шаг 16: Затенение его комбинезона

Теперь закрасьте комбинезон, используя ту же технику, что и с телом.Не забывайте смешивать!

Добавить TipAsk QuestionDownload

Шаг 17: Затенение его глаз

Затените его глаза, как на картинке. Вы также можете использовать для этого своего эталонного миньона.

Добавить TipAsk QuestionDownload

Шаг 18: Затенение его перчаток и сапог

Теперь используйте картинки и укажите Миньона, чтобы затенять его сапоги и перчатки.

Добавить TipAsk QuestionDownload

Шаг 19: И готово !!!

Теперь ваш Миньон готов !!! Поздравьте себя и полюбуйтесь своей работой.Я надеюсь, что это руководство было легко читать и понимать. Инструкции по использованию Paint вы можете найти в моем блоге здесь: http://createstuffwitho-e-s.blogspot.com/p/how-to-use-paint.html Пока что !!!

Добавить Подсказка Задать вопросЗагрузить

Будьте первым, кто поделится

Вы сделали этот проект? Поделитесь с нами!

Я сделал это!

Рекомендации

.