День: 22.04.1973

Практика работы Технополис «Химград» — как формировать комфортную производственную среду для бизнеса резидентов

Руководство Технополиса «Химград»

Председатель Совета директоров АО «Химград»

Генеральный директор АО «Химград»

Заместитель
генерального
директора
АО «Химград»

Генеральный
директор
ОАО «УК «Идея
Капитал»

Управляющий
ООО «Химград» —
Генеральный
директор
ОАО «УК «Идея
Капитал»

Директор по
корпоративным
финансам

Директор
по правовым
вопросам

Директор
по персоналу

Заместитель
генерального
директора
по безопасности

Директор
по строительству

Главный
бухгалтер

Руководитель
юридического
департамента

Отдел аренды

Главный
инженер

Канцелярия

Отдел по связям
с общественностью
(PR)

Пресс-центр

Информационно-
аналитическая
служба

Председатель Совета директоров АО «Химград», Заместитель Премьер-министра Республики Татарстан – Министр промышленности и торговли Республики Татарстан

Каримов

Альберт Анварович

Каримов Альберт Анварович

Председатель Совета директоров АО «Химград»

Место и дата рождения

г. Казань, 23 января 1976 года

Образование

Кандидат экономических наук.

• 1992–1997 г.г. Казанский государственный финансово-экономический институт. Диплом с отличием
• 1997–2000 г.г. аспирантура Казанского государственного финансово-экономического института. В 2000 г. защитил диссертацию на тему «Реформирование систем управления предприятий машиностроения на примере предприятий машиностроения Республики Татарстан»
• В 1999 г. обучение по Президентской программе подготовки высших управленческих кадров, включая обучение в Калифорнийском университете и стажировку в инвестиционном банке «Merrill Lynch»
• С 2006 по 2008 гг. обучение в Saïd Business School, University of Oxford (Великобритания)

Опыт работы

• 1999 г. Исполнительный директор ООО Инвестиционная компания «ТДТ — Инвест»
• 2001-2004 г. г. Помощник Первого заместителя Премьер-министра Республики Татарстан
• 2002-2004 г.г. Заместитель генерального директора Агентства по развитию предпринимательства Республики Татарстан
• 2004 г. Директор по экономике и финансам ОАО «Инновационно-производственный Технопарк «ИДЕЯ»
• 2006-2010 г.г. Генеральный директор ОАО «УК «Идея Капитал» — Управляющий Технополиса «Химград»
• С 7 августа 2009 г. Председатель Совета директоров ОАО «Тасма»
• С 25 мая 2009 г. Член Совета директоров ОАО «Татнефтехиминвест — холдинг»
• С 21 сентября 2010 г. Председатель совета директоров АО «Химград»

Дополнительная информация

Имеет квалификационный аттестат Федеральной комиссии по рынку ценных бумаг о присвоении квалификации, соответствующей должности руководителя или контролера организации, осуществляющую брокерскую и/или дилерскую деятельность и/или доверительное управление ценными бумагами. От имени Правительства Республики Татарстан объявлена благодарность за добросовестный труд и большой вклад в развитие малого и среднего предпринимательства Республики Татарстан.

Управляющий ООО «Химград» — Генеральный директор ОАО «УК «Идея Капитал»

Грушин

Алексей Владимирович

Генеральный директор АО «Химград»

Гиззатуллин

Айрат Мансурович

Грушин Алексей Владимирович

Управляющий Технополиса «Химград» — Генеральный директор ОАО «УК «Идея Капитал»

Место и дата рождения

г. Казань, 2 сентября 1973 года.

Образование

• 1994 г. Казанский финансово-экономический институт, экономист-социолог;

• 1998 г. Казанский государственный университет имени В.И. Ульянова-Ленина, юрист.

Кандидат экономических наук.

Опыт работы

• 1994-2004 Казанское моторостроительное производственное объединение, г. Казань, начальник Управления по корпоративной собственности и имуществу
• 2008 заместитель генерального директора, ОАСО «Промышленная страховая компания», г. Казань
• 2010 начальник протокольного отдела, аппарат Совета Зеленодольского муниципального района, г. Зеленодольск
• 2011 первый заместитель руководителя Исполнительного комитета Зеленодольского муниципального района, г. Зеленодольск
• 2013 директор по инвестициям и инновациям, АО «Технополис «Химград»

Муниципальный советник 3 класса (дата присвоения 23. 11.2010). Преподавательская деятельность: 2009–2012 КНИТУ-КАИ им. А.Н.Туполева, ИНЭК, кафедра экономики предприятий, дисциплина: «Государственное и муниципальное управление», «Теория организации».

Управляющий ООО «Химград» — Генеральный директор ОАО «УК «Идея Капитал»

Грушин

Алексей Владимирович

Директор по корпоративным финансам

Магомедова

Лариса Юрьевна

Директор по правовым вопросам

Прошкина

Алла Георгиевна

Главный инженер

Телефон: (843) 227-41-40, 212-53-55
Факс: (843) 227-41-49

Начальник отдела по связям с общественностью

Телефон: (843) 227-41-40, 227-41-22
Факс: (843) 227-41-49

Пресс-секретарь

Телефон: (843) 227-41-40, 227-41-22
Факс: (843) 227-41-49

Директор по персоналу

Тимганова

Наталья Алексеевна

Отдел аренды и инвестиционного развития

Телефон: (843) 227-41-41

Главный бухгалтер

Хабибулина

Лилия Мухамедовна

Директор по строительству

Замалетдинов

Руслан Ринатович

Заведующий канцелярией

Мубаракова

Алла Ринатовна

Начальник информационно-аналитического отдела

Рассадина

Марина Сергеевна

Заместитель генерального директора АО «Химград»

Белякова

Светлана Геннадьевна

Руководитель юридического департамента

Горчакова

Светлана Александровна

Телефон: (843) 227-41-40 (вн. 16-224)
Факс: (843) 227-41-49

Заместитель генерального директора по безопасности

Гараев

Эдуард Ильдусович

Агентство молодежной политики и реализации программ общественного развития Красноярского края

Поступившие через «Интернет-приемную» обращения рассматриваются должностными лицами и государственными гражданскими служащими в соответствии с Федеральным законом от 02.05.2006 г. № 59-ФЗ «О ПОРЯДКЕ РАССМОТРЕНИЯ ОБРАЩЕНИЙ ГРАЖДАН РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ».

Вниманию граждан! В связи с осуществлением мер по предотвращению угрозы распространения в Красноярском крае коронавирусной инфекции (COVID-19) в период с 23.03.2020 по 31.01.2021 прием граждан в агентстве молодежной политики и реализации программ общественного развития Красноярского края ограничен.

Организована работа телефона «горячей линии» — 8 (391) 249 30 40, по которому граждане могут обратиться в орган исполнительной власти. Прием письменных и электронных обращений граждан не меняется.

Вы можете направить в Агентство письменное обращение, оформленное в соответствии с требованиями Федерального закона от 02.05.2006 №59-ФЗ «О порядке рассмотрения обращений граждан Российской Федерации». Обращение можно направить на почтовый адрес: пр. Мира 110, а/я 11, г. Красноярск, Красноярский край, Россия, 660009, либо на e-mail: [email protected]

Информацию справочного характера в рамках деятельности Агентства можно получить по номеру 223-89-10, либо по электронной почте [email protected]

Работа по рассмотрению обращений граждан осуществляется в соответствии с нормативными актами:

Федеральный закон от 02.05.2006 № 59-ФЗ «О порядке рассмотрения обращений граждан Российской Федерации»;

Федеральный закон от 09. 02.2009 № 8-ФЗ «Об обеспечении доступа к информации о деятельности государственных органов и органов местного самоуправления»

Федеральный закон от 27.07.2006 № 152-ФЗ «О персональных данных»;

Закон Красноярского края от 25.11.2010 №11-5331 «О порядке обеспечения доступа граждан к информации о деятельности органов государственной власти Красноярского края, иных государственных органов Красноярского края»

