by : alexxlab Разное

Шевелева елена: Not Found (#404) — Корпоративный сайт ТПУ

Шевелева Елена Валентиновна кандидат экономических наук, доцент — Кафедра бухгалтерского учета, анализа и аудита

Доцент кафедры, кандидат экономических наук,советник налоговой службы III ранга.
Имеет сертификат-свидетельство ACCA о прохождении обучения по курсу «Учет в условиях рынка», сертификат КонсультантПлюс о прохождении курса обучения «КонсультантПлюс/Технология 3000».
Имеет практический опыт работы в экономических службах промышленных предприятий г. Челябинска, в налоговых органах.
Шевелева Е.В. награждена Почетной грамотой Федерального агентства Министерства образования и науки Российской Федерации, Почетными грамотами Южно-Уральского государственного университета.
ПЕДАГОГИЧЕСКАЯ ДЕЯТЕЛЬНОСТЬ
Общий стаж педагогической работы в высших учебных заведениях составляет более 20 лет. На кафедре бухгалтерского учета и финансов работает с 1996 года, где читала лекции и вела практические занятия по дисциплинам: «Бухгалтерский финансовый учет», «Бухгалтерский учет расчетов», «Налоги и налогообложение», «Теория и история налогообложения», «Риски в бухгалтерском учете», «Бухгалтерское дело», «Анализ и оптимизация налогооблагаемых баз», «Организация и методика налоговых проверок» «Налоговое администрирование», «Налоговые системы зарубежных стран», «Федеральные налоги и сборы с организаций», «Региональные и местные налоги и сборы с организаций», «Налоговое планирование», «Семинар по актуальным проблемам учета, контроля и управления организацией», «Учетная политика организации», «Налоговый учет и отчетность», «Резервы в бухгалтерском учете», «Внутренний аудит и контроль организации» для бакалавров и магистров по направлению подготовки «Экономика».
Имеет большой опыт работы по программам подготовки и аттестации профессиональных бухгалтеров и аудиторов по разделам бухгалтерский учет и налогообложение.
НАУЧНАЯ ДЕЯТЕЛЬНОСТЬ
Защитила кандидатскую диссертацию по специальности 08.00.12 «Бухгалтерский учет, контроль и анализ хозяйственной деятельности» на тему «Налоговый риск в бухгалтерском учете предприятия».
Руководит научно-исследовательской работой студентов в рамках своей научной тематики, а также научно-исследовательской работой по программе подготовки магистров 38.04.01 «Бухгалтерский учет, внутренний контроль и налогообложение».
Список публикаций (перейти к списку)

ФГБОУ ВО БГТУ — Руководство. Педагогический состав

Должность: Доцент

Ученая степень: к.т.н.

Ученое звание: доцент

факультет: Механико-технологический факультет

кафедра: Триботехническое материаловедение и технологии материалов

Уровень образования: высшее образование — специалитет+магистратура

Наименование направления подготовки и (или) специальности: 1. Лесное и лесопарковое хозяйство; 2. Технологические машины и оборудование

Квалификация: 1. Инженер; 2. Инженер

Телефон: (4832) 58-82-23

Повышение квалификации и (или) профессиональная переподготовка
2018 год Повышение квалификации по программе «Проектировщик электронного курса»
2018 год Повышение квалификации по программе «Электронная образовательная среда вуза»
2018 год Повышение квалификации по дополнительной профессиональной программе «Современные проблемы и направления развития установок с двигателями внутреннего сгорания»
2018 год Повышение квалификации по программе «Навыки оказания первой помощи педагогическими работниками»
2018 год Повышение квалификации по дополнительной профессиональной программе «Применение современных информационно-коммуникационных технологий в научно-образовательной деятельности в вузе»
2018 год Профессиональная переподготовка по образовательной программе «Технологические машины и оборудование в лесном комплексе»
2018 год Повышение квалификации по дополнительной профессиональной программе «Современные проблемы и направления развития конструкций, технического сервиса и ремонта транспортно-технологических машин»
2019 год Повышение квалификации по программе дополнительного профессионального образования «Комплексная безопасность жизнедеятельности»
2021 год Повышение квалификации по дополнительной профессиональной программе «Комплексное обеспечение надежности и экологичности наземных транспортных систем в Арктической зоне Российской Федерации»
2021 год Повышение квалификации по дополнительной профессиональной программе «Инновационные и цифровые технологии в образовании»

Общий стаж работы: 19

Стаж работы по специальности: 20

Дата подписания договора: 15. 02.2021

Дата окончания договора: 31.07.2021

Шевелева Елена Васильевна — пользователь, сотрудник

Шевелева Елена Васильевна — пользователь, сотрудник | ИСТИНА – Интеллектуальная Система Тематического Исследования НАукометрических данных

Шевелева Елена Васильевна пользователь

1 НИР
IstinaResearcherID (IRID): 266054212

Деятельность

  • НИРы
      • 1 января 2012 — 31 декабря 2024 Развитие новых образовательных технологий и их внедрение в практикумы НИИЯФ
      • Научно-исследовательский институт ядерной физики имени Д. В. Скобельцына
      • Руководители: Радченко В.В., Тетерева Т.В. Участники НИР: Авдеев М.В., Аксенов В.Л., Амелюшкин А.М., Андреев Е.А., Анохина А.М., Балакшин Ю.В., Белышев С.С., Брусницын А.А., Вдовина И. Ф., Вдовина И.Ф., Веденькин А.Н., Веденькин Н.Н., Волков С.А., Вохник О.М., Галкин В.И., Голубенко А.А., Горнушкина Н.А., Горнушкина Н.А., Горшенин В.П., Горячев Б.И., Гуральская И.М., Дороженко Т. С., Дороженко Т.С., Дороженко Т.С., Еременко Д.О., Жук В.Л., Жук В.Л., Зверева И.М., Злоказов В.Б., Зубрило А.А., Зырянов С.М., Иванова Л.И., Игнатович В.К., Ильина Н.П., Ищенко С. В., Казарина Н.Ю., Киселев М.А., Кисилев М.А., Кичанов С.Е., Коропченко Н.В., Красильников С.С., Красильникова Н.А., Красоткин С.А., Кузаков К.А., Кузнецов А.А., Куров Е.А., Кэбин Э.И., Леонтьев В. В., Леонтьев В.В., Леонтьева А.Н., Леонтьева А.Н., Леонтьева А.Н., Леонтьева А.Н., Лычагин Е.В., Максудов С.М., Малышев К.Ю., Малышев К.Ю., Матвеев М.Ю., Мицина И.М., Морозов С.Б., Морозов С. Б., Объедова Л.К., Перепелов А.В., Петров В.Л., Платонов С.Ю., Подварков Г.Г., Прохоров А.В., Ремизов П.Д., Рогачев А.В., Рубинштейн И.А., Савенко Б.Н., Савина Т.Н., Савина Т.Н., Самойлова Н. Ю., Свертилов С.И., Силаев А.А., Скачкова Л.В., Скачкова Л.В., Ской В.Р., Скурихин А.В., Сомиков А.В., Спасский А.В., Степанов М.Е., Сумников С.В., Тропин Т.В., Трусов С.В., Тютюнников С. И., Фроликов С.Ю., Цирулев М.И., Цыганкова О.В., Чопорняк Д.Б., Швецов В.Н., Шевелева Е.В., Шевелева Е.В., Шефель Г.М., Шефель Г.М., Широков Е.В., Яковлева Г.Н., Янин Л.А.

Шевелева Елена Васильевна

Шевелева Елена Васильевна

Управление Федеральной службы государственной регистрации, кадастра и картографии Омская область

Заместитель начальника отдела

Cведения о доходах за 2012 год


ФИОНедвижимостьТранспортДоход
ТипПлощадьВладение
Шевелева Елена Васильевназемельный участок (пользование)419 кв. м.В пользованииавтомобиль Land Rover (Frilander) автомобиль ГАЗ CAЗ

572 002 рубля

жилой дом (пользование)85 кв.м.В пользовании
супруг(а)земельный участок419 кв.м.В собственности

768 065 рублeй

(инд. собственность)85 кв.м.В собственности
ребенокжилой дом (инд. собственность)419 кв.м.В собственности
земельный участок (пользование) жилой дом (пользование)85 кв.м.В пользовании

Информация об этом ведомстве (остальные декларации)

Рубрика: Исполнительная власть

Источник декларации: файл id=380827

Остальные декларации этого человека

Шевелева Елена Михайловна, ГБОУ Школа № 2089, Москва

Занимаемая должность (должности): Учитель начальных классов

Категория Высшая

Корпус: Школьное отделение № 7

Фактическое место работы: ГБОУ Школа № 2089

Преподаваемые дисциплины: Математика, русский язык, чтение, окружающий мир, технология, ИЗО

Уровень образования: Высшее

Наименование оконченного учебного заведения: Брянский ордена «Знак Почета» государственный педагогический институт имени И. Г.Петровского

Наименование направления подготовки и (или) специальности: Математика

Общий стаж работы: 24 года

Стаж работы по специальности: 22 года

Данные о повышении квалификации и (или) профессиональной переподготовке (при наличии):

1. Совершенствование профессиональной компетенции учителя начальных классов в условиях реализации ФГОС, 2010 год

2. Реализация технологий деятельностного обучения в образовательном процессе начальной школы по требованиям ФГОС НОО. ИКТ как инструмент формирования УУД младшего школьника. Модуль 1,2,3 — 216 часов, 2014 год

3. Реализация технологий деятельностного обучения в образовательном процессе начальной школы по требованиям ФГОС НОО. ИКТ как инструмент формирования УУД младшего школьника». Модули 1,2,3, 2014 год

4. Технологическая школа тьюторства: инструменты работы с обучающимися с ОВЗ в начальном общем образовании в условиях ФГОС, 2018 год

Награды и почетные звания:

За многолетний добросовестный труд в системе образования награждена Почетной грамотой Брянской областной Думы и нагрудным знаком. (Решение от 19.04.2011 № 1148-сд)

e-mail: [email protected]

Шевелева Елена Григорьевна

Повышение квалификации и (или) профессиональная переподготовка

Курс ««Содержание и методика преподавания модуля «Основы православной культуры» в курсе ОРКСЭ»»