Наталия Вдовина — совместные работы — КиноПоиск

Личное дело »   Что это за список?
Искать фильм по создателям: Актер создатели фильма
Дублировала
1.	Хелена Бонем Картер Helena Bonham Carter	фильмов: 5…
Актеры
1.	Сергей Маковецкий	фильмов: 4…
2.	Юрий Беляев	фильмов: 4…
3.	Алексей Дмитриев	фильмов: 4…
4.	Андрей Ильин	фильмов: 4…
5.	Надежда Маркина	фильмов: 4…
6.	Сергей Неудачин	фильмов: 4…
7.	Александр Никольский	фильмов: 4…
8.	Владимир Чуприков	фильмов: 4…
9.	Виктор Балабанов	фильмов: 4…
10.	Алексей Брагин	фильмов: 4…
11.	Андрей Мерзликин	фильмов: 3…
12.	Анна Уколова	фильмов: 3…
13.	Федор Добронравов	фильмов: 3…
14.	Александра Урсуляк	фильмов: 3…
15.	Александр Голубев	фильмов: 3…
16.	Игорь Арташонов	фильмов: 3…
17.	Ярослав Жалнин	фильмов: 3…
18.	Велимир Русаков	фильмов: 3…
19.	Галина Стаханова	фильмов: 3…
20.	Александра Живова	фильмов: 3…
21.	Денис Парамонов	фильмов: 3…
22.	Александр Феклистов	фильмов: 3…
23.	Александр Коршунов	фильмов: 3…
24.	Лика Нифонтова	фильмов: 3…
25.	Александр Числов	фильмов: 3…
26.	Александр Рапопорт	фильмов: 3…
27.	Александр Сирин	фильмов: 3…
28.	Игорь Филиппов	фильмов: 3…
29.	Владимир Капустин	фильмов: 3…
30.	Александр Яковлев	фильмов: 3…
31.	Карэн Бадалов	фильмов: 3…
32.	Александр Андриенко	фильмов: 3…
33.	Елена Гольянова	фильмов: 3…
34.	Иван Мацкевич	фильмов: 3…
35.	Сергей Болотаев	фильмов: 3…
36.	Сергей Холмогоров	фильмов: 3…
37.	Вячеслав Жолобов	фильмов: 3…
38.	Владислав Коноплёв	фильмов: 3…
39.	Дмитрий Буренков	фильмов: 3…
40.	Александр Гиренок	фильмов: 3…
41.	Александр Аблязов	фильмов: 3…
42.	Александр Пашковский	фильмов: 3…
43.	Вадим Померанцев	фильмов: 3…
44.	Елизавета Боярская	фильмов: 2…
45.	Алексей Серебряков	фильмов: 2…
46.	София Каштанова	фильмов: 2…
47.	Евгений Миронов	фильмов: 2…
48.	Андрей Смоляков	фильмов: 2…
49.	Константин Крюков	фильмов: 2…
50.	Артур Сопельник	фильмов: 2…
51.	Мария Шалаева	фильмов: 2…
52.	Константин Лавроненко	фильмов: 2…
53.	Мария Машкова	фильмов: 2…
54.	Анна Цуканова-Котт	фильмов: 2…
55.	Ольга Дибцева	фильмов: 2…
56.	Яна Сексте	фильмов: 2…
57.	Егор Корешков	фильмов: 2…
58.	Алексей Кравченко	фильмов: 2…
59.	Любовь Толкалина	фильмов: 2…
60.	Екатерина Волкова	фильмов: 2…
61.	Александр Балуев	фильмов: 2…
62.	Макар Запорожский	фильмов: 2…
63.	Роман Мадянов	фильмов: 2…
64.	Алексей Панин	фильмов: 2…
65.	Елена Валюшкина	фильмов: 2…
66.	Луиза-Габриэла Бровина	фильмов: 2…
67.	Дмитрий Шевченко	фильмов: 2…
68.	Кристина Бабушкина	фильмов: 2…
69.	Анастасия Стежко	фильмов: 2…
70.	Владимир Ильин	фильмов: 2…
71.	Вадим Андреев	фильмов: 2…
72.	Евгения Осипова	фильмов: 2…
73.	Георгий Дронов	фильмов: 2…
74.	Петр Кислов	фильмов: 2…
75.	Александр Самойленко	фильмов: 2…
76.	Александр Никитин	фильмов: 2…
77.	Сергей Юшкевич	фильмов: 2…
78.	Андрей Свиридов	фильмов: 2…
79.	Сергей Друзьяк	фильмов: 2…
80.	Федор Лавров	фильмов: 2…
81.	Денис Матросов	фильмов: 2…
82.	Георгий Мартиросян	фильмов: 2…
83.	Сергей Газаров	фильмов: 2…
84.	Светлана Немоляева	фильмов: 2…
85.	Ярослав Бойко	фильмов: 2…
86.	Сергей Никоненко	фильмов: 2…
87.	Александр Клюквин	фильмов: 2…
88.	Грант Тохатян	фильмов: 2…
89.	Александр Кузнецов	фильмов: 2…
90.	Никита Тезин	фильмов: 2…
91.	Вадим Цаллати	фильмов: 2…
92.	Виктор Раков	фильмов: 2…
93.	Надежда Лумпова	фильмов: 2…
94.	Сергей Колтаков	фильмов: 2…
95.	Анатолий Отраднов	фильмов: 2…
96.	Евдокия Германова	фильмов: 2…
97.	Марианна Шульц	фильмов: 2…
98.	Иван Кокорин	фильмов: 2…
99.	Борис Хвошнянский	фильмов: 2…
100.	Светлана Рябова	фильмов: 2…
101.	Юрий Назаров	фильмов: 2…
102.	Юрий Ицков	фильмов: 2…
103.	Дарья Калмыкова	фильмов: 2…
104.	Нелли Пшенная	фильмов: 2…
105.	Даниил Воробьев	фильмов: 2…
106.	Владимир Стержаков	фильмов: 2…
107.	Сергей Шнырев	фильмов: 2…
108.	Игорь Миркурбанов	фильмов: 2…
109.	Сергей Апрельский	фильмов: 2…
110.	Сергей Степин	фильмов: 2…
111.	Андрей Лебедев	фильмов: 2…
112.	Игнат Акрачков	фильмов: 2…
113.	Евгений Харланов	фильмов: 2…
114.	Анатолий Гущин	фильмов: 2…
115.	Сергей Варчук	фильмов: 2…
116.	Андрей Стоянов	фильмов: 2…
117.	Юлия Юрченко	фильмов: 2…
118.	Ирина Чериченко	фильмов: 2…
119.	Алексей Аптовцев	фильмов: 2…
120.	Артем Фадеев	фильмов: 2…
121.	Геннадий Юхтин	фильмов: 2…
122.	Алексей Маслодудов	фильмов: 2…
123.	Максим Артамонов	фильмов: 2…
124.	Александр Наумов	фильмов: 2…
125.	Константин Желдин	фильмов: 2…
126.	Владимир Юматов	фильмов: 2…
127.	Семён Шкаликов	фильмов: 2…
128.	Татьяна Кузнецова	фильмов: 2…
129.	Александр Фисенко	фильмов: 2…
130.	Георгий Пицхелаури	фильмов: 2…
131.	Сергей Степанченко	фильмов: 2…
132.	Лилия Кондрова	фильмов: 2…
133.	Сергей Терещенко	фильмов: 2…
134.	Борис Миронов	фильмов: 2…
135.	Татьяна Жукова	фильмов: 2…
136.	Виктор Супрун	фильмов: 2…
137.	Александр Пугачев	фильмов: 2…
138.	Максим Пинскер	фильмов: 2…
139.	Нелли Неведина	фильмов: 2…
140.	Луиза Нерсисян Luiza Nersisyan	фильмов: 2…
141.	Ирина Виноградова	фильмов: 2…
142.	Александр Никулин	фильмов: 2…
143.	Татьяна Пискарева	фильмов: 2…
144.	Сергей Жолобов	фильмов: 2…
145.	Веста Буркот	фильмов: 2…
146.	Мария Кузнецова	фильмов: 2…
147.	Владимир Большов	фильмов: 2…
148.	Михаил Солодко	фильмов: 2…
149.	Константин Гацалов	фильмов: 2…
150.	Алексей Нагрудный	фильмов: 2…
151.	Владимир Бутенко	фильмов: 2…
152.	Ричард Бондарев	фильмов: 2…
153.	Максим Битюков	фильмов: 2…
154.	Дмитрий Михин	фильмов: 2…
155.	Александр Воробьев	фильмов: 2…
156.	Владимир Царулков	фильмов: 2…
157.	Максим Важов	фильмов: 2…
158.	Мария Кунах	фильмов: 2…
159.	Тамара Спиричева	фильмов: 2…
160.	Юлианна Михневич	фильмов: 2…
161.	Олег Ткачёв	фильмов: 2…
162.	Андрей Филиппак	фильмов: 2…
163.	Валентина Лосовская	фильмов: 2…
164.	Владимир Качан	фильмов: 2…
165.	Иван Рыжиков	фильмов: 2…
166.	Мария Бушмелёва	фильмов: 2…
167.	Владимир Довжик	фильмов: 2…
168.	Юрис Лауциньш	фильмов: 2…
169.	Егор Харламов	фильмов: 2…
170.	Наталья Кленина	фильмов: 2…
171.	Леся Кудряшова	фильмов: 2…
172.	Андрей Хворов	фильмов: 2…
173.	Геннадий Горбачев	фильмов: 2…
174.	Татьяна Клюкина	фильмов: 2…
175.	Наталья Палагушкина	фильмов: 2…
176.	Татьяна Плетнева	фильмов: 2…
177.	Алиса Александрова	фильмов: 2…
178.	Николай Перминов	фильмов: 2…
179.	Светлана Аникей	фильмов: 2…
180.	Артем Гайдуков	фильмов: 2…
181.	Елена Коллегова	фильмов: 2…
182.	Юрий Скулябин	фильмов: 2…
183.	Виктор Немец	фильмов: 2…
184.	Михаил Скачков	фильмов: 2…
185.	Алла Музалёва	фильмов: 2…
186.	Виталина Гусак	фильмов: 2…
187.	Алексей Якубов	фильмов: 2…
188.	Людмила Князева	фильмов: 2…
189.	Вера Кавалерова	фильмов: 2…
190.	Дмитрий Архангельский	фильмов: 2…
191.	Риана Райсгард	фильмов: 2…
192.	Александр Воробьев	фильмов: 2…
193.	Елена Доронина	фильмов: 2…
194.	Елена Гиренок	фильмов: 2…
195.	Александр Коротков	фильмов: 2…
196.	Полина Нечитайло	фильмов: 2…
197.	Андрей Перунов	фильмов: 2…
198.	Андрей Снежко	фильмов: 2…
199.	Станислав Костецкий	фильмов: 2…
200.	Джон Баханбаев	фильмов: 2…
201.	Сергей Власов	фильмов: 2…
202.	Ольга Ковалева	фильмов: 2…
203.	Александр Лырчиков	фильмов: 2…
204.	Иван Мамонов	фильмов: 2…
205.	Иван Верховых	фильмов: 2…
206.	Наталья Колдашова	фильмов: 2…
207.	Бронислава Захарова	фильмов: 2…
208.	Владислав Дунаев	фильмов: 2…
209.	Андрей Балякин	фильмов: 2…
210.	Юрий Воробьев	фильмов: 2…
211.	Юрий Гумиров	фильмов: 2…
212.	Андрей Невраев	фильмов: 2…
213.	Татьяна Попова	фильмов: 2…
214.	Сергей Каплунов	фильмов: 2…
215.	Александра Богданова	фильмов: 2…
216.	Константин Столяров	фильмов: 2…
217.	Сергей Плаксин	фильмов: 2…
218.	Евгений Вакунов	фильмов: 2…
219.	Дмитрий Радонов	фильмов: 2…
220.	Алексей Ушаков	фильмов: 2…
221.	Владимир Демидов	фильмов: 2…
222.	Галина Попова	фильмов: 2…
223.	Мария Чувилина	фильмов: 2…
224.	Наргиля Терещенко	фильмов: 2…
225.	Сергей Баровский	фильмов: 2…
226.	Дмитрий Новиков	фильмов: 2…
227.	Виктория Савина	фильмов: 2…
228.	Борис Талах	фильмов: 2…
229.	Михаил Стародубов	фильмов: 2…
230.	Игорь Скурихин	фильмов: 2…
231.	Дмитрий Уросов	фильмов: 2…
232.	Вячеслав Агашкин	фильмов: 2…
233.	Евграф Прохоров	фильмов: 2…
234.	Александр Островский	фильмов: 2…
235.	Юлия Булавко	фильмов: 2…
236.	Сергей Тишин	фильмов: 2…
237.	Андрей Сорокин	фильмов: 2…
238.	Геннадий Терновский	фильмов: 2…
239.	Владимир Краснов	фильмов: 2…
240.	Андрей Зайцев	фильмов: 2…
241.	Виолетта Руднева	фильмов: 2…
242.	Алексей Поляков	фильмов: 2…
243.	Александр Дубовицкий	фильмов: 2…
244.	Виталий Евдокимов	фильмов: 2…
245.	Валерий Крупенин	фильмов: 2…
246.	Регина Домбровская	фильмов: 2…
247.	Дмитрий Овчинников	фильмов: 2…
248.	Игорь Сидоров	фильмов: 2…
249.	Владимир Ильин-Королев	фильмов: 2…
250.	Евгений Зеленов	фильмов: 2…
251.	Ольга Сотник	фильмов: 2…
252.	Евгений Сущёв	фильмов: 2…
253.	Даниил Семченков	фильмов: 2…
254.	Никита Рулев	фильмов: 2…
255.	Тамара Грибкова	фильмов: 2…
256.	Виктория Пивко	фильмов: 2…
257.	Артём Петров	фильмов: 2…
258.	Глеб Маханьков	фильмов: 2…
259.	Раиса Астрединова	фильмов: 2…
260.	Наталья Шеховцева	фильмов: 2…
261.	Михаил Мерцен	фильмов: 2…
262.	Алексей Калакин	фильмов: 2…
263.	Ульяна Панова	фильмов: 2…
264.	Александр Данилов	фильмов: 2…
265.	Феликс Марголин	фильмов: 2…
266.	Александр Панин	фильмов: 2…
267.	Михаил Тыртыш	фильмов: 2…
Режиссеры
1.	Сергей Урсуляк	фильмов: 3…
2.	Резо Гигинеишвили	фильмов: 2…
3.	Александр Мохов	фильмов: 2…
4.	Валентин Донсков	фильмов: 2…
5.	Антон Коломеец	фильмов: 2…
6.	Теймураз Эсадзе	фильмов: 2…
7.	Лев Прудкин	фильмов: 2…
Сценаристы
1.	Сергей Урсуляк	фильмов: 2…
2.	Александр Мохов	фильмов: 2…
3.	Алена Званцова	фильмов: 2…
4.	Вячеслав Муругов	фильмов: 2…
5.	Сергей Калужанов	фильмов: 2…
6.	Ирина Пивоварова	фильмов: 2…
7.	Антон Коломеец	фильмов: 2…
8.	Лев Прудкин	фильмов: 2…
9.	Алексей Подосенов	фильмов: 2…
Продюсеры
1.	Резо Гигинеишвили	фильмов: 3…
2.	Виталий Шляппо	фильмов: 3…
3.	Эдуард Илоян	фильмов: 3…
4.	Влад Ряшин	фильмов: 3…
5.	Алексей Троцюк	фильмов: 3…
6.	Денис Жалинский	фильмов: 3…
7.	Валерий Тодоровский	фильмов: 2…
8.	Рубен Дишдишян	фильмов: 2…
9.	Вячеслав Муругов	фильмов: 2…
10.	Руслан Сорокин	фильмов: 2…
11.	Сергей Сендык	фильмов: 2…
12.	Игорь Толстунов	фильмов: 2…
13.	Валентин Опалев	фильмов: 2…
14.	Юрий Осипов	фильмов: 2…
15.	Армен Григорян	фильмов: 2…
16.	Александр Кессель	фильмов: 2…
17.	Михаил Ткаченко	фильмов: 2…
18.	Максим Коропцов	фильмов: 2…
19.	Иракли Карбая	фильмов: 2…
20.	Иракли Родоная	фильмов: 2…
21.	Семен Капш	фильмов: 2…
Композиторы
1.	Дарин Сысоев	фильмов: 3…
2.	Алексей Шелыгин	фильмов: 2…
3.	Микаэл Таривердиев	фильмов: 2…
4.	Илья Духовный	фильмов: 2…
5.	Дато Евгенидзе	фильмов: 2…
Операторы
1.	Михаил Суслов Mikhail Suslov	фильмов: 2…
2.	Александр Носовский	фильмов: 2…
3.	Егор Кочубей	фильмов: 2…
4.	Сергей Акопов	фильмов: 2…
Художники
1.	Эдуард Галкин	фильмов: 3…
2.	Григорий Пушкин	фильмов: 2…
3.	Наталья Каневская	фильмов: 2…
4.	Ольга Соколова	фильмов: 2…
5.	Алексей Чернов	фильмов: 2…
Монтажеры
1.	Ольга Прошкина	фильмов: 3…
2.	Сергей Иванов	фильмов: 2…
Что это за список? В данном списке указаны кинодеятели, которые принимали участие в тех же фильмах, что и Наталия Вдовина. Список разбит на блоки, в зависимости от роли, которую играют данные люди в «пересекающихся» фильмах — режиссеры, актеры, продюсеры и т.д. Позиции в списке отсортированы по количеству совместных проектов. Страница хорошо иллюстрирует, с кем именно Наталия Вдовина чаще всего сотрудничает в своей работе.