часов — 72 , год окончания 2018

Курс «»Реализация ФГОС начального общего образования на основе системно-деятельностного подхода»»

часов — 72 , год окончания 2017

Курс ««Специальные знания, способствующие эффективной реализации ФГОС лдя обучающихся с ОВЗ»»

часов — 72 , год окончания 2017

Курс ««Математика в начальной школе: программы ФГОС, нестандартные задачи, геометрия и история науки»»

часов — 72 , год окончания 2017

ИП Шевелева Елена Викторовна, Краснодарский край Сочи (ИНН 232009769208, ОГРНИП 304232035700201) – реквизиты

Юридический адрес

Краснодарский край, г Сочи

Краткая справка

По данным ЕГРИП индивидуальный предприниматель Шевелева Елена Викторовна зарегистрирован 22 декабря 2004 по адресу Краснодарский край, г Сочи. Юр.лицу присвоены ОГРНИП 304232035700201, ИНН 232009769208. Основной вид деятельности — «Деятельность по предоставлению прочих вспомогательных услуг для бизнеса, не включенная в другие группировки». Связей между Шевелева Елена Викторовна и другими юридическими лицами не обнаружено

Общие данные

  • дата регистрации — 22.12.2004
  • ИП ликвидирован 20.11.2017Юридическое лицо ликвидировано
  • не числится в реестре СМиСП

Реквизиты

  • ОГРНИП — 304232035700201
  • ИНН — 232009769208

Сведения о регистрации

по данным ЕГРЮЛ и ЕГРИП

Федеральная налоговая служба (ФНС)

22 декабря 2004 ИП Шевелева Елена Викторовна присвоен ОГРНИП 304232035700201

Регистратор — Межрайонная инспекция Федеральной налоговой службы № 16 по Краснодарскому краю

Адрес регистратора — 350020,Краснодар г,Коммунаров ул,235

22 декабря 2004 ИП Шевелева Елена Викторовна поставлен на учет в налоговом органе, присвоен ИНН 232009769208

Налоговый орган — Межрайонная инспекция Федеральной налоговой службы № 7 по Краснодарскому краю

Пенсионный фонд России (ПФР)

Юр. лицо зарегистрировано 20 января 2005 под номером 033024031292

Территориальный орган — Управление Пенсионного фонда РФ в Центральном районе г.Сочи

Жалобы в фас

На предпринимателя — 0

От предпринимателя — 0

Арбитражные дела

Истец — 0

Ответчик — 0

Исполнительное производство

Производств с долгом — 0

Сумма долга — ░ ₽

Лицензии

Действующие — 0

Недействующие — 0

Банковские гарантии

Размещенные — 0

Отклоненные — 0

Заказчик

Процедуры, в которых ИП выступает заказчиком

Завершено закупок

0

Подача заявок

0

Поставщик

Процедуры, в которых ИП выступает участником

Победы в закупках

0

Участие

без побед

0

НадежностьУзнать числится ли юр.лицо в РНПРегистрация в ЕРУЗУзнать зарегистрировано ли юр.лицо в ЕРУЗ

Виды деятельности по ОКВЭД

Основной вид деятельности

82. 99Деятельность по предоставлению прочих вспомогательных услуг для бизнеса, не включенная в другие группировки

Дополнительные виды деятельности

63.91Деятельность информационных агентств
79.90.3Деятельность по предоставлению туристических услуг, связанных с бронированием
90.04Деятельность учреждений культуры и искусства
91.01Деятельность библиотек и архивов

прочие виды деятельности

Шевелева Елена Викторовна, г Сочи — информация о контрагенте из официальных источников (в т.ч. ЕГРЮЛ и ЕГРИП): реквизиты, адрес, контакты, ОКВЭД и другие сведения.

Доктор Елена Шевелева — Персонал

Обзор

Сферы моих научных исследований включают международное развитие и международную торговлю и развитие. Совсем недавно я заинтересовался экономикой труда и экономикой стимулов.

Я получил докторскую степень в Пенсильванском государственном университете и с тех пор работаю в Кардиффском университете.

Биография

Квалификация

  • Экономический факультет, Государственный университет Пенсильвании,
  • Бакалавр математики, Бакалавр экономики Американский университет в Болгарии

Достижения и награды

  • Незарегистрированные преступления: влияние сообщений жертв на распределение ресурсов полиции, схема CUROP с Иэном Лонгом
  • Производительность, поощрительная оплата и причинные факторы в операциях слива, ESRC Business Boost, с Ириной Харрис Текст
  • Производительность, поощрительная оплата и причинные факторы в операциях слива, посевной фонд, с Ириной Харрис и Мелани Джонс
  • Аналитическая поддержка Local Enterprise Partnership, Вустершир, ESRC, с Анной Кочановой
  • Грант на мобильность Кардифф-Сямэнь (приостановлено из-за коронавируса)

Выступления

  • КРЕМ (16-17 октября 2014 г. )
  • Нантский университет (22 апреля 2015 г.)
  • CES IFO (22–23 мая 2015 г.)
  • ETSG (10–12 сентября 2015 г.)
  • Оксфордский университет (30 ноября 2015 г.)
  • Международная ассоциация прикладной эконометрики (20-24 июня 2016 г.)
  • Европейская экономическая ассоциация (22-26 августа 2016 г.)
  • Копенгагенская бизнес-школа (28 июня 2016 г.)
  • Датский международный экономический семинар (23 июня 2017 г.)
  • Датский международный экономический семинар (23 июня 2017 г.)
  • ETSG (10-12 сентября 2018 г.)
  • Cardiff Microeconomics Group (декабрь 2018 г.)
  • Отраслевая презентация (17 декабря 2018 г.)
  • ETSG (10-12 сентября 2019 г.)
  • Международная торговая конференция Среднего Запада (31 мая — 2 июня 2019 г.)
  • Международная экономическая конференция Среднего Запада (31 мая — 2 июня 2019 г.)
  • InsTED (20-22 сентября 2019 г.)

Комитеты и проверки

Рецензент журнала American Economic Journal: Microeconomics и Economics Letters

Обучение

  • BS3554 Финансовая экономика
  • BST172 Международная торговля
  • BST281 Микроэконометрия

Научные интересы

  • Эмпирическая промышленная организация
  • Международная торговля и развитие

Надзор

  • Международная торговля
  • Развитие
  • Стимулы (экономика труда)

Елена Шевелева, руководитель отдела кадров Sideways 6

Около сбоку 6
Sideways 6 существует для построения лучшего бизнеса с помощью идей сотрудников. Мы уверены, что отличные идеи могут прийти откуда угодно и что предоставление сотрудникам права голоса является секретом успеха в бизнесе.

Более 4 миллионов сотрудников таких компаний, как Virgin, AstraZeneca, Sainsbury’s, Nestle и International Airlines Group, доверяют подходу Sideways 6, и наша миссия — дать возможность высказаться 50 миллионам человек.

Мы являемся быстрорастущим предприятием, занимающимся расширением «Программное обеспечение как услуга» (SaaS). Мы располагаем двумя офисами в Минске и Лондоне, со значительным успехом, отличными клиентами и историями, а также некоторыми невероятными инвесторами.У нас огромные амбиции, которые основаны на поиске, развитии и вызове лучших людей — и именно в этом вы вступаете.

Мы действительно гордимся нашими 5-звездочными отзывами о Glassdoor, и это свидетельство того, как мы относимся к нашим сотрудникам. На них возложена большая ответственность, много возможностей для роста и развития и шанс стать частью чего-то особенного. «Идея пива», вероятно, тоже помогает …
https://www.glassdoor.co.uk/Overview/Working-at-Sideways-6-EI_IE1582048.11,21.htm
https: // www.escapethecity.org/organisation/sideways-6

В Sideways 6 мы руководствуемся шестью основными ценностями, которые побуждают нас делать свою работу наилучшим образом. * Владейте им, сделайте лодку быстрее, всегда учитесь, начинайте с того, почему, придерживайтесь прозрачности и празднуйте успех *.

У нас есть офисы, расположенные в * Лондоне и Минске *, и мы организуем множество общественных и командных мероприятий, так что вы познакомитесь со всеми нами в кратчайшие сроки! Пиво и выпивка по пятницам — отличный способ расслабиться после рабочей недели и отпраздновать маленькие (и большие!) Победы и вещи, которые заставили нас улыбнуться на этой неделе.Мы также любим немного корпоративной атрибутики, поэтому, если вы любите носить худи на работе, вы отлично подойдете!

Помимо конкурентоспособной заработной платы, у каждого члена команды есть выделенный бюджет на обучение, с возможностью путешествовать между нашими офисами в Лондоне и Минске, чтобы наладить прочные рабочие отношения в вашей команде. Вас будут окружать умные и целеустремленные коллеги, которые любят сотрудничать, дискутировать, тусоваться и открывать пиво в пятницу (надеюсь, лично, когда текущая ситуация ослабнет!).

Сайт компании:
sideways6.com

Экспрессия сорбитол-6-фосфатдегидрогеназы в трансгенном табаке1 | Физиология растений

Аннотация

Мы проанализировали трансгенный табак ( Nicotiana tabacum L.), экспрессирующий Stpd1 , кДНК, кодирующую сорбитол-6-фосфатдегидрогеназу из яблока, под контролем промотора 35S вируса мозаики цветной капусты. В 125 независимых трансформантах количество сорбита варьируется от 0.Найдено от 2 до 130 мкмоль г -1 сырой массы. Растения, которые накапливали от 2 до 3 мкмоль г -1 сорбита в сыром виде, были фенотипически нормальными, с постепенным замедлением роста по мере увеличения количества сорбита. У растений, накапливающих сорбитол в количестве от 3 до 5 мкмоль г -1 сырой массы, иногда наблюдались области, в которых хлорофилл частично терялся, но при более высоких количествах сорбита молодые листья всех растений теряли хлорофилл в виде неровных пятен, которые развивались в некротические поражения. Когда содержание сорбита превышало 15-20 мкмоль г -1 сырой массы, растения становились бесплодными, а при еще более высоких концентрациях сорбита первичные регенеранты не могли образовывать корни в культуре или почве. В зрелых растениях количество сорбита варьировалось в зависимости от возраста, положения листьев и условий роста. Появление поражений коррелировало с высоким содержанием сорбита, глюкозы, фруктозы и крахмала и низким содержанием мио -инозита. Добавление myo -инозита в проростки и молодые растения предотвращало образование повреждений.Гипераккумуляция сорбита, который мешает биосинтезу инозита, по-видимому, приводит к осмотическому дисбалансу, возможно, действуя как сигнал, влияющий на выделение и транспорт углеводов.