Вот и снова сентябрь…

Дорогой колледж мой, здравствуй!

Молодой, хоть и седой, здравствуй!

Пусть тебе и много лет, здравствуй

Колледж славных побед, здравствуй!

Такими замечательными строками открыли  торжественную линейку, посвящённую Дню знаний и началу нового учебного года в колледже  ведущие, студенты 3 курса Стрельникова Наталья и Королёв Роман.

В приветственном слове директор колледжа, кандидат педагогических наук, Отличник  здравоохранения, Афанаскина  Марина Степановна поздравила студентов и преподавателей с праздником,  пожелала всем успехов, новых достижений и побед.

С поздравлениями к преподавательско-студенческому коллективу обратился депутат  Брянской областной думы Чесалин Сергей Федорович.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

    «За 85 лет более 15 тысяч выпускников получили диплом о профессиональном образовании в  нашем учебном заведении. Мы гордимся тем, что наши выпускники нашли свое место в жизни и занимают ведущие позиции»,  — такие слова были адресованы 303 первокурсникам —  « Мы надеемся, что вы продолжите славные традиции учебного заведения». 

  Старшекурсники  Гришина Марина и Жиденкова Анастасия поделились с новыми студентами полезными советами студенческой жизни. Мирошина Валерия и Прошкина Арина исполнили зажигательный шуточный танец «Клоуны». Вместе с ведущими первокурсники дали традиционную студенческую клятву. С посвящением их в студенческое братство поздравила замечательной песней «Первокурсник»  Яницкая Дарья. 

  Не остались без внимания и студенты остальных курсов. За выдающиеся успехи в обучении, активную общественную деятельность, победы в олимпиадах, конкурсах, фестивалях, спортивных соревнованиях они были награждены дипломами и грамотами. Но особенные награды – сертификаты —   получили 5 студентов, удостоенные звания именного стипендиата имени выпускника колледжа, Героя Советского Союза, генерал-майора танковых войск Ивана Григорьевича Кобякова: 

• Кузнецова Полина (специальность «Сестринское дело»),
• Полещук Анастасия (специальность «Лечебное дело»),
• Михайлова Дарья (специальность «Фармация»),
• Скарилкина Кристина (специальность «Лабораторная диагностика»),
• Тютькова Кристина (специальность «Акушерское дело»).

 

 

 

 

 

 

 

 

Победителем конкурса «Лучшая группа 2014-2015 учебного  года» стал студенческий коллектив группы 49фм5 (классный руководитель Фещенко Елена Николаевна, староста Шкиль Маргарита).

Искренние  поздравления прозвучали в адрес педагогов. «Мы благодарны Вам за то тепло, нежность и любовь, с которыми Вы вкладываете в нас знания не только учебные, но и знания жизни» — от имени всех студентов слова признания сказали ведущие, а Проскурская Екатерина подарила всем педагогам замечательную песню. Завершили торжественную линейку Осадчая Ирина, Малолетняя Елизавета, Терехова Анна, Крылова Татьяна  песней «Первое сентября».

От всей души поздравляем всех с началом учебного года и желаем успехов в учёбе, спорте, искусстве, покорении новых вершин, незабываемых впечатлений студенческой жизни! 

Боровик Н.Н.,  зам. директора по ВР

Фещенко Е.Н., педагог-организатор

Наталья Петрова (Natalya Petrova): фильмография, фото, биография. Актер.

В детстве Наталья хотела стать модельером, после окончания школы в течение года работала манекенщицей в Доме моделей, после чего решила начать актерскую карьеру и уехала в Москву. Яркую и талантливую девушку приняли и в ГИТИС, и в «Щуку», но в итоге Петрова выбрала последний вуз. Будучи еще студенткой, Наталья Петрова снялась в главной роли в фильме Валерия Тодоровского «Любовь». Эта картина, вышедшая в 1991 году, завоевала множество наград, в том числе и международных. Благодаря участию в этом фильме Наталья Петрова практически в одночасье стала звездой. Также в 1991 году она снялась еще в двух фильмах — «Нога» и «Любовь на стороне смерти». В 1992 году она получила приз за лучшую женскую роль на французском кинофестивале. В этом же году она окончила театральное училище, после чего в течение года работала в театре «Ученая обезьяна». Также 1992 год ознаменовался в жизни актрисы ролью в фильме «Вынос тела».

В следующем году – новая роль, на этот раз главная, в картине Виталия Москаленко «Дорога в рай». Также в 1993 году при участии Натальи Петровой вышел фильм «Волчицы». В 1995 году она снялась в детективе Александра Прошкина «Черная вуаль», где работала на одной площадке с такими артистами, как Александр Абдулов, Сергей Маковецкий, Ирина Розанова, Татьяна Васильева.

В 1998 году актриса играла в московском театре «Игроки», созданном на базе театра имени Н.В. Гоголя. В 1999 году Наталья Петрова окончила Высшие курсы сценаристов и режиссеров. Ее преподавателем был прославленный режиссер Александр Митта. В 2001 году она впервые выступила в качестве режиссера. В 2002 году на экраны вышел фильм «Дорога», где Наталья Петрова была одновременно автором сценария, режиссером и исполнительницей главной роли. В том же году она приняла участие в съемках киноальманаха «Черная комната». В 2002 году Наталья Петрова снялась в сериале «Главные роли». В 2008 году в прокат вышел еще один фильм Натальи Петровой под названием «Пари», в этом проекте она выступила в качестве режиссера.

Всероссийский сайт детского творчества :: ПЕРСПЕКТИВА

ФИО автора работы	ОЦЕНКА
Белоглазова Елена Николаевна пос. Белореченск Кировской области	Л2
Гилева Зинаида Григорьевна г.Пермь	Л1
Гильмханова Гульсина Шамилевна , г.Казань	Л1
Дюкова Мария Андреевна г. Рассказово  Тамбовской области	Л1
Жаркова Елена Владимировна, г. Бакалы, Башкортостан	Д3
Зайцева Наталья Борисовна г. Вязники, Владимирская обл.	Л3
Зинатдинова Зульфия Ибрагимовна г.Казань	Д3
Зыбина  Марина Валерьевна г.Пермь	Л1
Игнатьева Анастасия Дмитриевна г. Омутнинск Кировская область	Л1
Исмаилов Карим Ниязович г.Казань	Д1
Копыльцов  Андрей Валерьевич г.Пермь	Л1
Кривилева Наталья Генриховна г. Воткинск, Удмуртия	Л3
Купченко Андрей Дмитриевич г.Ижевск	Д1
Ларионова Галина Михайловна, г.Ирбит, Сврдловская обл.	Л1
Миронова Елена Сергеевна г. Гридино, Пермский край	Д3
Онтикова Ольга Сергеевна	Л1
Плетенев Николай Михайлович г.Пермь	Л2
Полыгалова Оксана Витальевна г.Пермь	Л3
Приходько Наталья Алексеевна	Д1
Прошкина Ольга Игоревна пос. Раздольный, Камчатский край	Л1
Пьянкова Татьяна Александровна г.Пермь	Д1
Розанова Светлана Алексеевна с. Довольное, Новосибирская обл.	Л1
Самситдинова Гульдар Тимерхановна	Л3
Самчук Олег Вадимович	Д3
Степанова Елена Николаевна с.Сюмси, Удмуртской Республики	Л2
Терентьев Аркадий Александрович  г. Гвасюги, Хабаровский край	Д3
Тимирбаева Татьяна Алексеевна г.Пермь	Л1
Трофименко Людмила Алексеевна г.Пермь	Л2
Утямишева  Асия  Сулеймановна с. Красноселькуп, ЯНАО	Л1
Федорова Алевтина Ивановна	Д2
Филатов Максим Сергеевич г.Арсеньев, Приморский край	Д1
Чиркова Ольга Геннадьевна г. Самара	Л2
Шаповалова Ирина Федоровна г. Набережные Челны, Татарстан	Д2
Шевелева Ангелина Владленовна, г. Бисер, Башкортостан	Д1
Шепелева Оксана Владимировна	Л3
Шистерова Ольга Владимировна г. Набережные Челны, Татарстан	Л1
Шишляков Дмитрий Сергеевич	Л3
ШуйскийОлег Николаевич г. Егорьевск, Московская обл	Д2

Шаповалова Наталия Петровна — пользователь, сотрудник

Шаповалова Наталия Петровна — пользователь, сотрудник | ИСТИНА – Интеллектуальная Система Тематического Исследования НАукометрических данных

Деятельность

---

• Статьи в сборниках

  • • 2018 Некоторые результаты использования нейропсихологического подхода к анализу тактильной чувствительности у студентов, специализирующихся в плавании
    • Будыка Е.В., Ковалев Н.К., Ваньков А.А., Иванова Н.Н., Шаповалова Н.П.
    • в сборнике Научно-педагогические школы в сфере физической культуры и спорта: материалы Международного научно-практического конгресса, посв. 100-летию ГЦОЛИФК. — Ч.2 / под общей ред. Ю.В. Байковского, В.А. Москвина, В.Ф.Сопова, серия ISBN 97859908842-1-2, место издания РГУФКСМиТ Москва, с. 187-190

• НИРы

  • • 1 января 2020 — 31 декабря 2025 Двигательная активность студентов и психофизиология здоровья
    • Кафедра физического воспитания и спорта
    • Руководитель: Будыка Е.В. Участники НИР: Булавина Т.А., Ваньков А.А., Иванова Н.Н., Ковалев Н.К., Комаров А.М., Пермяков И.А., Сидорычева Е.Е., Талызин В.П., Уваров В.А., Шаповалова Н.П., Ярмизина Е.
  • • 1 января 2014 — 31 декабря 2019 Двигательная активность студентов и психофизиология здоровья
    • Кафедра физического воспитания и спорта
    • Руководитель: Будыка Е.В. Участники НИР: Ваньков А.А., Заборина И.А., Иванова Н.Н., Качан А.Б., Ковалев Н.К., Комаров А.М., Прошкина Е.Н., Сидорычева Е.Е., Талызин В.П., Цигулев О.Н., Шаповалова Н.П., Ярмизина Е.