В условиях водного стресса растения во многих семьях накапливают метаболиты, которые, как считается, обеспечивают осмотическое регулирование, то есть их присутствие приводит к задержке воды в условиях ограничения воды (LeRudulier and Bouillard, 1983). Другая точка зрения предполагает, что накапливающиеся метаболиты могут иметь определенные защитные функции, например.г. в защите мембран или белковых комплексов, стабилизации ферментов или улавливании радикалов (Smirnoff and Cumbes, 1989; Galinski, 1993; Smirnoff, 1993; Asada, 1994; Papageorgiou and Murata, 1995). Эти концепции, изначально основанные на коррелятивных доказательствах и исследованиях in vitro, теперь могут быть проверены на трансгенных растениях. Разработанная экспрессия маннита, ононита, фруктанов, Pro, Gly бетаина и трегалозы описана в основном в трансгенном табаке ( Nicotiana tabacum ) (Tarczynski et al., 1993; Кишор и др., 1995; Номура и др., 1995; Пилон-Смитс и др., 1995; Holmström et al., 1996; Hayashi et al., 1997). Во всех случаях накопление метаболита имело определенный эффект, который часто отслеживается как пограничная защита продуктивности растений в условиях водного или солевого стресса, но неизвестно, по какому механизму (-ам) функционируют аккумулирующие метаболиты. Учитывая, что многие сконструированные метаболиты накапливаются до низких, осмотически несущественных количеств, мы хотели изучить эффект чрезвычайно высокого накопления осмолита.

Мы изучили влияние продукции маннита и ононита на продуктивность растений в условиях солевого стресса (Tarczynski et al., 1993; Vernon et al., 1993; Shen et al., 1997a; Sheveleva et al., 1997). Трансгенные растения табака, содержащие маннит в хлоропластах (1-8 мкмоль г, -1 сырой массы), фенотипически нормальны и демонстрируют скорость фотосинтеза, идентичную таковой у дикого типа (Shen et al., 1997a), но рост, по-видимому, замедляется по мере того, как маннитол увеличивается (Karakas et al., 1997). Накапливающие ононит (до 10 мкмоль г -1 сырой массы) растения также обладают нормальным фенотипом (Vernon et al., 1993; Sheveleva et al., 1997). Когда эти растения подвергаются стрессу засухи и высокой засоленности, они накапливают еще большее количество ононита (до 35 мкмоль г -1 сырой массы) в результате вызванного стрессом увеличения мио -инозитола, который затем служит субстратом для дополнительной продукции ононита (Шевелева и др. , 1997). Во время этого стресс-индуцируемого накопления рост растений является нормальным.

В этом анализе производства полиолов мы сообщаем о характеристиках табака после экспрессии Stpd1 , кДНК, кодирующей сорбитол-6-фосфатдегидрогеназу из яблока (Kanayama et al., 1992). После анализа большого количества первичных трансформантов мы обнаружили накопление сорбита в диапазоне от 0,2 до примерно 130 мкмоль г -1 сырой массы. Даже если предположить, что сорбит, по крайней мере частично, может быть разделен на вакуоль, высокие количества будут осмотически значимыми.В пределах этого диапазона мы контролировали продуктивность растений в оптимальных условиях роста и во время обработки солевым стрессом. Результаты показали, что высокие количества сорбита замедляют рост и приводят к симптомам, аналогичным тем, о которых сообщалось для растений, экспрессирующих внеклеточную инвертазу (von Schaewen et al., 1990). Однако симптомы, вызываемые экспрессией инвертазы, неоднородностью фотосинтеза, потерей хлорофилла и некрозами, преимущественно затрагивали зрелые исходные листья, тогда как симптомы, наблюдаемые при высоком уровне продуцентов сорбита, уже проявлялись на незрелых листьях. Хотя разные чужеродные полиолы могут иметь разные эффекты в трансгенных растениях, одна из интерпретаций состоит в том, что создание большого количества осмолитов не обязательно является лучшей стратегией защиты от осмотического стресса в организме, который не адаптирован для накапливающегося метаболита. Согласно другой гипотезе, и, возможно, специфичной для накопления сорбита, неблагоприятный эффект сорбита может быть вызван нарушением пула Glc-6-P сорбитол-6-фосфатдегидрогеназой, которая затем может влиять на количество UDP-Glc или Glc. что приводит к изменению чувствительности растений к сахару.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Трансформация растений

Использовали плазмиду, содержащую кДНК, кодирующую сорбитол-6-фосфатдегидрогеназу ( Stpd1 ) из яблока (Kanayama et al., 1992). Кодирующая область Stpd1 была лигирована в pBIN19, которая содержала фрагмент промотора / энхансера 35S CaMV (фиг. 1). Рекомбинантную плазмиду pBIN18 / Stl вводили в Agrobacterium tumefaciens cv LB4404. Трансформацию диска листа табака ( Nicotiana tabacum cv SR1) проводили, как описано ранее (Tarczynski et al., 1992). Зеленые побеги, появляющиеся из листовых дисков на чашках с агаром, содержащих 100 мкг мл -1 канамицина, регенерировали в растения. Более 120 первичных трансформантов (T 0 ) были проанализированы на наличие и количество сорбита. Саженцы переносили в почву. Через 14 дней роста листовые диски были взяты для экстракции сахара и полиола и проанализированы с помощью ВЭЖХ (см. Ниже). Большинство экспериментов проводилось с сегрегирующим поколением T 2 табака линии S5C, которое продуцировало сорбитол в количествах от 0 до 0.От 2 до 48 мкмоль г -1 сырой массы, в зависимости от отдельного растения, положения листьев и условий роста.

Рис. 1.

Схематическое изображение конструкции гена, приводящей к экспрессии сорбитол-6-фосфатдегидрогеназы (S6PDH) в трансгенном табаке. Кассету гена субклонировали в pBIN19 и вводили в растения с помощью трансформации на основе A. tumefaciens .

Рис. 1.

Схематическое изображение конструкции гена, приводящей к экспрессии сорбитол-6-фосфатдегидрогеназы (S6PDH) в трансгенном табаке.Кассету гена субклонировали в pBIN19 и вводили в растения с помощью трансформации на основе A. tumefaciens .

Рост растений

Семена табака дикого типа (SR1) и сорбитолсодержащей линии (S5C) проращивали и выращивали в вермикулите в течение приблизительно 3 недель, а затем переносили в гидропонный раствор. Были построены две гидропонные системы для выращивания растений, состоящие из шести ванн с 10 растениями в каждой ванне. Три ванны подавали из резервуара с общим объемом питательного раствора 230 л.Питательный раствор заменяли один раз в час с использованием погружных насосов (модель 1P914B, TEEL, Dayton Electric Co., Чикаго, Иллинойс). Растения орошали раствором Хогланда четвертой крепости в теплице при интенсивности света в полдень примерно 1600 мкмоль квантов м -2 с -1 , относительной влажности примерно 60% и температуре 28 ± 3. ° C. Содержание питательных веществ анализировали ионообменной хроматографией один раз в неделю и добавляли обедненные элементы. Шестинедельные растения подвергались солевому стрессу (см. Подписи к рисункам), тогда как к контрольным растениям соль не добавляли.

Другие эксперименты проводились в камере выращивания в почве, состоящей из почвенной смеси: вермикулит: песок (3: 2: 1). Плотность потока фотонов (400–700 нм) поддерживалась на уровне 400 мкмоль · м −2 с −1 с циклом день / ночь 12/12 ч, относительной влажностью <20% и температурой 27 ° C во время освещения. период и 23 ° C в темный период.

Анализ сахара, полиола, протеина и крахмала

Через два часа светового периода листья собирали, замораживали в жидком N 2 , экстрагировали на углеводы и Pro и анализировали с помощью ВЭЖХ-разделения с использованием импульсного амперометрического обнаружения (Adams et al., 1992, 1993). Для определения крахмала нерастворимые в этаноле остатки после анализа сахара промывали 70% этанолом, а затем растворяли в 20 мМ NaOH в течение 1 ч при 70 ° C. Доводили pH до 4,6 и раствор расщепляли α-амилазой и амилоглюкозидазой в течение ночи (Sonnewald et al., 1991). После центрифугирования высвободившийся Glc определяли с помощью ВЭЖХ (Adams et al., 1993).

Газообменные измерения

Чистый СО 2 — скорости ассимиляции в воздухе измеряли в прикрепленных листьях в теплице в условиях насыщенного света с использованием газоанализатора ИК (Li-6400, Li-Cor, Lincoln, NE).Температуру листа поддерживали на уровне 28 ° C с помощью CO 2 при 360 ppm.

Рост на искусственной среде

Стерилизованные на поверхности семена SR1 или S5C выращивали на агаре в стерильной культуре в среде 1 × Мурашиге и Скуга, содержащей витамины В5 Гамборга, включая гидрохлорид тиамина, гидрохлорид пиридоксина и никотиновую кислоту (Murashige and Skoog, 1962). myo -Инозит был исключен из базовой среды. C поставляли путем добавления либо Suc, либо Glc (8.8 и 38,8 мм соответственно) или мио -инозитол (1 мм). Контроли включали Suc, Glc и myo, -инозитол или отсутствие добавок к базальной среде. Температуру поддерживали на уровне 25 ° C при интенсивности света 100 мкмоль · м −2 с −1 .

РЕЗУЛЬТАТЫ

Корреляция между количеством сорбита и образованием повреждений

Яблоко Stpd1 , кодирующее сорбитол-6-фосфатдегидрогеназу под контролем усиленного промотора 35S CaMV, переносили в SR1.В дополнение к области, кодирующей Stpd1 , генная конструкция включала 35 нуклеотидов 5′-нетранслируемой области кДНК и примерно 200 нуклеотидов 3′-конца ниже стоп-кодона, который был слит с дополнительным сегментом полиаденилирования ( Рисунок 1). Экспрессия Stpd1 приводила к накоплению сорбита, тогда как сорбит не обнаруживался в линии предшественников SR1. Анализ 125 независимых трансформантов показал широкий разброс концентрации сорбита в растениях поколения T 0 , выращенных в культуре ткани (Таблица I).Помимо количества сорбита, в таблице указана степень поражения растений на стадии трехлистного роста в почве. Трансгенные растения, продуцирующие сорбит, отличались от растений, продуцирующих маннит, о которых сообщалось ранее (Tarczynski et al., 1992; Shen et al., 1997a), тем, что многие линии содержали значительно более высокие уровни сорбита (до 130 мкмоль г -1 свежих вес), чем продуценты маннита (до 8 мкмоль г -1 сырой массы).

Таблица I. Количества сорбита

в выборке независимых трансформантов табака SR1 (поколение T 0 )

Поражения 9028 отсутствие роста корней, смерть
Линия . Сорбитол . Растение Habitus .
мкмоль г -1 свежий вес
SS106 0,35 Нет повреждений
SS110 9028 SS2 2,5 Нет повреждений
SS38 3 Нет повреждений
SS105b 3.2 Поражения
SS37 3,6 Нет повреждений
SS105a 3,9 Нет поражений
SS59
SS81 8,7 Поражения
SS97 10,1 Поражения, задержка роста
SS108b 17.5 Поражения, задержка роста, бесплодие
SS108a 23,8 Поражения, задержка роста, бесплодие
SS91 27,8 Поражения SS, задержка роста,
SS41 60,9 Поражения, отсутствие роста корней, гибель
SS19 130,0 Поражения, отсутствие роста корней, гибель
902 . Сорбитол . Растение Habitus . мкмоль г -1 свежий вес SS106 0,35 Нет повреждений SS110 9028 SS2 2,5 Нет повреждений SS38 3 Нет повреждений SS105b 3.2 Поражения SS37 3,6 Нет повреждений SS105a 3,9 Нет поражений SS59 Поражения SS81 8,7 Поражения SS97 10,1 Поражения, задержка роста SS108b 17.5 Поражения, задержка роста, бесплодие SS108a 23,8 Поражения, задержка роста, бесплодие SS91 27,8 Поражения SS, задержка роста, 9028 отсутствие роста корней, смерть SS41 60,9 Поражения, отсутствие роста корней, гибель SS19 130,0 Поражения, отсутствие роста корней, гибель Таблица I.

Количество сорбита в выборке независимых трансформантов табака SR1 (T 0 поколение)

70a70a
Линия . Сорбитол . Растение Habitus .
мкмоль г -1 свежий вес
SS106 0,35 Нет повреждений
SS110 9028 SS26 Нет поражений
SS38 3 Нет поражений
SS105b 3,2 Нарушения
SS37 Нет повреждений
SS59 4,6 Нет повреждений
SS86 5,0 Поражения
SS81 8.7 Поражения
SS97 10,1 Поражения, задержка роста
SS108b 17,5 Поражения, задержка роста, бесплодие
Поражение задержкой роста
SS91 27,8 Поражения, задержка роста, бесплодие
SS104 52,0 Поражения, отсутствие роста корней, смерть
SS41 60.9 Поражения, отсутствие роста корней, гибель
SS19 130,0 Поражения, отсутствие роста корней, гибель
Нет повреждений инфузия7 В почву проростки, производящие наибольшее количество сорбита, не смогли развить корни и погибли. У тех, у кого концентрация сорбита была ниже (5–50 мкмоль, г -1 сырой массы), на листьях появлялись некротические поражения, и листья оставались небольшими (рис.2). Растения с концентрацией сорбита менее чем приблизительно 2 мкмоль г -1 сырой массы имели нормальный характер роста, тогда как растения с более чем приблизительно 3 мкмоль г -1 сырой массы сорбита демонстрировали задержку роста. Образование повреждений на незрелых листьях также коррелировало с концентрацией сорбита. Растения, содержащие менее 3 мкмоль сорбита на г -1 сырой массы, не имели повреждений, и случайные повреждения наблюдались у растений, накапливающих сорбит в количестве от 3 до 7 мкмоль г -1 сырой массы.Количество поражений и размер пораженных участков увеличивались по мере увеличения сорбита (Таблица I).

Рис. 2.

Фенотип растения S5C и примеры листьев с некротическими поражениями. На верхней панели показан габитус 10-недельного растения, типичный для растений с концентрацией сорбита более чем приблизительно 15 мкмоль г -1 сырой массы. На нижней панели показаны зрелые листья, типичные для растений, которые накапливали сорбит в количестве от 5 до 10 мкмоль г -1 свежей массы в своих молодых, расширяющихся листьях.

Рис. 2.

Фенотип растения S5C и примеры листьев с некротическими поражениями. На верхней панели показан габитус 10-недельного растения, типичный для растений с концентрацией сорбита более чем приблизительно 15 мкмоль г -1 сырой массы. На нижней панели показаны зрелые листья, типичные для растений, которые накапливали сорбит в количестве от 5 до 10 мкмоль г -1 свежей массы в своих молодых, расширяющихся листьях.

Растения из сегрегирующего поколения T 2 S5C использовали в дальнейших анализах после отбора на устойчивость к канамицину и скрининга на количества сорбита.Чем выше концентрация сорбита, тем больше поражений и больше площади некротической ткани (рис. 2; таблица II). Появление повреждений зависело от количества сорбита, когда листья были молодыми. Первоначально пораженные участки ткани потеряли хлорофилл, пожелтели, а позже стали некротизированными. После того, как листья полностью распространились, новые поражения не образовывались, некротические участки немного расширились, а из-за неравномерного расширения при наличии некротических пятен листья стали деформированными (рис.2). В старых листьях количество сорбита всегда снижалось, что мы интерпретируем как следствие измененной активности промотора 35S CaMV. Примеры, приведенные в таблице II, представляют типичное поведение. Растения с высоким содержанием сорбита содержали самые высокие концентрации полиола в листе № 2, и количество сорбита снижалось по сравнению с листом № 3 и далее. На листьях одного из этих растений, занимающих от 10% до 20% площади зрелого листа, на стадии предварительного поражения могут быть пятна или участки пожелтения. В растениях, накапливающих среднее или низкое количество сорбита (например,г. завод нет. 4, Таблица II), два самых молодых листа показали наибольшее количество сорбита, хотя повреждения никогда не образовывались с сопоставимой частотой по сравнению с растениями с более высокими концентрациями сорбита, а количество сорбита постепенно снижалось в более старых листьях.

Таблица II.

Количество сорбита в листьях трансформантов табака S5C

Линия . Сорбитол . Растение Habitus .
мкмоль г -1 свежий вес
SS106 0,35 Нет повреждений
SS110 2.5 Нет поражений
SS32 2,6 Нет поражений
SS38 3 Нет поражений
SS105b
SS105a 3,9 Нет повреждений
SS59 4,6 Нет повреждений
SS86 5.0 Поражения
SS81 8,7 Поражения
SS97 10,1 Поражения, задержка роста
SS108b 23,8 Поражения, задержка роста, бесплодие
SS91 27,8 Поражения, задержка роста, бесплодие
SS104 52.0 Поражения, отсутствие роста корней, гибель
SS41 60,9 Поражения, отсутствие роста корней, гибель
SS19 130,0 Поражения, отсутствие роста корней, смерть перенесена
. Сорбитол .
Лист № . Завод №1 . Завод № 2 . Завод № 3 . Завод № 4 .
мкмоль г -1 свежая масса
1 9,4 16.5+ 10,0 4,4
2 3,6
3 27.8+ 14,8+ 8,2 1,5
4 1,3 6,0+ 7,3+ 1,5
5 7,4+ 5 7.4+ 1,0
5 904.

Количество сорбита в листьях трансформантов табака S5C

. Сорбитол .
Лист № . Завод № 1 . Завод №2 . Завод № 3 . Завод № 4 .
мкмоль г -1 свежий вес
1 9,4 16.5+ 10,0 4,4
2 3,6
3 27,8+ 14,8+ 8,2 1.5
4 1,3 6.0+ 7.3+ 1.5
5 7.4+ 3.2+ 3.1+ 1.0
. Сорбитол .
Лист № . Завод № 1 . Завод № 2 . Завод № 3 . Завод № 4 .
мкмоль г -1 свежая масса
1 9,4 16.5+ 10,0 4,4
2 3,6
3 27,8+ 14.8+ 8,2 1,5
4 1,3 6,0+ 7,3+ 1,5
5 7,4+ 3,2+ 3,1287+ 3,2+ 3,1287
. Сорбитол .
Лист № . Завод № 1 . Завод № 2 . Завод № 3 . Завод № 4 .
мкмоль г -1 свежая масса
1 9,4 16.5+ 10,0 4,4
2 3,6
3 27,8+ 14,8+ 8,2 1,5
4 1.4 Количество сорбита в S5C превышало количества Glc, Fru и Suc. У всех растений S5C содержание сорбита было самым высоким в апикальном листе. myo -Инозитол был ниже в самых молодых листьях S5C, чем в сопоставимых листьях SR1.В листьях с наибольшим содержанием сорбита млн. -инозитол практически не обнаруживался. Одновременно со снижением сорбита по мере созревания листьев S5C, myo, -инозитол снова увеличивалось, но не достигало количества, обнаруженного в листе номер 5 и более старых листьях SR1. Это поведение отличается от поведения SR1, в котором самые молодые листья содержали наибольшее количество myo -inositol, которое затем уменьшалось, когда листья становились исходными листьями. В листьях с высоким содержанием сорбита и низким содержанием мио -инозита (количество листьев 1–4) количество крахмала было в 2–3 раза выше у сорбитолсодержащих растений по сравнению с диким типом.Количество Glc и Fru для всего листа не коррелировало с числом листьев, и между растениями SR1 и S5C не было значительных различий. Однако количества сук были ниже у сорбитолсодержащих растений, но все же сохраняли суточные колебания (данные не показаны). Отношение крахмала к Suc в S5C было выше, чем в SR1, в 7–5 раз на листах с номерами 1–4, которые содержали наибольшее количество сорбита.