• Стажировки в организациях

The Pencil — Международный кинофестиваль Cinecitta

Лауреат приза зрительских симпатий и премий «Лучший фильм» и «Лучшая женская роль» фестиваля русского кино в Онфлёре, язвительная критика современного российского общества писательницей и режиссером Натальей Назаровой сосредоточена на Антонине, умной и сильной художнице (сияющей Надежде Гореловой) из Санкт-Петербурга. -Петербург, которая оказывается в северном лесном городке после того, как ее муж, художник / активист Сергей (Владимир Мишуков) попал в тюрьму.Она устраивается преподавать искусство в местной школе, где ей активно противостоят некоторые ученики и, что более удивительно, некоторые преподаватели. По мере обострения ситуации Антонина понимает, что противостоит разрушенному до основания обществу…

Назарова компенсирует свою критику, запечатлевая яркий свет региона и блеклую красоту его разноцветных деревянных домов — строений, которые намекают на лучшие времена в прошлом. А за всем этим вырисовывается лес и огромная городская фабрика, которая превращает высокие деревья в простой инструмент, с помощью которого художник может выразить так много всего…

Бекрунд получил приз зрительских симпатий, лучший фильм и лучшую женскую роль на фестивале русского кино в Онфлёре.In deze bijtende kritiek van schrijver-regisseur Natalya Nazarova op het hedendaagse Rusland staat Antonina centraal: een slimme, sterke kunstenares uit Sint-Petersburg (de stralende Nadezhda Gorelova) умирают в het bosrijke noorden haatisseur (Владимир Сергеевич). in de gevangenis — beland. Ze wordt kunstdocent op de plaatselijke school, waar ze wordt tegengewerkt door sommige leerlingen en, verrassend genoeg, de faculteit. Wanneer het uit de hand loopt, начиная с Антонины in te zien dat ze het opneemt tegen een door en door gebroken maatschappij…

Назарова zet haar kritiek af tegen het fraaie licht in de regio en de vervaagde schoonheid van zijn kleurrijke houten gebouwen die verwijzen naar betere tijden.En op de achtergrond doemt het woud op, terwijl de enorme fabriek van de stad de torenhoge bomen omvormt tot het simpele instrument waarmee een kunstenaar zoveel kan uitdrukken…

The Edit by Brett Graff ART WEEK 2019 Среда

Предприниматель в сфере гостеприимства Маджио Чиприани организовал встречу только по приглашению, посвященную запуску ресторана Socialista Miami, расположенного рядом с центром Cipriani Downtown Miami. Гости — в том числе Белла Хадид , Vanity Fair Радика Джонс , Джоан Смоллс , Кортни Кардашьян , Нина Добрев , Лука Саббат , Вита Сидоркина , Мэдисон Хедрик , Эзра Уильямс Larry Millstein — насладился фирменными коктейлями Domaine Bertaud Belieu Rose и Socialista.Президент Cirpriani US запустил концепцию уже в Нью-Йорке, Лондоне и Дубае.

Прошлой ночью Художественный музей Филлипса и Басса в сотрудничестве с журналом Cultured Magazine, заслуженным художником Лара Фаваретто и ее недавно заказанной работой, Gummo VI, в культовом ресторане South Beach Mr. Chow. Представленная на The Bass 1 декабря в рамках ее персональной выставки Lara Favaretto: Blind Spot, новая работа для постоянной коллекции The Bass, предназначенная для конкретной площадки, состоит из пяти автоматических щеток для автомойки, которые постоянно вращаются и стираются о металлические пластины.Организатор Вивиан Пфайффер , заместитель председателя и глава отдела развития бизнеса, Америка, Phillips и Сильвия Карман Кубинья, , исполнительный директор и главный куратор Художественного музея Басс, среди гостей были Мера и Дон Рубель , Сара Харрельсон , Laure Hériard Dubreuil , Lily Kwong , Sarah Arison , Rodman Primack , Andrea Glimcher и Polina Proshkina .

Нейман Маркус Бал Харбор и Ролан Муре устроили ужин для гостей, состоящих из 18 женщин.В Форте ди Марми на Оушен Драйв, Hayley Sloman , Barbara Hevia , Marisa Toccin Lucas , Krista Rosenberg , Suzy Buckley Woodward обедали бурратой, жареными цветами цукини, салатами из артишоков и свежим луцианом с фисташковым джелато. на десерт. Гости забрали духи Roland Mouret.

(продолжение … о том, что происходит сегодня вечером…. )

Последние исследования семьи Аргонавт

Платигельминты составляют один из основных типов беспозвоночных животных, населяющих широкий спектр экосистем, и один из самых успешных в адаптации к паразитической жизни.Небольшие некодирующие РНК участвуют в регуляции сложных переходов в развитии у модельных паразитических видов. Примечательно, что паразитические плоские черви утратили пути РНК Piwi, но приобрели новый ген Argonaute. Здесь мы проанализировали, сопоставили и сравнили сохранение путей малых РНК у нескольких свободноживущих видов (парафилетическая группа, традиционно известная как « турбеллярии ») и паразитических видов (организованных в монофилетическую кладу Neodermata), чтобы распутать возможные адаптации во время перехода к паразитизм.Наши результаты показали, что полные пути miRNA и RNAi присутствуют у всех проанализированных свободноживущих плоских червей. Примечательно, что хотя все «турбеллярии» имеют белки Piwi, они были потеряны у паразитических Neodermantans. Более того, два кластера генов Argonaute класса Piwi присутствуют у всех «турбеллярий». Интересно, что мы идентифицировали расходящийся класс Piwi Argonaute исключительно у свободноживущих плоских червей, которых мы назвали «Fliwi». Кроме того, другие ключевые белки путей Piwi были законсервированы у «турбеллярий», в то время как ни один из них не был обнаружен у Neodermatans.Помимо Piwi и канонических белков Argonaute, у анализируемых видов был идентифицирован специфичный для плоских червей класс Argonautes (FL-Ago), подтверждающий его предковую принадлежность ко всем Platyhelminthes. Примечательно, что эта клада была расширена у паразитических Neodermatans, но не у свободноживущих видов. Эти специфичные для филы Argonautes показали более низкую консервативность последовательности по сравнению с другими белками Argonaute, что позволяет предположить, что они могли подвергаться высоким темпам эволюции. Однако ключевые остатки, участвующие во взаимодействии с малой РНК и расщеплении мРНК у канонических Argonautes, были более консервативными в FL-Agos, чем в Piwi Argonautes.Связано ли это со специализированными функциями и адаптацией к паразитизму у Neodermatans, остается неясным. В заключение, различия, обнаруженные в консервации генов, последовательности и структуре семейства Argonaute, предполагают предварительную биологическую и эволюционную диверсификацию, уникальную для Platyhelminthes. Замечательные различия в путях малых РНК между свободноживущими и паразитическими плоскими червями указывают на то, что они, возможно, участвовали в адаптации Neodermatans к паразитизму.

Рейтинг IDSF Standard Adult в Москве — Россия 07 февраля 2009 г.

v 900ov Роман — Валерия Деревягина

1.	Николай Дарин — Екатерина Федоткина	RUS	70	112
2.	Евгений Завьялов — Людмила Швецова	RUS	65	104
3.	Игорь Потовин — Ирина Краснова	RUS	60	96
4.	Андрей Филиппов — Анастасия Тарлыкова	RUS	55	88
5.	Иван Новиков — Вероника Маркова	RUS	53	85
6.	Максим Паршин — Екатерина Ким	RUS	50	80
7.	Егор Безукладников — Наталья Безукладникова	RUS	45	72
8.	Павел Эйдинов — Татьяна Ливатова	RUS	43	69
9.	Игорь Круглов — Ольга Щербина	RUS	41	66
10.	Антон Недоцуков — Мария Митрохина	RUS	39	62
11.	Станислав Река — Ольга Морозова	RUS	35	56
12.	Александр Дмитренко — Мария Мардерфельд	RUS	30	48
13.	Сергей Сутырин — Наталья Сажина	RUS	20	32
14.	Антон Шумов — Дарья Кушнир	RUS	20	32
15.	Денис Красиков — Дарья Шевелилова	RUS	20	32
15.	Александр Радюш — Алиса Павлова	RUS	20	32
17.	Егор Дулебенец — Юлия Воронова	RUS	20	32
18.	Владимир Степочкин — Анастасия Тенякова	RUS	20	32
19.	Антон Силантев — Юлия Карасева	RUS	20	32
20.	Алексей Глухов — Анастасия Мешкова	RUS	20	32
20.	Ярослав Белый — Елизавета Мокеева	UKR	20	32
22.ven	Сергей — Ольга Ермакова	RUS	20	32
23.	Филипп Борисенок — Мария Патрати	RUS	20	32
24.	Евгений Муштуков — Юлия Родина	RUS	20	32
25.	Виталий Денисов — Наталья Пазына	RUS	15	24
26.	Алексей Иванов — Фирсова Ирина	RUS	15	24
26.	Сергей Клюев — Александра Шошнева	RUS	15	24
28.	Григорий Коломеец — Эвелина Павловская	RUS	15	24
29.	Артем Зубарев — Ольга Богданова	RUS	15	24
30.	Алексей Секин — Наталья Середина	RUS	15	24
30.	Илья Серебряков — Маргарита Дерябина	RUS	15	24
30.	Никита Золотарев — Никол Матюшенко	LAT	15	24
33.	Станислав Зубик — Юлия Зюзина	RUS	15	24
34.	Андрей Коно — Ксения Копышева	RUS	15	24
35.	Александр Володин — Анна Манаенкова	RUS	15	24
36.	Алексей Бредихин — Мария Керенцева	RUS	15	24
36.	Артем Балашов — Валентина Балашова	RUS	15	24
36.	Илья Миргородский — Анна Миргородская	RUS	15	24
39.	Павел Бичуров — Екатерина Головина	RUS	12	19
39.	Сергей Пешкун — Екатерина Голикова	RUS	12	19
41.	Павел Рысин — София Щипская	RUS	12	19
41.	Александр Шели — Юлия Белова	RUS	12	19
43.	Артем Хашимов — Наталья Воронкова	RUS	12	19
43.	Илья Ларионов — Екатерина Ожиганова	RUS	12	19
43.	Сергей Потемкин — Мария Потемкина	RUS	12	19
46.	Игорь Нестеров — Ольга Приамилова	RUS	12	19
46.	Евгений Барский — Ксения Исакова	RUS	12	19
46.	Никита Латышев — Екатерина Максимова	RUS	12	19
49.	Роман Шатров — Алена Фомичева	RUS	5	8
49.	Андрей Папаев — Дарья Мухинова	RUS	5	8
49.	Сергей Терновских — Татьяна Ирхина	RUS	5	8
49.	Михаил Николаев — Ксения Киреева	RUS	5	8
53.	Павел Лопатин — Ольга Лилло	RUS	5	8
54.	Алексей Царев — Александра Макеева	RUS	5	8
54.	Владислав Коротченко — Анна Шевлякова	RUS	5	8
56.	Юрий Дружников — Мария Тихонова	RUS	5	8
56.	Артем Раннев — Ольга Васильева	RUS	5	8
56.	Артем Виноград — Виноградова Ирина	RUS	5	8
56.	Денис Медведев — Александра Пак	RUS	5	8
60.	Геннадий Гераскин — Полина Евдокимова	RUS	5	8
60.	Сергей Кравченко — Ксения Гараева	RUS	5	8
60.	Виталий Sur — Ксения Протопопова	RUS	5	8
60.	Михаил Ефремов — Алиса Батенина	RUS	5	8
60.	Роман Ребрик — Татьяна Ильина	RUS	5	8
60.	Геннадий Севостьянов — Татьяна Мещерякова	RUS	5	8
60.	Александр — Аида Скрипцова	RUS	5	8
60.	Алексей Блохин — Юлия Виршке	RUS	5	8
60.	Артур Хайруллин — Юлия Сайтгалиева	RUS	5	8
69.	Илья Черняков — Екатерина Данилова	RUS	5	8
69.	RUS	5	8
69.	Алексей Трофимов — Дарья Казанцева	RUS	5	8
69.	Сергей Михалков — Елена Филиппова	RUS	5	8
73.	Ринат Сунитулин — Мария Перегудова	RUS	5	8
73.	Илья Гоготов — Анастасия Лисицкая	RUS	5	8
73.	Алексей Фроленков — Екатерина Токарева	RUS	5	8
76.	Дмитрий Воробьев — Валентина Мезенцева	RUS	5	8
76.	Игорь Арсеньев — Екатерина Теремкова	RUS	5	8
76.	Евгений Корш — Марина Фролова	RUS	5	8
79.	Георгий Севастьянов — Екатерина Сиротина	RUS	5	8
79.	Александр Рягузов — Юлия Туманова	RUS	5	8
79.	Евгений Лазарев — Александра Сытина	RUS	5	8
79.	Артем Брай — Анастасия Гусева	RUS	5	8
83.	Никита Матвиенко — Анна Дьячук	RUS	5	8
83.	Владимир Зверев — Наталья Савинкова	RUS	5	8
83.	Дмитрий Стоборов — Екатерина Крысанова	RUS	5	8
83.	Алексей Шишленков — Ирина Копытина	RUS	5	8
87.	Алексей Власов — Кристина Шарова	RUS	5	8
87.	Адель Гумеров — Камилла Миннуллина	RUS	5	8
87.	Александр Смирнов — Анна Шунина	RUS	5	8
90.	Павел Добросердов — Дутчак Татьяна	RUS	5	8
90.	Андрей Дубинкин — Ксения Абросимова	RUS	5	8
92.	Евгений Гринин — Ольга Морозова	RUS	5	8
92.	Андрей Уткин — Евгения Яковлева	RUS	5	8
94.	Вадим Сибаев — Екатерина Шалина	RUS	5	8
95.	Александр Цыганов — Анна Гераськина	RUS	5	8
96.	Михаил Колмыков — Лия Оганесян	RUS	5	8
96.	Юрий Афонин — Марина Дорохова	RUS	5	8
98.	Олег Сурма — Наталья Соколова	RUS	2	3
99.	Алексей Фаркаш — Екатерина Бутивщенко	RUS	2	3
99.	Руслан Эльсиев — Полина Чернышова	RUS	2	3
99.	Денис Малюстин — Ирина Таушканова	RUS	2	3
102.	Артем Мубаракшин — Александра Белоус	RUS	2	3
103.	Илья Дементьев — Ксения Лапкина	RUS	2	3
103.	Владимир Вяткин — Екатерина Малахова	RUS	2	3
103.	Алексей Соседов — Елена Бабаева	RUS	2	3
103.	Жаки Бутузаф — Елизавета Смирнова	RUS	2	3
103.	Денис Шардин — Юлия Гусева	RUS	2	3
108.	Игорь Николаев — Анна Шорина	RUS	2	3
109.	Руслан Тахиров — Анастасия Извекова	RUS	2	3
109.	Александр Супырев — Лилия Ягудина	RUS	2	3
111.	Михаил Пустохин — Мария Махотко	RUS	2	3
111.	Александр Отсечкин — Александра Луценко	RUS	2	3
111.	Александр Подгорелкин — Анастасия Антонова	RUS	2	3
111.	— Виктория Коржакова	RUS	2	3
111.	Никита Худяков — Арина Тихомирова	RUS	2	3
116.	Артем Шеховцов — Алена Черкашина	RUS	2	3
116.	Антон Бетнев — Анастасия Веденеева	RUS	2	3
116 Кир. — Дарья Мордик	RUS	2	3
119.	Дмитрий Кузин — Ксения Романенко	RUS	2	3
119.	Андрей Патрушев — Ксения Муцева	RUS	2	3
121.	Юрий Большаков — Елена Литвиненко	RUS	2	3
121. — Анна Фролова	RUS	2	3
121.	Горислав Ячменев — Юлия Лузина	RUS	2	3
124.	Михаил Стрельников — Анна Трусова	RUS	2	3
124.	Тимофей Ларичев — Юлия Кукарина	RUS	2	3
124.	Вадим Головчанов — Юлия Воронцова	RUS	2	3
124.	Сергей Красильников — Юлия Драгина	RUS	2	3
128.	Максим Жемчужников — Мария Жемчужникова	RUS	2	3
128.	Данил Преображенский — Анастасия Филиюшина	RUS	2	3
I	3
I — Анна Анакина	RUS	2	3
128.	Илья Щеголев — Валентина Сегеда	RUS	2	3
128.	Геннадий Котелевец — Тамара Соловьева	RUS	2	3
133.	Сергей Южилкин — Тамила Сиволобова	RUS	2	3
133.	Владимир Берулава — Мария Задитовская	RUS	2	3
133.	Михаил Григорьев — Виктория Хашимова	RUS	2	3
136.	Андрей Корнев — Екатерина Корнева	RUS	2	3
136.	Александр Сергеев — Евгения Винокурова	RUS	2	3
136.	Евгений Степанишин — Надежда Яшкина	RUS	2	3
136.	Евгений Завадских — Кристина Никулина	RUS	2	3
136.	Иван Турбасов — Екатерина Кобзарь	RUS	2	3
141.	Артем Новиков — Светлана Добрица	RUS	2	3
141.	Сергей Козлов — Екатерина Алексеева	RUS	2	3
141.	Алексей Положаенко — Вера Ширяева	RUS	2	3
141.	Дмитрий Верлуп — Юлия Гревцова	RUS	2	3
141.	Павел Мириасов — Анастасия Бодунова	RUS	2	3
141.	Сергей Козадеров — Екатерина Формалева	RUS	2	3
141.	Илья Гороховский — Ирина Панфилова	RUS	2	3
148.	Иван Багаев — Наталья Шевченко	RUS	2	3
148.	Григорий Бирюков — Елена Башмакова	RUS	2	3
148.	Данис Шарип — Дарья Шалабина	RUS	2	3
148.	Никита Соколов — Лариса Лазарева	RUS	2	3
148.	Александр Фомин — Анна Бочкарева	RUS	2	3
148.	Николай Харинов — Галина Емельяненко	RUS	2	3
148.	Кирилл Гончаров — Дарья Тарасова	RUS	2	3
148.	Сергей Воробьев — Вера Татаркина	RUS	2	3
156.	Руслан Губарев — Анастасия Балдина	RUS	2	3
156.	Александр Родионов — Кристина Макарова	RUS	2	3
158.	Александр Милов — Ксения Смолина	RUS	2	3
158.	Дмитрий Киселев — Ольга Нагайцева	RUS	2	3
160.	Кирилл Шишлянников — Алина Беляева	RUS	2	3
160.	Владимир Долотов — Ольга Малахаева	RUS	2	3
160.	Михаил Чупра — Екатерина Кончугова	RUS	2	3
163.	Андрей Гаврилов — Ксения Максимова	RUS	2	3
163.	Роман Малков — Анастасия Вербианова	RUS	2	3
163.	Андрей Проскурин — Екатерина Проскурина	RUS	2	3
163.	Дмитрий Петров — Екатерина Яровикова	RUS	2	3
167.	Евгений Бакулин — Анастасия Лебакина	RUS	2	3
167.	Алексей Мечетный — Галина Карпова	RUS	2	3
167.	Сергей Зелянин — Валерия Комиссарова	RUS	2	3
167.	Александр Милешин — Юлия Овчинникова	RUS	2	3
167.	Эльдар Кремчеев — Ольга Третьякова	RUS	2	3
167.	Сергей Лукьянов — Ирина Каменская	RUS	2	3
173.	Антон Коровин — Алевтина Николаева	RUS	2	3
173.	Евгений Поли — Елизавета Рыжкова	RUS	2	3
173.	Грач Казарян — Виктория Харитонова	RUS	2	3
173.	Виктор Поволоцкий — Ксения Дудкина	RUS	2	3
177.	Павел Шибанов — Анастасия Хрычева	RUS	2	3
177.av	Дмитрий — Яна Лапкина	RUS	2	3
177.	Сергей Галиамичев — Юлия Капустина	RUS	2	3
177.	Игорь Козлов — Елена Черных	RUS	2	3
177.	Антон Волков — Элла Наумова	RUS	2	3
177.	Алексей Поляков — Елена Литвинюк	RUS	2	3
183.	Сергей Сергеев — Ирина Ивакина	RUS	2	3
183.	Денис Васин — Вера Курочкина	RUS	2	3
185.	Андрей Кудишин — Марина Корнилова	RUS	2	3
186.	Руслан Кривоногов — Эла Бородич	RUS	2	3
187.	Глеб Гончаров — Татьяна Насонова	RUS	2	3
187.	Алексей Сидоров — Ирина Беляева	RUS	2	3
189.	Арташес Оганян — Екатерина Антипова	RUS	2	3
189.	Илья Ковален — Александра Слободянюк	RUS	2	3
191.	Никита Шульбаев — Инна Файгенбаум	RUS	2	3
191.	Артур Мнацаканян — Анастасия Комягина	RUS	2	3
191.	Константин Волынский — Маргарита Кригер	RUS	2	3
19ay Никол1.Май	— Елизавета Тучкова	RUS	2	3
191.	Дмитрий Семенов — Ольга Ерцева	RUS	2	3
191.	Тимур Гусейнов — Марина Смолина	RUS	2	3
191.	Александр Любуцин — Алиса Краснова	RUS	2	3
191.	Станислав Семенов — Дарья Безменова	RUS	2	3
199.	Александр Самойлов — Валерия Бочарова	RUS	2	3
199.	Алексей Сафронов — Дарья Копп	RUS	2	3
199.	Алексей Фомин — Ольга Орлова	RUS	2	3
199.	Игорь Зайцев — Екатерина Павлова	RUS	2	3
203.	Сергей Бяшеков — Ольга Доржиева	RUS	2	3
203.	Евгений Кучин — Валентина Бабич	RUS	2	3
203.	Дмитрий Панков — Марина Малинина	RUS	2	3
203.	Александр Филимонов — Верица Джорджевич	RUS	2	3
203.	Павел Удин — Юлия Самородова	RUS	2	3
203.	Владимир Герасимов — Александра Анисимова	RUS	2	3
209.	Игорь Троянович — Валерия Батт	RUS	2	3
209.	Евгений Филатов — Юлия Черепенникова	RUS	2	3
211.	Алексей Перегонцев — Ирина Арепьева	RUS	2	3
212.	Николай Мужичков — Елизавета Кирилкина	RUS	2	3
213.	Денис Черемухин — Дарья Чернышева	RUS	2	3
214.	Лев — Полина Степченкова	RUS	2	3
214.	Михаил Коцарь — Ольга Мельник	RUS	2	3
214.	Игорь Маркин — Ирина Володина	RUS	2	3
214.	Рустам Хасанов — Аделия Гайваронская	RUS	2	3
214.	Павел Чурсаев — Екатерина Карманова	RUS	2	3
219.	Евгений Шваров — Анна Хомякова	RUS	2	3
220.	Роберт Баязитов — Алина Хайрутдинова	RUS	2	3
220.	Евгений Мосалев — Татьяна Мосалева	RUS	2	3
220.	Денис — Королева Марианна	RUS	2	3
220.	Антон Тимофеев — Алена Крохина	RUS	2	3
220.	Сергей Костарев — Татьяна Шейна	RUS	2	3
225.	Андрей Комаров — Марина Кругликова	RUS	2	3
225.	Николай Белкин — Алеся Заика	RUS	2	3
225.	Александр Юрин — Ангелина Мамонтова	RUS	2	3
225.	Дмитрий Павлов — Александра Березина	RUS	2	3
229.	Александр Михайлов — Дарья Артюхина	RUS	2	3
229.	Александр Герман — Алена Тамарина	RUS	2	3
231.	Денис Апашкин — Светлана Захарова	RUS	2	3
231.	Михаил Барзилович — Карина Сокол	RUS	2	3
231.	Олег Никоненко — Екатерина Кравченко	RUS	2	3
231.	Владимир Буйлов — Анастасия Загрядская	RUS	2	3
235.	Павел Хоба — Юлия Короткая	RUS	2	3
235.	Артем Ангудович — Валерия Гужва	RUS	2	3
235.	Александр Скопинцев — Екатерина Скопинцева	RUS	2	3
235.	Vitaly — Мария Виноградова	RUS	2	3
235.	Александр Гуреев — Анастасия Мажорова	RUS	2	3
240.	Евгений Анохин — Лариса Рагулина	RUS	2	3
240.	Алексей Шошин — Екатерина Арсеньева	RUS	2	3
240.	Антон Лучин — Анастасия Никольская	RUS	2	3
243.	Олег Гайворонский — Юлия Чулкова	RUS	2	3
243.	Алексей Мастюков — Мария Анурова	RUS	2	3
245.	Андрей Федотов — Елена Ленская	RUS	2	3
245.	Антон Морозов — Валентина Халина	RUS	2	3
247.	Константин Клейменов — Ксения Шестакова	RUS	2	3
247.	Максим Кукушкин — Елена Ендовицкая	RUS	2	3
247.	Николай Чистов — Алина Первухина	RUS	2	3
250.	Тимофей Демихов — Дарья Барабанова	RUS	2	3
251.	Владимир Селезнев — Татьяна Артемова	RUS	2	3
251.	Александр Гисс — Ольга Власова	RUS	2	3
253.	Павел Козин — Полина Паздникова	RUS	2	3
254.	Иван Ефремов — Екатерина Черных	RUS	2	3
255.	Дмитрий Будигай — Мария Чуркина	RUS	2	3
255.	Андрей Долженко — Любовь Прошкина	RUS	2	3
257.	Антон Алешкин — Юлия Котариди	RUS	2	3
258.	Игорь Сарвилин — Ольга Харченко	RUS	2	3
259.	Олег Великанов — Олеся Стефанович	RUS	2	3

Радиоактивные (90Y) повышающие конверсии наночастицы, конъюгированные с рекомбинантными мишенями токсин для синергетической нанотераностики рака

Значение

Новые раковые нанотехнологии позволяют целенаправленно доставлять значительные количества лекарств к очагам рака с одновременным уменьшением побочных эффектов из-за меньшего накопления в критических органах.Это вызывает загрузку наноносителей терапевтическим грузом и контрастными агентами, что позволяет сочетать терапию рака и визуализацию опухоли соответственно. В данной статье сообщается о реализации такой комбинированной терапии с использованием конъюгатов наночастиц с апконверсией, допированных радионуклидом иттрием-90, и целевого токсина. Полученный гибридный комплекс показал высокую терапевтическую эффективность и высокую контрастность изображения как in vitro, так и in vivo.