Таблица III.

Неструктурные углеводы в листьях растений SR1 и S5C

Лист No.. Углеводы .
Сорбитол . Инозитол . Крахмал 2-а . Glc . Фру . Suc . Крахмал / Suc .
SR1 . S5C . SR1 . S5C . SR1 . S5C . SR1 . S5C . SR1 . S5C . SR1 . S5C . SR1 . S5C .
мкмоль г -1 свежий вес
1 0 30.9 7,8 0,02 9,6 20,0 4,3 5,9 3,6 3,6 4,6 1,4 2,1 14,2 2,1 14,2 8,1 0,02 8,0 29,8 4,2 3,8 3,3 3,1 3,4 2,3 2,4 12.8
3 0 13,6 6,1 0,02 9,1 29,1 2,3 1,4 1,8 1,5 3,1 1,5 3,1 1,5 3,1
4 0 14,4 4,9 0,04 7,4 22,4 3,3 2,4 3,1 2,4 3.7 2,2 2,0 10,2
5 0 7,4 3,6 0,80 15,2 16,7 4,3 2,7 4,3 2,7 4,3 2,7 2,8 5,5 6,0
Лист No. . Углеводы .
Сорбитол . Инозитол . Крахмал 2-а . Glc . Фру . Suc . Крахмал / Suc .
SR1 . S5C . SR1 . S5C . SR1 . S5C . SR1 . S5C . SR1 . S5C . SR1 . S5C . SR1 . S5C .
мкмоль г -1 свежий вес
1 0 30,9 7,8 0,02 9,63 5,9 3,6 3,6 4,6 1,4 2,1 14,2
2 0 22,9 8,1 0,02 8,0 3,8 3,3 3,1 3,4 2,3 2,4 12,8
3 0 13,6 6,1 0.02 9,1 29,1 2,3 1,4 1,8 1,5 3,1 1,7 2,9 16,8
4 0 7,4 22,4 3,3 2,4 3,1 2,4 3,7 2,2 2,0 10,2
5 0 7.4 3,6 0,80 15,2 16,7 4,3 2,7 4,4 2,4 2,8 2,8 5,5 6,0
904 Таблица III.

Неструктурные углеводы в листьях растений SR1 и S5C

9,6 3,4 12,8
Лист No. . Углеводы .
Сорбитол . Инозитол . Крахмал 2-а . Glc . Фру . Suc . Крахмал / Suc .
SR1 . S5C . SR1 . S5C . SR1 . S5C . SR1 . S5C . SR1 . S5C . SR1 . S5C . SR1 . S5C .
мкмоль г -1 свежий вес
1 0 30,9 7,8 0,02 9,6 9,6 9,66 3,6 4,6 1,4 2,1 14,2
2 0 22,9 8,1 0,02 8,0 29,8 3,1 3,4 2,3 2,4 12,8
3 0 13,6 6,1 0,02 9,1 29.1 2,3 1,4 1,8 1,5 3,1 1,7 2,9 16,8
4 0 14,4 9,4 3,3 2,4 3,1 2,4 3,7 2,2 2,0 10,2
5 0 7,4 3.6 0,80 15,2 16,7 4,3 2,7 4,4 2,4 2,8 2,8 5,5 6,0
90af270 91 . Углеводы .
Сорбитол . Инозитол . Крахмал 2-а . Glc . Фру . Suc . Крахмал / Suc .
SR1 . S5C . SR1 . S5C . SR1 . S5C . SR1 . S5C . SR1 . S5C . SR1 . S5C . SR1 . S5C .
мкмоль г −1 свежая масса
1 0 30,9 7,8 0,02 9,6 9,6 3,6 4,6 1,4 2.1 14,2
2 0 22,9 8,1 0,02 8,0 29,8 4,2 3,8 3,3
3 0 13,6 6,1 0,02 9,1 29,1 2,3 1,4 1,8 1.5 3,1 1,7 2,9 2,4
4 0 14,4 4,9 0,04 7,4 3,3 22,4 2,4 2,4 3,7 2,2 2,0 10,2
5 0 7,4 3,6 0,80 15,2 16,7 4.3 2,7 4,4 2,4 2,8 2,8 5,5 6,0

В течение всего жизненного цикла растений S5C количество редуцирующих сахаров Suc и myo -inosit приближалось обнаружен в SR1, поскольку количество сорбита постепенно снижалось в зрелых листьях (данные не показаны). Таким образом, растения смогли преодолеть, казалось бы, пагубный эффект накопления сорбита в незрелых листьях.На стадии цветения S5C представлял габитус выживших растений, распознаваемых некротическими поражениями, вирусными или грибковыми инфекциями или серьезным экологическим стрессом как незрелые растения.

Накопление сахара и сорбита в разных частях одного листа

На рис. 3 сравниваются отношения между сорбитолом, myo, -инозитолом, Glc и Fru для молодых развивающихся листьев S5C (возрастом 6 недель). В экстрактах цельного листа сорбитол, Glu и Fru увеличивался, а myo, -инозитол уменьшался по мере увеличения количества сорбита.Когда образовывались поражения, содержание углеводов сильно варьировалось по всему листу. Таблица IV сравнивает сахара и полиолы для разных участков одного и того же молодого развивающегося листа, нормальных и обесцвеченных. Показаны данные с одного листа. Области, в которых был восстановлен хлорофилл, имели тенденцию к накоплению сорбита, крахмала, Glc и Fru и имели низкие количества мио -инозитола. Не было разницы между нормальными и обесцвеченными пятнами по количеству Suc. Хотя среднее количество Glc и Fru на лист не показало устойчивых различий между листьями растений SR1 и S5C, участки с обесцвечиванием показали немного увеличенное количество Fru и Glc по сравнению с участками с нормальным внешним видом.

Рис. 3.

Взаимосвязь между количеством myo -инозитола, Glc, Fru и сорбита в растениях S5C. Растения выращивали в течение 10 недель в камере для выращивания (см. Методы). Растительный материал собирали через 2 ч после начала освещения. Такая же взаимосвязь была обнаружена при сравнении содержания крахмала и количества сорбита. gfw, Граммы свежего веса.

Рис. 3.

Взаимосвязь между количеством myo -инозитола, Glc, Fru и сорбита в растениях S5C.Растения выращивали в течение 10 недель в камере для выращивания (см. Методы). Растительный материал собирали через 2 ч после начала освещения. Такая же взаимосвязь была обнаружена при сравнении содержания крахмала и количества сорбита. gfw, Граммы свежего веса.

Таблица IV.

Неструктурные углеводы в нормальных и обесцвеченных частях листьев S5C

Завод No. . Углеводы .
Сорбитол . myo -Инозитол . Крахмал . Glc . Фру .
N . D . N . D . N . D . N . D . N . D .
мкмоль г -1 свежая масса
1 22,9 26,3 0,108 0,122 28,71 2,27
2 18,71 20,56 0,068 0,022 23,77 48,61 1.42 4,34 1,15 2,55
3 16,17 20,20 0,103 0,056 16,69 20,26 1,55 1,55 12,47 33,67 0,19 0,03 13,48 38,44 2,88 6,60 1,95 7.33
5 10,32 27,72 0,091 0,043 4,28 16,43 0,86 1,84 0,60 1,84 0,025 6,98 14,84 1,46 3,98 1,34 4,40
7 6,17 14.8 0,40 0,072 35,3 32,5 2,37 3,5 1,79 3,54
8 2,97 0,97 3,09 0,11 4,01
16,48
Завод No. . Углеводы .
Сорбитол . myo -Инозитол . Крахмал . Glc . Фру .
N . D . N . D . N . D . N . D . N . D .
мкмоль г -1 свежая масса
1 22,9 26,3 0,108 0,122 28,71 2,27
2 18,71 20,56 0,068 0,022 23.77 48,61 1,42 4,34 1,15 2,55
3 16,17 20,20 0,103 0,056 16,17 16,17 2,08
4 12,47 33,67 0,19 0,03 13,48 38,44 2,88 6.60 1,95 7,33
5 10,32 27,72 0,091 0,043 4,28 16,43 0,86 1,86 1,84 27,76 0,23 0,025 6,98 14,84 1,46 3,98 1,34 4,40
7 6.17 14,8 0,40 0,072 35,3 32,5 2,37 3,5 1,79 3,54
8 2,97 2,97 0,97 3,09 0,11 4,01
Таблица IV.

Неструктурные углеводы в нормальных и обесцвеченных частях листьев S5C

904osito11 и 900 Для дальнейшего изучения корреляции между низким содержанием мио -инозита, высоким содержанием сорбита и образованием повреждений, стерилизованные на поверхности семена SR1 и S5C проращивали в среде MS с добавлением различных источников C, Suc, Glc и myo -инозитола ( Инжир.4). Проростки S5C в этом поколении все еще демонстрировали сегрегацию (рис. 4C). Растения SR1 росли хорошо независимо от добавок, со слегка усиленным ростом и более высоким содержанием хлорофилла в листьях в среде, содержащей как сахара, так и мио -инозит. В отсутствие сахаров и мио -инозита проростки S5C образовывали поражения и росли очень медленно. Рост S5C стимулировался, и при добавлении в среду myo -инозита с сахаром или без него образовалось мало повреждений или не образовывалось вовсе.Когда вводились только Suc и Glc, рост стимулировался, но поражения на семядолях все еще развивались. От шести до девяти проростков из SR1 и S5C объединяли для анализа углеводов. Сорбит был высоким в отсутствие каких-либо добавок (и myo, -инозит был тогда низким) и самым низким, когда myo, -инозитол подавали в проростки S5C (Таблица V).

Рис. 4.

Рост проростков с добавлением мио -инозитола. Сеянцы растений SR1 (A и B) и S5C (C и D) выращивали в среде Murashige и Skoog с (B и D) и без myo -инозитола (A и C).

Рис. 4.

Рост проростков с добавлением myo -инозитола. Сеянцы растений SR1 (A и B) и S5C (C и D) выращивали в среде Murashige и Skoog с (B и D) и без myo -инозитола (A и C).

Таблица V.

Количества сахаров, мио-инозита и сорбита в растениях SR1 и S5C, выращенных в стерильной культуре на различных средах

Завод No.. Углеводы .
Сорбитол . myo -Инозитол . Крахмал . Glc . Фру .
N . D . N . D . N . D . N . D . N . D .
мкмоль г -1 свежая масса
1 22,9 26,3 0,108 0,122 28,71 2,27
2 18.71 20,56 0,068 0,022 23,77 48,61 1,42 4,34 1,15 2,55 1,15 2,55
3 20,26 1,53 2,92 1,20 2,08
4 12,47 33,67 0,19 0.03 13,48 38,44 2,88 6,60 1,95 7,33
5 10,32 27,72 0,091 0,091 4,2 0,60 1,83
6 8,21 27,76 0,23 0,025 6,98 14,84 1.46 3,98 1,34 4,40
7 6,17 14,8 0,40 0,072 35,3 3,57 32,5 2,37 3,5 2,97 19,83 0,56 0,086 3,64 16,48 0,97 3,09 0,11 4,01
902 902. Углеводы .
Сорбитол . myo -Инозитол . Крахмал . Glc . Фру .
N . D . N . D . N . D . N . D . N . D .
мкмоль г -1 свежая масса
1 22,9 26,3 0,108 0,122 28,71 2,27
2 18.71 20,56 0,068 0,022 23,77 48,61 1,42 4,34 1,15 2,55 1,15 2,55
3 20,26 1,53 2,92 1,20 2,08
4 12,47 33,67 0,19 0.03 13,48 38,44 2,88 6,60 1,95 7,33
5 10,32 27,72 0,091 0,091 4,2 0,60 1,83
6 8,21 27,76 0,23 0,025 6,98 14,84 1.46 3,98 1,34 4,40
7 6,17 14,8 0,40 0,072 35,3 3,57 32,5 2,37 3,5 2,97 19,83 0,56 0,086 3,64 16,48 0,97 3,09 0,11 4,01
0,07
Растение / Условия роста . Углеводы .
Сорбитол . Инозитол . Glc . Фру . Suc .
мкмоль г -1 свежий вес
SR1
Suc, Glc, мио -инозитол н.о. 4-а 1,08 ± 0,51 3,88 ± 2,91 4.02 ± 3,2 1,76 ± 0,47
Suc, Glc н.о. 0,50 ± 0,07 0,63 ± 0,24 0,43 ± 0,24 1,11 ± 0,05
мио -Инозитол н.о. 0,77 ± 0,08 1,72 ± 0,83 1,20 ± 0,16 1,29 ± 0,08
Без добавления н.о. 0,23 ± 0,02 0,44 ± 0,08 0.42 ± 0,27 1,05 ± 0,14
S5C
Suc, Glc, myo -инозитол 0,64 ± 0,30 0,63 ± 0,09 2,19 ± 0,69 2,19 ± 0,69
Suc, Glc 0,41 ± 0,11 0,19 ± 0,05 0,72 ± 0,03 0,57 ± 0,10 1,11 ± 0,03
myo . myo .19 ± 0,05 0,43 ± 0,17 0,36 ± 0,03 0,34 ± 0,08 0,79 ± 0,13
Без добавления 0,89 ± 0,69 0,09 ± 0,01 1,89 ± 0,75 1,89 ± 0,75 0,41 ± 0,02
Растение / Условия роста . Углеводы .
Сорбитол . Инозитол . Glc . Фру . Suc .
мкмоль г -1 свежий вес
SR1
Suc, Glc, мио -инозитол н.о. 4-a 1,08 ± 0,51 3,88 ± 2,91 4,02 ± 3,2 1,76 ± 0,47
Suc, Glc н.о. 0.50 ± 0,07 0,63 ± 0,24 0,43 ± 0,24 1,11 ± 0,05
myo -Инозитол н.о. 0,77 ± 0,08 1,72 ± 0,83 1,20 ± 0,16 1,29 ± 0,08
Без добавления н.о. 0,23 ± 0,02 0,44 ± 0,08 0,42 ± 0,27 1,05 ± 0,14
S5C
Suc, Glc, мио -инозитол 0.64 ± 0,30 0,63 ± 0,09 2,19 ± 0,69 1,08 ± 0,60 1,25 ± 0,07
Suc, Glc 0,41 ± 0,11 0,19 ± 0,05 0,72 0 1,11 ± 0,03
myo -Инозитол 0,19 ± 0,05 0,43 ± 0,17 0,36 ± 0,03 0,34 ± 0,08 0,79 ± 0,13 без добавления 089 ± 0,69 0,09 ± 0,01 1,89 ± 0,75 1,80 ± 0,42 0,41 ± 0,02
Таблица V.

Количество сахаров, мио-инозита и сорбита, выращенных в стерильных растениях SR1 и S5C на разных средах

Растение / Условия роста . Углеводы .
Сорбитол . Инозитол . Glc . Фру . Suc .
мкмоль г -1 свежий вес
SR1
Suc, Glc, мио -инозитол н.о. 4-a 1,08 ± 0,51 3,88 ± 2,91 4,02 ± 3,2 1,76 ± 0,47
Suc, Glc н.о. 0,50 ± 0,07 0.63 ± 0,24 0,43 ± 0,24 1,11 ± 0,05
myo -Инозитол н.о. 0,77 ± 0,08 1,72 ± 0,83 1,20 ± 0,16 1,29 ± 0,08
Без добавления н.о. 0,23 ± 0,02 0,44 ± 0,08 0,42 ± 0,27 1,05 ± 0,14
S5C
Suc, Glc, мио -инозитол 0.64 ± 0,30 0,63 ± 0,09 2,19 ± 0,69 1,08 ± 0,60 1,25 ± 0,07
Suc, Glc 0,41 ± 0,11 0,19 ± 0,05 0,72 0 1,11 ± 0,03
myo -Инозитол 0,19 ± 0,05 0,43 ± 0,17 0,36 ± 0,03 0,34 ± 0,08 0,79 ± 0,13 без добавления 089 ± 0,69 0,09 ± 0,01 1,89 ± 0,75 1,80 ± 0,42 0,41 ± 0,02
±
Растения / Условия роста . Углеводы .
Сорбитол . Инозитол . Glc . Фру . Suc .
мкмоль г -1 свежий вес
SR1
Suc, Glc, мио -инозитол n.d. 4-a 1,08 ± 0,51 3,88 ± 2,91 4,02 ± 3,2 1,76 ± 0,47
Suc, Glc н.о. 0,50 ± 0,07 0,63 ± 0,24 0,43 ± 0,24 1,11 ± 0,05
мио -Инозитол н.о. 0,77 ± 0,08 1,72 ± 0,83 1,20 ± 0,16 1,29 ± 0,08
Без добавления n.d. 0,23 ± 0,02 0,44 ± 0,08 0,42 ± 0,27 1,05 ± 0,14
S5C
Suc, Glc, myo -инозитол 0,64 2,19 ± 0,69 1,08 ± 0,60 1,25 ± 0,07
Suc, Glc 0,41 ± 0,11 0,19 ± 0,05 0,72 ± 0,03 0,57 ± 0,10 1.11 ± 0,03
myo -Инозитол 0,19 ± 0,05 0,43 ± 0,17 0,36 ± 0,03 0,34 ± 0,08 0,79 ± 0,13
без добавления 0,09 ± 0,01 1,89 ± 0,75 1,80 ± 0,42 0,41 ± 0,02

ОБСУЖДЕНИЕ

Tao et al. (1995) сообщили об экспрессии яблочной сорбитол-6-фосфатдегидрогеназы в табаке.Работа была сосредоточена на трансформантах с низким содержанием сорбита (до 0,45 мкмоль г -1 сырой массы), и фенотип этих растений был идентичен дикому типу. В повторных экспериментах мы получили большое количество независимых трансформантов, отличающихся накоплением сорбита в широком диапазоне, до 130 мкмоль г -1 сырой массы. Изменения фенотипа коррелировали с накоплением сорбита. Растения с низким содержанием сорбита (менее 2–3 мкмоль г -1 сырой массы) развивались нормально, но некротические поражения образовывались все чаще, когда сорбит накапливался в больших количествах.Повышенное образование поражений сопровождалось усилением серьезности нарушения роста, снижением или прекращением развития корней, а также низкой фертильностью или бесплодием.

Повреждения на незрелых листьях были неожиданным результатом экспериментов, направленных на изучение метаболической устойчивости табака к высокому накоплению полиола. Наши исследования накопления полиола в трансгенных растениях в основном касались защитной функции (функций), которую могут иметь осмолиты на основе углеводов (Tarczynski et al., 1993; Шен и др., 1997a, 1997b; Шевелева и др., 1997). Подобно растениям, накапливающим маннит или ононит (Tarzynski et al., 1993; Sheveleva et al., 1997), растения, накапливающие сорбитол, переносили как солевой стресс, так и засуху лучше, чем растения дикого типа, но этот эффект было трудно контролировать из-за задержка роста и влияние на развитие, характеризующее высокое накопление сорбита. В зависимости от количества сорбита в растениях абсолютная скорость фотосинтеза линии S5C в отсутствие стресса может быть менее 50% от таковой у контрольных растений.Однако скорость фотосинтеза снижалась меньше в S5C, чем в контроле SR1, когда растения подвергались стрессу добавлением 150 мМ NaCl (данные не показаны).

Heineke et al. (1992) предположили, что повышение осмотического давления в соке листьев могло вызвать образование повреждений после накопления чужеродного углевода в цитозоле. Однако измерения осмоляльности сока листа были идентичными для S5C и SR1 при приблизительно 400 мосмоль кг -1 . Однако общая осмоляльность может не отражать условия в разных компартментах.Сорбитол, вероятно, накапливается в основном в цитозоле и может, по крайней мере, частично исключаться из хлоропластов, митохондрий и вакуолей. Разница в осмотическом давлении между отделениями может вызвать метаболический дисбаланс. Накопление крахмала в самых молодых листьях растений с высоким содержанием сорбита (таблица III) может быть индикатором такого эффекта. Сорбитол в цитозоле может мешать экспорту углеводов из хлоропластов, и это может быть ответственным за увеличение содержания крахмала в этих листьях.Корреляция между количеством сорбита и частотой некроза ткани может указывать на причинную связь между осмотическим давлением и симптомами некроза. Нарушение целостности мембраны или измененный экспорт углеводов из пластид может привести к снижению фотосинтеза и изменению метаболизма в цитозоле, приводя в движение сигнальные события, которые в конечном итоге приводят к повреждениям.