Abstract

Мы сообщаем о комбинированной терапии с использованием наночастиц с повышающим преобразованием (UCNP) в сочетании с двумя терапевтическими агентами: бета-излучающим радионуклидом иттрием-90 ( ⁹⁰ Y), фракционно замещающим иттрий в UCNP, и фрагментом экзотоксина A, полученным из Pseudomonas aeruginosa генетически слита с нацеленным белком анкириновых повторов (DARPin), специфичным для рецепторов HER2.Полученный гибридный комплекс UCNP-R-T тестировали с использованием клеток аденокарциномы молочной железы человека SK-BR-3, сверхэкспрессирующих рецепторы HER2, и мышей с иммунодефицитом, несущих HER2-положительные опухоли ксенотрансплантата. Фотофизические свойства UCNPs позволили получить изображения распределения UCNP-R-T в клетках и животных без фона. Наблюдалось специфическое связывание и захват комплексов UCNP в клетках SK-BR-3 с отдельными цитотоксическими эффектами, индуцированными ⁹⁰ Y и PE40, которые характеризовались IC ₅₀ 140 мкг / мл (UCNP-R) и 5.2 мкг / мл (UCNP-T) соответственно. Когда оба терапевтических агента были объединены в UCNP-R-T, синергетический эффект заметно увеличился, ~ 2200 раз, в результате чего IC ₅₀ = 0,0024 мкг / мл. Комбинированная терапия с UCNP-R-T была продемонстрирована in vivo.

При таргетной терапии используются молекулы с высоким сродством в качестве переносчиков терапевтических агентов, таких как радиоактивные изотопы или токсины, к опухолевым клеткам (1–4). Препараты таргетной терапии часто вводятся внутривенно, в конечном итоге они направляются к молекулам-мишеням на поверхности опухолевых клеток (5, 6).В этом случае молекулы радиоактивного изотопа или токсина, присоединенные к молекулам высокоаффинного носителя, напрямую влияют на опухолевые клетки (7). Возникающий подход нового поколения в биомедицине, называемый тераностикой, основан на обнаружении комплекса, состоящего из молекулы-носителя и токсического агента. Концепция тераностики реализуется за счет использования лекарств с двойной терапевтической и диагностической функциональностью (8⇓ – 10).

Несмотря на значительные побочные эффекты, традиционная химио- и лучевая терапия остаются наиболее широко используемыми терапевтическими методами лечения рака из-за их высокой эффективности (11).Известно, что использование двух токсичных лекарств приводит к супераддитивному эффекту, при этом общий эффект лекарств ( R _ab ) превышает арифметическую сумму составляющих токсических эффектов ( R _a , R _b ), так что R _ab > R _a + R _b . Сообщается, что комбинированная лучевая терапия и химиотерапия обеспечивает улучшенный результат лечения рака из-за сверхаддитивных эффектов (12, 13), хотя существующие протоколы страдают несоответствиями фармакокинетики лекарств и, следовательно, являются субоптимальными.Было установлено, что наилучший результат достигается, когда оба токсичных агента проникают в раковые клетки-мишени одновременно (14, 15).

В этой статье мы сообщаем о реализации этого полезного комбинированного терапевтического подхода, который был улучшен для уменьшения побочных эффектов. С этой целью мы представляем гибридный биофункциональный нанокомплекс, ядро ​​которого представляет собой наночастицу с повышающим преобразованием (UCNP). Благодаря уникальным фотофизическим свойствам УХНЧ широко используются в качестве платформы для сборки тераностических комплексов.Преобразование ближнего инфракрасного света (NIR), глубоко проникающего в биологические ткани, в видимый, УФ и NIR свет с более высокой энергией фотонов является одним из наиболее полезных свойств UCNP. Возбуждение в ближнем ИК-диапазоне на длине волны 980 нм вызывает очень слабую автофлуоресценцию в клетках и биологической ткани, в то время как возбуждающий свет может быть эффективно спектрально отфильтрован из-за большого спектрального сдвига. Эмиссия УХНЧ фотостабильна и немигает (16, 17).

Два токсичных агента — радиоактивный бета-излучающий изотоп ⁹⁰ Y, используемый для направленной радионуклидной терапии (11), и высокоэффективный фрагмент экзотоксина А из Pseudomonas aeruginosa (PE40) (18) –– связаны с UCNP являются ядром и токсичны для раковых клеток.Бета-излучатель ⁹⁰ Y, заключенный в сердечник УХНЧ, отличается коротким периодом полураспада (63 ч) и высокой линейной плотностью передачи энергии излучения, что позволяет локализовать радиационное воздействие в пределах нескольких миллиметров, что приводит к снижению неблагоприятных побочных эффектов. (19, 20). Этот тераностический комплекс, названный UCNP-R-T, содержит нацеливающую биомолекулу, которая принадлежит к классу сконструированных белков с анкириновыми повторами (DARPin) и специфична для клеток, сверхэкспрессирующих рецепторы HER2 (21, 22). DARPin наделяет UCNP-R-T свойствами таргетинга.Трансмембранный белок HER2 — один из наиболее хорошо изученных онкомаркеров; его сверхэкспрессия является признаком многих типов опухолей, связанных с повышенным риском метастазирования и резистентностью к химиотерапии (23).

В этой статье сообщается о супераддитивном (высокоэффективном синергетическом эффекте) токсическом эффекте введенного гибридного биофункционального нанокомплекса UCNP-R-T на раковые клетки. Было продемонстрировано, что UCNP-R-Ts ингибирует HER2-положительный рост опухоли in vivo. Этот синергетический нанокомплекс перспективен для применения в диагностике и терапии опухолей.

Результаты

Получение многофункционального нанокомплекса UCNP-R-T.

УХНЧ конфигурации ядро ​​/ оболочка NaYF ₄ : Yb, Tm / NaYF ₄ были получены двухстадийным синтезом. Для визуализации кристаллической матрицы NaYF ₄ было выполнено легирование иттербием, Yb ³⁺ (молярное соотношение 20%) и тулием, Tm ³⁺ (молярное соотношение 0,6%). Ионы Yb ³⁺ действуют как сенсибилизаторы, преобразовывая поглощенную энергию возбуждения при 980 нм в ионы активатора Tm ³⁺ .Оба возбужденных соседних иона Yb ³⁺ и Tm ³⁺ объединяются, чтобы перевести Tm ³⁺ в более высокое возбужденное состояние посредством многоступенчатого процесса преобразования энергии с повышением частоты, из которого он испускает фотоны фотолюминесценции с более высокой энергией. В результате двухэтапного процесса повышающего преобразования UCNP, легированный Tm, излучает фотолюминесценцию в спектральной полосе с центром 801 нм (трехэтапный процесс приводит к эмиссии 474 нм) при возбуждении NIR. Эта фотолюминесценция попадает в окно прозрачности биологической ткани (700–1300 нм) и обеспечивает большую глубину оптического изображения для визуализации всего тела лабораторных животных in vivo (рис.1).

Рис. 1.

Сборка и принцип действия гибридного биофункционального нанокомплекса UCNP-R-T. R, радиоактивный; Т, токсичный; модуль нацеливания, нацеленный на токсин DARPin-PE40. Подробнее см. Производство многофункционального нанокомплекса UCNP-R-T . (Увеличение: 2 ×.)

Поверхностно-модифицированные UCNP (-R) были соединены с рекомбинантным белком DARPin-PE40, называемым таргетным токсином, с использованием хорошо известного (3-диметиламинопропил) — N ‘-этилкарбодиимида гидрохлорида / N Протокол биоконъюгации -гидроксисульфосукцинимидной натриевой соли (EDC / NHS).DARPin-PE40 представляет собой два рекомбинантных белка DARPin и PE40, слитых вместе через петлеобразный гидрофильный линкер, обеспечивающий между ними расстояние в несколько нанометров, достаточное для их независимого функционирования (24). Модуль нацеливания DARPin принадлежит к классу сконструированных белков с анкириновыми повторами, которые представляют собой неиммуноглобулиновые каркасы с высоким сродством ( K _d = 3,8 нМ). Токсический модуль представляет собой фрагмент экзотоксина А из P. aeruginosa , широко используемого в биомедицинских исследованиях.Экзотоксин А — высокотоксичная молекула, способная блокировать синтез белка в клетках за счет рибозилирования АДФ фактора элонгации трансляции 2 (25).

Белок DARPin-PE40 способен к специфическому взаимодействию с рецептором-онкомаркером HER2 с аффинностью, характеризующейся константой диссоциации K _d = 10,8 нМ. Благодаря своему фрагменту PE40 он обладает специфической токсичностью по отношению к HER2-положительным опухолевым клеткам и может значительно подавлять рост HER2-положительных опухолей (26).

В результате был разработан и произведен гибридный биофункциональный нанокомплекс (UCNP-R-T). UCNP-R-T содержал оптически определяемое ядро ​​UCNP, покрытое амфифильным полимерным малеиновым ангидридом и 1-октадеценом (PMAO), с целевым токсином DARPin-PE40, ковалентно связанным с его поверхностью. Фрагмент UCNP-R-T DARPin-PE40 выполняет две функции: направленную и терапевтическую. Ожидается, что его токсичный модуль PE40 будет дополнять терапевтический эффект бета-излучателя ⁹⁰ Y.

Свойства UCNP-R-T.

Удельная радиоактивность синтезированного UCNP-R составила 4 МБк / мг. Основное оптическое фотолюминесцентное свойство УХНЧ характеризовалось эффективностью преобразования ( η _uc ), определяемой как отношение излучаемой мощности к поглощенной (27). η _uc , как было измерено, составила 2% как для UCNP-R, так и для UCNP, оцененных при интенсивности возбуждения 70 Вт / см ² на длине волны 980 нм. Как видно на рис.2 A , амфифильные водные коллоиды UCNP-R характеризовались средним гидродинамическим диаметром ~ 50 нм и содержали фракцию большего диаметра с центром ~ 250 нм. Как было оценено с учетом распределения частиц по размерам, отношение дискретных наночастиц к агрегатам составило 25000 (28). В то же время, как показывает распределение частиц по размерам по номерам (рис. 2 A ), основная часть УХНЧ была дискретными частицами.

Рис. 2.

Характеристики гибридного биофункционального нанокомплекса UCNP-R-T.( A ) Распределение размера частиц по количеству наночастиц с повышающим преобразованием с (UCNP-R-T) и без целевого токсина (UCNP-R), определенное методом динамического светорассеяния. ( Вставка ) Распределение размеров частиц по объему, показывающее присутствие фракции UCNP-R / UCNP-R-T большого размера. ( B ) Спектр фотолюминесценции UCNP-R-T при возбуждении на длине волны 980 нм. ( C ) ТЕМ изображение УЦНП-Р. (Масштаб: 50 нм.) ( D ) ТЕМ изображение UCNP-R-T.(Масштаб: 50 нм.)

Присоединение целевого токсина к амфифильным UCNP увеличивало средний гидродинамический диаметр до ~ 90 и ~ 380 нм для дискретных частиц и агрегатов, соответственно. Средние диаметры UCNP-R и UCNP-RT, рассчитанные на основе данных просвечивающей электронной микроскопии, составили 35 и 75 нм соответственно (рис.2 C и D ) и были меньше, чем средние гидродинамические диаметры, определенные с помощью динамического света. рассеяние. Это было вызвано образованием в водном растворе слоя Штерна.

Фиг. 2 B показывает спектр фотолюминесценции UCNP-R-T при возбуждении на 980 нм. Наиболее выраженные пики фотолюминесценции UCNP-R-T при 475 нм (видимый) и 800 нм (NIR) характерны для легированных тулием наночастиц с повышенным преобразованием, подтверждая их стабильную суспензию в коллоидных образцах. Целевое содержание токсина в UCNP-R-T было оценено как 2% (51 мкг на 1 мг UCNP-R-T, или ~ 50 молекул целевого токсина на одну частицу UCNP-R-T), как определено методом Брэдфорда.