Об образовании повреждений часто сообщалось как о защитной реакции на атаку патогенов (Walbot et al., 1983; Hahlbrock and Scheel, 1987). Биохимические и метаболические изменения после атаки патогенов включают накопление салициловой кислоты, каллозы и лигнина, синтез фенольных соединений, связанных с клеточной стенкой, биосинтез белков, связанных с патогенезом, накопление фитоалексина и перекисное окисление липидов (Hahlbrock and Scheel, 1987; Bowles , 1990; Yalpani et al., 1993; Greenberg et al., 1994; Baillieul et al., 1995). Основание для образования повреждений было замечено в возмущении системы убиквитина, изменении протонной перекачки, изменении концентрации гексозы или экспрессии гена VI CaMV, приводящей к гибели клеток (Takahashi et al., 1989; Беккер и др., 1993; Mittler et al., 1995; Herbers et al., 1996). Используя зонды для табачной каталазы, Cat1 (Schultes et al., 1994), секвенированного продукта ПЦР (Э. Шевелева, неопубликованные данные) и супероксиддисмутазы ( Sod3 , цитозольная супероксиддисмутаза Cu / Zn; Tsang et al. ., 1991), мы наблюдали увеличение транскриптов этих генов в S5C (не показано) по сравнению с табаком дикого типа, что, по-видимому, подтверждает взаимосвязь между образованием повреждений и экспрессией белков, связанных с защитой, в растениях, продуцирующих сорбит.Однако повреждения растений S5C в наших условиях роста не были вызваны абиотическими стрессами окружающей среды, старением или инфекцией патогенов в теплице, потому что у растений дикого типа, выращенных с вкраплениями растений, продуцирующих сорбит, никогда не возникало сопоставимых симптомов.

Некроз листьев и образование повреждений в отсутствие патогенов также наблюдались в результате нарушений в выделении углерода. Поражения, образовавшиеся на листьях трансгенного табака, экспрессирующие кДНК дрожжевой инвертазы, нацеленной на клеточную стенку растений (von Schaewen et al., 1990; Sonnewald et al., 1991). В результате активности инвертазы в клеточной стенке, Glc и Fru накапливались, что приводило к нарушению отношений источник-поглотитель, что затем ингибировало фотосинтез в зависимости от того, насколько сильно пострадала способность к экспорту Suc. Подавление фотосинтеза в исходных листьях подавляло рост, а на низкорослых листьях развивались некротические поражения. Herbers et al. (1996), сообщая об индукции системных симптомов приобретенной резистентности у табака с эктопической экспрессией инвертаз с различным направлением действия, указывают на чувствительность к гексозе как на причину образования повреждений.Авторы считают, что пороговая концентрация либо Fru, либо Glc ответственна за активацию генов белков, связанных с патогенами, в отсутствие патогенов. Накопление сахаров могло напрямую репрессировать гены, кодирующие фотосинтетические функции, и активировать гены, связанные с защитой. С другой стороны, измененные уровни гексоз могли повлиять на гексозокиназы и действовать как сигналы для Glc-опосредованной регуляции генов (Jang and Sheen, 1994; Jang et al., 1997), но это кажется маловероятным, поскольку сорбит (и другие полиолы) неизвестны. воздействовать на передачу сигналов гексозокиназы.

Мы показываем, что другое нарушение углеводного статуса, высокое накопление сорбита, приводит к эффектам, аналогичным тем, которые наблюдаются после эктопической экспрессии инвертазы. Однако симптомы, включая низкую активность фотосинтеза, образование повреждений, задержку роста и измененное соотношение Glc и Fru, развивались раньше, чем у табака, экспрессирующего инвертазу. Корреляция между повреждениями и ростом и количеством сорбита предполагает, что уровни углеводов лежат в основе фенотипа, но нарушения углеводов могут влиять на несколько различных путей.Во-первых, сорбитол-6-фосфатдегидрогеназа может влиять на скорость биосинтеза Suc, конкурируя за Glc-6-P, необходимый для активации Suc-P-синтазы. Во-вторых, гексозофосфаты будут не только служить субстратами для биосинтеза Suc, но и будут направлены на гликолиз и дыхание. Истощение пула гексозофосфата повлияет на оба пути и может изменить развитие стока. Фактически, трансформанты, в которых мы измерили самые высокие количества сорбита, были наиболее сильно ингибированы в развитии меристем корня и побега.В-третьих, UDP-Glc, а также myo -inositol являются важными предшественниками для биосинтеза клеточной стенки. Изменения метаболического баланса из-за изменения уровней Glc-6-P могут повлиять на растущие ткани. Кроме того, снижение пула Glc-6-P может влиять на синтез myo -inositol через l- myo -inositol-1-phosphate synthase. Наконец, дренирование пула Glc-6-P может изменить баланс сигнальных путей с участием киназ Fru и киназ Glc, или сорбитол-6-фосфат / сорбит может взаимодействовать с этими гексозокиназами.Альтернативно, когда поток от Glc-6-P к myo -inositol резко изменяется, могут быть затронуты пути передачи сигналов с участием инозитолфосфатов. Данные не позволяют провести различие между различными альтернативами, но эти производящие сорбит растения представляют собой экспериментальный материал, с помощью которого можно проверить эти гипотезы. Количество Glc и Fru увеличивалось в тех областях листа, которые начинали проявлять поражение, что, вероятно, влияло на экспрессию генов, связанных с фотосинтезом (и активацию белков, связанных с патогенезом), но мы считаем это увеличение поздним следствием первичный ущерб.

Насколько нам известно, обратная корреляция между количеством сорбита и образованием повреждений по сравнению с количеством myo -inositol ранее не сообщалась. У S5C и всех других протестированных линий высокий уровень сорбита неизменно коррелировал с низким мио -инозитолом. Растения, продуцирующие сорбит, не имели повреждений после добавления myo и -инозита (фиг. 4). О причинно-следственной связи также свидетельствует тот факт, что при солевом стрессе и во время засухи в табаке дикого типа увеличивается содержание myo и -инозитола (Шевелева и др., 1997). Это также наблюдается у растений, продуцирующих сорбит, которые показали меньшее образование повреждений при стрессе добавлением 150 мМ NaCl (данные не показаны).

Таким образом, введение нового фермента, генерирующего высокий поток C, в новый путь, происходящий из Glc-6-P, мы наблюдали нарушение в развитии. Причины метаболических и развивающих эффектов высокой продукции сорбита, по-видимому, двоякие: снижение потока C от Glc-6-P до myo -inositol и осмотический дисбаланс, влияющий на выделение или транспорт C.

Результаты позволяют сделать еще один вывод, а именно, что попытки метаболической инженерии синтеза осмолита могут достигать верхнего предела допустимой концентрации накапливающегося метаболита. Учитывая, что накопление метаболитов было изучено с точки зрения защиты от осмотического или ионного стресса, мы хотели изучить, как высокое накопление влияет на метаболизм растений. Накопление от низкого до умеренного, по-видимому, оказывает защитное действие, и, кроме того, важное значение имеет расположение клеток (Tarczynski et al., 1993; Шен и др., 1997a, 1997b). Индуцируемое, зависимое от стресса высокое накопление метилированного инозита, ононита, не вызывает сопоставимых поражений (Шевелева и др., 1997). Высокое конститутивное накопление, достигаемое здесь с помощью сорбита, может быть вредным. Сообщалось, что даже в случае умеренного накопления маннита рост трансгенных растений табака был медленнее, чем у растений дикого типа (Karakas et al., 1997). Большое количество метаболитов, по крайней мере, в случае сорбита, может нарушить метаболизм и развитие даже при нормальных условиях роста.На поток через основные метаболические пути может влиять высокое накопление продуктов, для которых трансформированные виды не были адаптированы. Хотя низкое конститутивное накопление может быть допустимым, лучшей стратегией, по-видимому, является индуцируемое накопление осмолитов (Шевелева и др., 1997).

БЛАГОДАРНОСТИ

Мы благодарим доктора Я. Канаяму (Университет Нагоя, Япония) за кДНК Stpd1 яблока. Мы благодарим доктора Д. Инзе (Университет Гента, Бельгия) за исследование супероксиддисмутазы табака, Кристину Михаловски за сборку генной конструкции, а также Пэта Адамса и Джейн Дугас Хафф за самоотверженную помощь.

Сокращение:

  • CaMV

ЦИТИРОВАННАЯ ЛИТЕРАТУРА

1

Отчетливая реакция клеток и организма на солевой стресс.

Физиология растительных клеток

33

1992

1215

1223

2

Анионообменное разделение и импульсное амперометрическое определение инозитолов из цветочных лепестков.

Анальный Biochem

214

1993

321

324

3

Производство и действие активных форм кислорода в фотосинтетических тканях.

Причины фотоокислительного стресса и улучшения защитных систем растений.

1994

77

105

Пресс для CRC

Лондон

4

Новый элиситор гиперчувствительной реакции табака: грибковый гликопротеин вызывает гибель клеток, экспрессию защитных генов, выработку салициловой кислоты и индукцию системной приобретенной устойчивости.

Завод J

8

1995

551

560

5

Измененный ответ на вирусную инфекцию растений табака, нарушенный в системе убиквитина.

Завод J

3

1993

875

881

6

Защитные белки у высших растений.

Annu Rev Biochem

59

1990

873

907

7

Совместимые растворенные вещества галофильных эубактерий: молекулярные принципы, водно-растворенное взаимодействие, защита от стресса.

Experientia

49

1993

487

496

8

Запрограммированная гибель клеток у растений: реакция, вызванная патогеном, активируется скоординированно с множеством защитных функций.

Ячейка

77

1994

551

563

9

Биохимические реакции растений на патогены.

Инновационные подходы к борьбе с болезнями растений.

1987

229

254

John Wiley & Sons

Нью-Йорк

10

Трансформация Arabidopsis thaliana геном codA для холиноксидазы: накопление глицинбетаина и повышенная устойчивость к солевому и холодовому стрессу.