Влияние UCNP-R-T на рак и культуры иммортализованных клеток.

Для изучения специфичности связывания UCNP-RT с рецептором HER2 на поверхности клетки использовали культуру клеток аденокарциномы молочной железы человека SK-BR-3, сверхэкспрессирующих рецепторы HER2 на своей поверхности (HER2 +) ( SI Приложение , рис. S1). Клетки яичника китайского хомячка (СНО), лишенные рецепторов HER2, использовали в качестве отрицательного контроля (HER2-). Чтобы предотвратить поглощение наночастиц посредством рецептор-опосредованного эндоцитоза, клетки инкубировали с UCNP-R-Ts и UCNP-Rs при 4 ° C в течение 1 часа.После промывки и фиксации связывание UCNP-R-Ts и UCNP-R с поверхностью клетки детектировали с помощью флуоресцентной конфокальной микроскопии с лазерным сканированием (флуоресцентная LSCM). Полученные изображения представлены на рис. 3 B , где наблюдалась иммобилизация UCNP-R-Ts и UCNP-R на поверхностной мембране клеток HER2 + SK-BR-3, в отличие от клеток HER2- CHO, в которых наблюдалась значительная меньше наночастиц.

Рис. 3.

Взаимодействие UCNP-R-T с эукариотическими клетками. HER2 + обозначает клетки SK-BR-3, экспрессирующие рецепторы HER2.HER2- обозначает клетки СНО, лишенные рецепторов HER2. ( A ) Жизнеспособность клеток HER2 + и HER2- в зависимости от концентрации UCNP-R и UCNP. ( B ) Наложение светлопольных и флуоресцентных изображений LSCM, показывающих специфическое связывание UCNP-R-T с поверхностью клеток HER2 + в отличие от слабого мечения клеток HER2- после 1-часовой инкубации с нанокомплексами при 4 ° C. Флуоресцентные изображения LSCM получали с использованием возбуждения / испускания при 980 нм / 769-849 нм. (Шкала: 20 мкм.) ( C ) Жизнеспособность клеток HER2 + и HER2- в зависимости от концентрации UCNP-R-T и UCNP-T.( D ) Влияние UCNP-R-T и UCNP-T на морфологию клеток. Изображения были получены после 96-часовой инкубации с UCNP-R-T / UCNP-T в концентрации 25 мкг / мл. Поглощенная доза (в случае UCNP-R-T) составляла 3,44 Гр на лунку планшета. Стрелки указывают отсоединенные и измененные клетки. Звездочки указывают на мертвые клетки. (Масштаб: 100 мкм.)

Исследования токсичности UCNP-R-T и его компонентов были выполнены с использованием тех же клеточных линий SK-BR-3 и CHO. Концентрации суспензий UCNP-R, использованные для 96-часовой инкубации, соответствовали диапазону доз облучения от 20 мГр до 68.8 Гр. Также был проведен анализ цитотоксичности нерадиоактивных UCNP, чтобы подтвердить, что цитотоксический эффект UCNP-R был обусловлен изотопом ⁹⁰ Y.

Было обнаружено, что

UCNP-R, в отличие от UCNP, вызывают выраженную цитотоксичность (рис. 3 A ). Значения IC ₅₀ для UCNP и UCNP-R, лишенных целевого токсина для обеих клеточных линий, представлены в таблице 1. Поглощенная доза определенных концентраций UCNP-R составляла ~ 20 Гр. Клетки SK-BR-3 и CHO проявляли сравнимую радиочувствительность.

Таблица 1.

Влияние нанокомплексов различного состава на выживаемость клеток HER2 + SK-BR-3 и клеток HER2- CHO

Концентрации коллоидов UCNP-RT соответствовали поглощенным клетками дозам в диапазоне от 1 мГр до 13,6 Гр, тогда как концентрация DARPin-PE40 соответствовала диапазону от 83 до 8,3 × 10 ⁶ пМ. Анализ цитотоксичности нерадиоактивных нанокомплексов UCNP-T, несущих целевые токсины, подтвердил синергетическое повышение цитотоксичности UCNP-R-T за счет комбинированного действия целевого токсина DARPin-PE40 и радиоактивного изотопа ⁹⁰ Y (рис.3 С ). Значения IC ₅₀ комплексов UCNP-RT и UCNP-T представлены в таблице 1. Связывание целевого токсина DARPin-PE40 с UCNP-R привело к 39- и ∼10 ⁵ -кратному увеличению токсичности. действие против клеток HER2- и HER2 + соответственно, что указывает на высокую специфичность комбинированного токсического действия к UCNP-RT.

Таким образом, токсичность UCNP-R-T, содержащего как бета-излучатели, так и целевые токсины, была значительно выше, чем суммарная токсичность наночастиц, содержащих только бета-излучатели (UCNP-R) или только целевые токсины (UCNP-T).UCNP-R-Ts существенно снижает жизнеспособность клеток HER2 + (IC ₅₀ = 0,0024 мкг / мл по сравнению с 4,2 мкг / мл для клеток HER2-) (Таблица 1). Визуализация тестируемых клеток в светлом поле выявила глубокие морфологические изменения клеток HER2-, включая отрыв клеток от субстрата и изменения линейных размеров, в то время как клетки HER2 + демонстрировали выраженную гибель всего монослоя (рис. 3 D ).

Для оценки типа взаимодействия компонентов UCNP-RT был рассчитан индекс комбинации ( CI ) с использованием данных токсичности компонентов UCNP-RT в случаях раздельного и комбинированного (в составе UCNP-RT). RT) администрация.Расчетное значение CI , равное 4,8 × 10 ^-4 , находилось в области низких значений ( CI << 1), что указывает на сильный синергизм токсичных модулей в UCNP-R-T. Можно сделать вывод, что комбинация двух агентов в одном гибридном биофункциональном нанокомплексе позволила ему синергетически повысить его терапевтическую эффективность (супераддитивный эффект) в модели культуры клеток; в частности, токсин-мишень DARPin-PE40 наделил UCNP-R-T замечательной специфической цитотоксичностью по отношению к клеткам-мишеням HER2 +.

Терапевтические эффекты UCNP-R-T.

Противораковая эффективность UCNP-R-T была исследована на иммунодефицитных мышах BALB / c nude, несущих HER2-положительные опухоли ксенотрансплантата человека. Исследуемые нанокомплексы на основе коллоидных УХНЧ вводили внутриопухолево в дозах 10 и 15 мкг / г. Такой путь введения был выбран для снижения системного токсического действия на организм животных, усиления местного терапевтического эффекта и увеличения времени удерживания тестируемых гибридных биофункциональных нанокомплексов в опухоли.Мы отмечаем, что, хотя внутрисосудистая инъекция представляет собой более реалистичное моделирование клинического применения UCNP-R-T в системной онкотерапии, необходимо решить ключевую проблему отложения UCNP-R-T в критических органах (печень, селезенка и т. Д.).

Было продемонстрировано, что применение UCNP-R-T в дозах 10 и 15 мкг / г приводило к статистически значимому уменьшению объема опухолевого узла по сравнению с контрольной группой (рис. 4). Было показано, что UCNP-RT оказывает наивысший противоопухолевый эффект при дозе 15 мкг / г, при этом скорость роста опухоли снижается наиболее заметно, как было измерено с помощью фактора ингибирования роста опухоли ( TGI ), представленного в приложении SI , рис. .С2 А . TGI > 40% был достигнут при однократном внутриопухолевом введении UCNP-RT в дозе 15 мкг / г на протяжении всего эксперимента с ингибированием> 50% на 5-й и 7-й дни. Рост опухоли подавлялся на 40%. до 7-го дня после введения UCNP-RT в дозе 10 мкг / г с последующим ингибированием не более 30%. (См. Приложение SI для дополнительных данных и анализа противоопухолевой эффективности UCNP-R-T in vivo.)

Рис. 4.

Терапевтический эффект UCNP-R-T.Динамика объема опухоли у мышей при лечении UCNP-R-T в дозах 10 и 15 мкг / г. Объем опухолевого узла нормализуется до объема, измеренного в день 0 (день введения UCNP-R-T). Данные представлены как среднее ± стандартная ошибка среднего. * обозначает статистически значимое отличие от контроля ( P <0,05), согласно тесту t с поправкой Бонферрони, n = 5–10.

Мы количественно определили полупериод удержания UCNP-RT в опухоли и лучевую нагрузку на опухолевые клетки, выполнив анализ данных о росте опухоли и распределения UCNP в опухолях с использованием самодельной системы визуализации всего животного, при этом представлены основные результаты на рис.5 А . Поскольку интенсивность фотолюминесценции UCNP не зависит от радиоактивного присутствия ⁹⁰ Y, ее эволюция во времени отражала фармакокинетику UCNP-R-T в опухолевом узле. На основании анализа данных фотолюминесцентной визуализации время полужизни UCNP-R-T в опухолевом узле было рассчитано как 150 часов (∼6 дней) (фиг. 5 B ).

Рис. 5.

Удержание и активность UCNP-R-T в ксенотрансплантатах аденокарциномы молочной железы человека SK-BR-3 на бестимусных мышах. ( A ) Удержание UCNP-R-Ts в опухоли.Покадровая серия наложений светлопольных и эпилюминесцентных изображений мыши с опухолью, полученных с помощью самодельной системы визуализации всего животного. Возбуждение / излучение в режиме эпилюминесценции, 980 нм / 485–831 нм. Изображения получали через определенные интервалы времени после внутриопухолевой инъекции UCNP-R-T в дозе 10 мкг / г. (Увеличение: 2 ×.) ( B ) Динамика снижения радиоактивности в опухоли после внутриопухолевой инъекции UCNP-R-T в дозе 10 мкг / г.Начальная радиоактивность составила 0,8 МБк. Верхняя (оранжевые прямоугольники), средняя (зеленые кружки) и нижняя (синие треугольники) кривые показывают снижение радиоактивности UCNP-RT в опухоли из-за распада ⁹⁰ Y, клиренс UCNP-RT из опухоли, рассчитанный на основе фотолюминесценции UCNP. и комбинированные эффекты ⁹⁰ Y-распада плюс клиренс UCNP-RT. ( C ) Изменение во времени удельной радиоактивности UCNP-R-T после внутриопухолевой инъекции в дозах 10 мкг / г (0,8 МБк) и 15 мкг / г (1.2 МБк).

Чтобы определить очевидный уровень радиоактивности UCNP-R-T в опухоли в зависимости от времени, необходимо было учитывать как радиоактивный распад ⁹⁰ Y, так и выведение UCNP-R-T из опухоли. Время двукратного снижения содержания ⁹⁰ Y в опухоли Δ t определяли по следующему уравнению: 1 / Δt = 1 / T + 1 / τ, [1] где T — период полураспада. из ⁹⁰ Y, а τ — время полувыведения нанокомплекса из опухоли. ⁹⁰ Период полураспада изотопа Y составляет 64 часа.Δ t была рассчитана как 45 часов (∼2 суток) (рис. 5 B ). Результаты были скорректированы на 30% клиренс из опухоли введенного UCNP-R-T в течение первых 3 часов после инъекции.

Удельную радиоактивность в опухоли после внутриопухолевого введения UCNP-RT с начальной радиоактивностью 0,8 МБк (10 мкг / г) и 1,2 МБк (15 мкг / г) рассчитывали с использованием снижения радиоактивности в опухолевом узле (рис. 5 C ) и его объем от времени. Терапевтическая нагрузка определялась как количество событий распада, которые произошли в опухоли за время воздействия Δ N ( t ‘) при фиксированной средней энергии распада 1 МБк.Он был рассчитан путем интегрирования экспериментально измеренной радиоактивности нанопрепарата UCNP-RT в опухоли во времени: ΔN (t ′) = ∫0t′A0e − ln⁡2 (t / Δt) dt = A0Δtln⁡2 (1 − e −ln⁡2 (t ′ / Δt)), [2] где A ₀ — начальная радиоактивность UCNP-RT и Δ t — время двукратного снижения содержания UCNP-RT в опухоль.

Доза облучения опухоли рассчитывалась как выделение энергии при радиоактивном распаде ⁹⁰ изотопов Y, деленное на объем опухолевого узла.Поскольку быстрая пролиферация раковых клеток была основным фактором наблюдаемой высокой скорости роста опухолевого узла, мощность дозы облучения представляла наиболее полезный параметр для оценки терапевтической эффективности UCNP-R-T. Было обнаружено, что мощность дозы облучения упала до 200 кБк / г на 5-й день после введения 10 мкг / г UCNP-RT, что ниже терапевтически значимых значений (29), и полностью уменьшилась к 10-му дню. g UCNP-RT приводил к уменьшению скорости облучения в ~ 1,2 раза, что подразумевает более длительный противораковый терапевтический эффект.

В совокупности, исследование in vivo действия UCNP-R-T на ксенотрансплантаты HER2 + аденокарциномы молочной железы человека выявило статистически значимый противораковый эффект при внутриопухолевом введении в дозе ~ 15 мкг / г.

Обсуждение

В настоящее время наблюдается тенденция к повышению эффективности противоопухолевой терапии за счет разработки новых подходов персонализированной медицины, основанных на диагностике молекулярных профилей злокачественных опухолей. Это позволяет значительно улучшить результаты лечения за счет применения препаратов, избирательно воздействующих на раковые клетки-мишени.Однако большинство препаратов, разработанных и применяемых для таргетной терапии, в том числе на основе неорганических наночастиц, демонстрируют относительно низкую эффективность нацеливания и значительную системную токсичность, что препятствует достижению оптимальных терапевтических результатов (30, 31). Один из подходов к решению этих проблем основан на повышении эффективности таргетирования лекарств нового поколения (32–34). Гибридный биофункциональный противораковый нанокомплекс (ядро наночастиц с повышающим преобразованием со встроенным бета-излучателем ⁹⁰ Y, покрытое амфифильным полимером и связанное с целевым токсином DARPin-PE40, называемое UCNP-RT), разработанный, произведенный и испытанный в этой работе, классифицируется как целевой тераностический анализ. средство, которое позволяет как диагностировать, так и лечить злокачественные новообразования.В частности, разработанное нанопрепарат предназначено для онкотерапии HER2-положительных злокачественных опухолей.

Способность UCNP-R-T избирательно связываться с клетками-мишенями наряду с его уникальными фотолюминесцентными свойствами определяет его диагностическую полезность (рис. 5 A ). Фотолюминесценция, вызванная UCNP, в видимой и ближней инфракрасной областях спектра позволяет получать изображения на глубину до 1 см, что дает возможность контролировать фармакокинетику UCNP-R-T в ксенотрансплантатах животных моделей и, возможно, в опухолевых очагах миллиметрового размера.Подавляющее большинство отчетов, включая наши собственные исследования, подтверждают мнение о том, что комплексы UCNP не оказывают ни цитотоксического действия, ни токсического действия на органы лабораторных животных, или, в редких случаях, слабого токсического действия (35–38). Имеющиеся данные свидетельствуют о том, что UCNP-PMAO безопасно использовать в качестве универсальной платформы для приложений тераностики.

Терапевтический потенциал разработанного гибридного биофункционального противоракового нанокомплекса UCNP-R-T определяется двумя его эффективными компонентами: рекомбинантным таргетным токсином DARPin-PE40 и бета-эмиттером ⁹⁰ Y.Ранее была установлена ​​высокая цитотоксичность целевого токсина DARPin-PE40 в отношении HER2-положительных клеток и относительная устойчивость HER2-отрицательных клеток к его действию (22). Радионуклид ⁹⁰ Y — хорошо известное сильнодействующее терапевтическое средство. Предлагаемая технология синтеза UCNP-R-T позволяет модулировать активность нанокомплекса в широком диапазоне, изменяя долю стабильного высокоразвитого изотопа иттрия в составе UCNP путем частичного замещения радиоактивным изотопом ⁹⁰ Y.Это дает возможность модулировать цитотоксический эффект UCNP-R-T, опосредованный бета-излучением, для достижения оптимального терапевтического результата с минимальными побочными эффектами на нормальные органы и ткани. В отличие от радиоактивно стабильного UCNP, UNCP-R оказывает выраженный цитотоксический эффект в культурах клеток в диапазоне концентраций 10 ^-6 -10 ³ мкг / мл (рис. 3). Стоит отметить, что ⁹⁰ Y внедрен в ядро ​​УХНЧ, поэтому продукты его распада с неизвестной биологической опасностью удерживаются в нанокристаллической матрице, обеспечиваемой прочными кристаллическими связями.Это снижает токсикологический стресс, вызываемый продуктами распада на тканях вокруг опухоли, и уменьшает побочные эффекты.

Существующие препараты для таргетной терапии часто содержат один токсичный модуль, который может быть токсином или радиоактивным изотопом, в то время как препараты с двумя токсичными модулями встречаются гораздо реже (39, 40) и только появляются, чтобы представить концепцию комбинированной онкотерапии. Особый интерес представляет применение препаратов с двумя токсическими модулями, поскольку оба токсичных агента попадают в раковые клетки одновременно.Их фармакокинетика взаимно согласована, и в некоторых случаях они могут демонстрировать сильный синергизм в комбинированном токсическом эффекте (14). Разработанный UCNP-R-T несет два токсичных модуля — бета-излучатель ⁹⁰ Y и целевой токсин DARPin-PE40, которые оказывают токсическое действие на опухолевые клетки по разным механизмам. Мы обнаружили, что UCNP-R-T имел значительно больший токсический эффект по сравнению с просто радиоактивным UCNP (UCNP-R), который обеспечивал равную дозу ионизирующего излучения. Сильный синергизм токсического действия ( CI << 1) наблюдался при использовании двух токсичных модулей, т.е.е. общий эффект двух токсичных веществ был более чем на порядок больше, чем сумма отдельных токсических эффектов.

Мы предполагаем, что целевой токсин блокирует синтез белка в клетках, что в конечном итоге приводит к их апоптозу (22), в то время как бета-излучатель ⁹⁰ Y вызывает образование свободных радикалов и активных форм кислорода в клетках, а также прямой повреждение макромолекул (41). Значительное увеличение токсичности UCNP-R-T по сравнению с его отдельными модулями было связано с нарушением синтеза белка, участвующего в антиоксидантной защите и восстановлении повреждений, опосредованных ионизирующим излучением.Точный механизм наблюдаемой сильной синергии требует дальнейших исследований.

Опухоли обычно характеризуются клеточной гетерогенностью (42, 43). Онкотерапия, основанная на применении монопрепаратов, имеет низкую терапевтическую эффективность, помимо развития множественной лекарственной устойчивости (44). Нанокомплекс UCNP-R-T, содержащий два токсичных модуля с различными терапевтическими действиями, считается более эффективным при лечении гетерогенных опухолей со сниженной лекарственной устойчивостью.

UCNP-R-T подавлял рост опухолей ксенотрансплантата при внутриопухолевом введении. По-видимому, этот эффект был обусловлен местным действием обоих терапевтических агентов и их долгосрочным удержанием в опухоли, усиленным модулем нацеливающего белка DARPin, а также большей дозой ионизирующего излучения, поглощаемой тканью опухоли. Поглощенная доза ионизирующего излучения (на единицу объема опухоли с учетом ее роста) достигла максимального значения на 5-й день после введения UCNP-RT, что согласуется с самой высокой скоростью TGI , наблюдаемой в тот же момент времени. .Полученные результаты показывают перспективность эффективной комбинированной онкотерапии, ведущей к перспективному внедрению в клиническую практику.

Методы

Синтез UCNP-R и UCNP.

УХНП-Р и наноструктуры ядро ​​/ оболочка УХНЧ состава NaY _0,78 Yb _0,2 Tm _0,02 F ₄ / NaYF ₄ были синтезированы, как описано ранее (45), с модификациями. Раствор ⁹⁰ YCl ₃ (SSC RF-IPPE) с удельной активностью 290 МБк / мг нейтрализовали до pH 9.0, и осадок [ ⁸⁹ Y (OH) ₃ / ⁹⁰ Y (OH) ₃ ] промывали деионизированной водой. К осадку добавляли раствор перекиси водорода и смесь инкубировали в течение 2 ч при 700 ° C до образования ⁹⁰ Y ₂ O ₃ . Смесь ⁸⁹ Y ₂ O ₃ / ⁹⁰ Y ₂ O ₃ (0,78 мМ) (или ⁸⁹ Y ₂ O ₃ для UCNP), Yb ₂ О ₃ (0.2 мМ) и Tm ₂ O ₃ (0,02 мМ) (Sigma-Aldrich) легировали, очищали и покрывали. Полученные ядро ​​/ оболочка UCNP-R и UCNP были осаждены.

Производство белка DARPin-PE40 и сборка UCNP-R-T.

Рекомбинантный целевой токсин DARPin-PE40 получали, как описано ранее (22). Этот белок был экспрессирован в клетках Escherichia coli BL21 (DE3), трансформированных плазмидой pDARP-PE40 и очищенных с помощью сродства к хелатам металлов и ионообменной хроматографии.Поверхность UCNP-R / UCNP функционализировали путем покрытия чередующимся сополимером PMAO (Sigma-Aldrich) (46). DARPin-PE40 был ковалентно присоединен к UCNP-R / UCNP с использованием связывающих агентов EDC и Sulfo-NHS (подробности см. В приложении SI ).

Характеристика UCNP-R-T.

Концентрация UCNP-R-T была оценена на основе измерения радиоактивности. Средний гидродинамический диаметр и дзета-потенциал частиц UCNP-R-T / UCNP-R определяли с использованием системы Zetasizer Nano ZS.Спектры фотолюминесценции UCNP-R-T при возбуждении на длине волны 980 нм были получены с использованием спектрофлуориметра CM2203 (SOLAR). Изучение других свойств UCNP-R-T описано в Приложении SI .

Специфичность связывания UCNP-R-T с поверхностью клетки и анализ цитотоксичности in vitro.

Специфичность связывания UCNP-RT с клеточной поверхностью и цитотоксичность UCNP-RT / UCNP-T / UCNP-R / UCNP были изучены на аденокарциноме груди человека (SK-BR-3) и клеточных линиях CHO (см. SI Приложение для деталей).

CI компонентов UCNP-RT был рассчитан методом медианного эффекта (47): CI = D1 / DX1 + D2 / DX2, [3]

, где DX ₁ и DX ₂ — это IC ₅₀ индивидуальных токсичных модулей UCNP-RT; D ₁ и D ₂ представляют собой IC ₅₀ токсичных модулей при совместном введении в составе UCNP-R-T.

Изменения морфологии клеток после инкубации с UCNP-R-T / UCNP-T изучали с помощью микроскопии в проходящем свете с использованием микроскопа Axiovert 200 (Carl Zeiss).

Исследование на животных.

Все экспериментальные методики одобрены Комитетом по биоэтике Нижегородского государственного университета. Эксперименты проводились в строгом соответствии с Законом 708n (23.08.2010) с Национальным Министерством здравоохранения Российской Федерации об утверждении правил лабораторной практики по уходу и использованию лабораторных животных и Директивой Совета 2010 / 63EU Европейского парламента (22 Сентябрь 2010 г.) о защите животных, используемых в научных целях.

Терапевтические эффекты UCNP-R-T изучали на бестимусных мышах BALB / c, несущих ксенотрансплантаты SK-BR-3 (трансплантация опухоли и дозы инъекций описаны в приложении SI ). После инъекции UCNP-R-T объем опухолей и вес животных измеряли каждые 48 часов. Объем опухолевого узла ( V ) был рассчитан как V = длина × ширина ² /2 (48). TGI был рассчитан с использованием уравнения TGI = (Vcontrol-Vtreatment) / Vcontrol × 100%, [4]

, где V — средний объем опухолевого узла в соответствующей группе.

Время удержания UCNP-RT в опухоли определяли с помощью визуализации экспериментальных опухолей с использованием самодельной системы для всего животного (49), которая позволяла детектировать фотолюминесцентный сигнал на длине волны 800 нм при возбуждение на 980 нм. Изображения были получены с помощью камеры электронного умножителя с зарядовой связью (EMCCD) с 2-кратным увеличением. Анализ изображений выполнялся с использованием программного обеспечения ImageJ 1.47v. Сигнал в опухоли определяли как разницу между средней интенсивностью флуоресценции в области опухоли и средней интенсивностью фотолюминесценции нормальных тканей.

Благодарности

Работа поддержана Министерством образования и науки Российской Федерации (проект 14.Z50.31.0022).

Сноски

• Вклад авторов: E.