Завод J

12

1997

133

142

11

Апопластная экспрессия дрожжевой инвертазы в картофеле. Влияние на фотосинтез, состав растворенных веществ в листьях, водные отношения и состав клубней.

Физиология растений

100

1992

301

308

12

Системная приобретенная резистентность, опосредованная эктопической экспрессией инвертазы: возможное восприятие гексозы в секреторном пути.

Растительная клетка

8

1996

793

803

13

Засухоустойчивость табака.

Природа

379

1996

683

684

14

Гексокиназа как сенсор сахара у высших растений.

Растительная клетка

9

1997

5

19

15

Чувствительность к сахару у высших растений.

Растительная клетка

6

1994

1665

1679

16

Нуклеотидная последовательность кДНК, кодирующая НАДФ-сорбитол-6-фосфатдегидрогеназу из яблока.

Физиология растений

100

1992

1607

1608

17

Соленость и засухоустойчивость маннитолаккумулирующих трансгенных растений.

Среда растительных клеток

20

1997

609

616

18

Сверхэкспрессия пирролин-5-карбоксилазы синтазы увеличивает продукцию пролина и придает осмотолерантность трансгенным растениям.

Физиология растений

108

1995

1387

1394

19

Глицин бетаин, осмотический эффектор в Klebsiella pneumoniae и других представителях Enterobacteriaceae.

Appl Environ Microbiol

46

1983

152

159

20

Скоординированная индукция запрограммированной клеточной смерти и защитных механизмов у трансгенных растений табака, экспрессирующих бактериальный протонный насос.

Завод J

7

1995

29

42

21

Обновленная среда для быстрого роста и биологических анализов с культурой ткани табака.

Физиологический завод

15

1962

473

497

22

Synechococcus sp.PCC7942, трансформированный Escherichia coli bet гены продуцируют глицин бетаин из холина и приобретают устойчивость к солевому стрессу.

Физиология растений

107

1995

703

708

23

Необычайно сильное стабилизирующее действие глицинбетаина на структуру и функцию комплекса фотосистемы II, выделяющего кислород.

Photosynth Res

44

1995

243

252

24

Повышение продуктивности трансгенного табака, накапливающего фруктан, при стрессе засухи.

Физиология растений

107

1995

125

130

25

Ген первичной листовой каталазы из Nicotiana tabacum и Nicotiana sylvestris .

Физиология растений

106

1994

399

400

26

Повышенная устойчивость трансгенных растений к окислительному стрессу за счет нацеливания биосинтеза маннита на хлоропласты.

Физиология растений

113

1997a

1177

1183

27

Маннитол защищает от окисления гидроксильными радикалами.

Физиология растений

115

1997b

527

532

28

Повышенная солеустойчивость и засухоустойчивость за счет продукции d-ононита у трансгенных животных Nicotiana tabacum L.

Физиология растений

115

1997

1211

1219

29

Роль активного кислорода в реакции растений на водный дефицит и высыхание.

Новый Фитол

125

1993

27

58

30

Активность совместимых растворенных веществ улавливать гидроксильные радикалы.

Фитохимия

28

1989

1057

1060

31

Трансгенные растения табака, экспрессирующие дрожжевую инвертазу в цитозоле, вакуоли или апопласте: мощный инструмент для изучения метаболизма сахарозы и взаимодействий приемник / источник.

Завод J

1

1991

95

106

32

Ген VI вируса мозаики цветной капусты вызывает подавление роста, развитие некротических пятен и экспрессию генов, связанных с защитой, в трансгенных растениях табака.

Мол Генет

216

1989

188

194

33

Синтез сорбита в трансгенном табаке с кДНК яблока, кодирующей НАДФ-зависимую сорбитол-6-фосфатдегидрогеназу.

Физиология растительных клеток

366

1995

525

532

34

Экспрессия бактериального гена mtlD в трансгенном табаке приводит к продукции и накоплению маннита.

Proc Natl Acad Sci USA

89

1992

2600

2604

35

Защита трансгенного табака от стресса путем производства осмолита маннита.

Наука

259

1993

508

510

36

Дифференциальная регуляция супероксиддисмутаз у растений, подверженных стрессу окружающей среды.

Растительная клетка

3

1991

783

792

37

Производство циклита в трансгенном табаке.

Завод J

4

1993

199

205

38

Экспрессия дрожжевой инвертазы в клеточной стенке табака и растений Arabidopsis приводит к накоплению углеводов и ингибированию фотосинтеза и сильно влияет на рост и фенотип трансгенных растений табака.

EMBO J

9

1990

3033

3044

39

Walbot V, Hoisington DA, Neuffer MG (1983) Болезненные поражения имитируют мутации. In T. Kosuge, CP Meredith, A Hollender, edds, Genetic Engineering of Plants. Plenum Publishing, New York, pp 431–442

40

Уровни эндогенной салициловой кислоты коррелируют с накоплением белков, связанных с патогенезом, и устойчивостью к вирусам в табаке.

Фитопатология

83

1993

702

708

Заметки автора

Copyright © 1998 Американское общество физиологов растений

Эта статья публикуется и распространяется на условиях Oxford University Press, Standard Journals Publication Model (https: // Academic.oup.com/journals/pages/open_access/funder_policies/chorus/standard_publication_model)

Услуги перевода с английского на русский от Елены Шевелевой, г. Брянск, Россия

Бесплатная рассылка новостей

Объявления
Елена Шевелева

Переводчик с английского на русский
Переводчик

Профиль зарегистрирован 25.01.2019
Последний раз профиль обновлялся 01 апр 2020

Резюме

Я носитель русского языка.

Моя минимальная ставка составляет 0,02 евро за исходное слово.

Но я предпочитаю работать с 0,03 евро за исходное слово.

И моя минимальная плата за документ составляет 5 евро.

Я получил диплом официального переводчика / лингвиста.

Работаю переводчиком с 2010 года.

Оказываю следующие услуги: Перевод.

На сегодняшний день я перевел более 1 000 000 слов.

Я использую следующие инструменты: SDL Trados, Memsource.

Я лучше всего работаю в следующих областях: бухгалтерский учет и аудит, реклама и связи с общественностью, бизнес / коммерция (общие), компьютерное программное обеспечение, косметика / красота, финансы / экономика, общее, правительство / политика, человеческие ресурсы, промышленность и технологии (общие). , Право (банковское и финансовое право), право (общее), право (контракты), менеджмент, производство, маркетинг / маркетинговые исследования, медицина (общее), SAP.

Я могу работать полную неделю, включая выходные.

Я не могу предоставить вам ссылки, извините …

Найдите больше переводчиков с английского на русский

Найти переводчиков для других языковых пар

Купить базу данных переводчиков-фрилансеров!

Ты переводчик? Зарегистрируйтесь здесь — бесплатно!

Вы владелец бюро переводов? Зарегистрируйте свою компанию — бесплатно!

Нужна переводческая работа? Кликните сюда!

Attn.Елена Шевелева — нажмите здесь, чтобы отредактировать этот профиль.

Attn. Елена Шевелева — Станьте участником всего за 8 евро в месяц (оплачивается в год)!

Профиль (ы) этого переводчика просматривали (просматривали) 353 раза

Просмотрите некоторые объявления и другой контент с сайта TranslationDirectory.com:

Влияние финансовых рисков на стоимость услуг бухгалтерского аутсорсинга

Анатолий Шевелев, Екатерина Шевелева, Елена Шевелева и Марина Бажанова

34-я конференция IBIMA: 13-14 ноября 2019 г., Мадрид, Испания

Аннотация:

Аутсорсинг — один из ключевых факторов повышения эффективности современного предприятия.В настоящее время все большее количество различных функций деятельности предприятия передается аутсорсерам, среди которых особое место занимает бухгалтерский и финансовый учет. Этот вид аутсорсинга (бухгалтерский аутсорсинг) характеризуется рядом проблем, таких как определение эффективности контрактных услуг, этические вопросы, договорные вопросы, среди которых одним из наиболее важных является договор ценообразования. Формирование цены договора бухгалтерского аутсорсинга имеет большое значение и обусловлено всеми, в том числе финансовыми, рисками.Целью исследования является разработка метода оценки стоимости договора бухгалтерского аутсорсинга с учетом влияния финансовых рисков. Учитываются финансовые риски аутсорсера и заказчика. Показано влияние рисков на окончательную оценку договора бухгалтерского аутсорсинга. На основе анализа влияния финансовых рисков на формирование цены договора бухгалтерского аутсорсинга определены ключевые факторы этого процесса. Процесс определения цены контракта на аутсорсинг бухгалтерского учета включает возникновение ситуаций прекращения контракта, возникающих в результате прекращения действия этого контракта.Предлагается методика определения стоимости контракта на аутсорсинг. Учитываются финансовые риски участников, а также внезапное расторжение договора. Разработан методический подход к формированию цены договора бухгалтерского аутсорсинга. Он основан на анализе финансовых рисков с учетом интересов участников

Трансляционный контроль белка Nrf2 при активации антиоксидантного ответа окислителями — Университет Аризоны

@article {b8fea84b970f4575b05fcb921aa15e74,

title = «Трансляционный контроль белка Nrf2 при активации антиоксидантного ответа окислителями Nf

«, аннотация

Связанный с E2 фактор-2 (Nrf2) является основным фактором транскрипции лейциновой молнии, который связывает и активирует элемент антиоксидантного ответа (ARE) в промоторах многих антиоксидантных генов и генов детоксикации.Мы обнаружили, что обработка H 2O2 вызвала быстрое повышение уровня эндогенного белка Nrf2 в кардиомиоцитах крысы. Полуколичественная или в режиме реального времени полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией не показала увеличения уровня мРНК Nrf2 при обработке h3O2. Измерения стабильности белка Nrf2 исключили возможность стабилизации белка Nrf2. Хотя ингибирование синтеза белка с помощью циклогексимида предотвращало повышение уровня белка Nrf2 с помощью h3O 2, ингибирование синтеза РНК с помощью актиномицина D не помогло.Измерения синтеза нового белка с включением [35S] метионина подтвердили, что h3O 2 увеличивает трансляцию белка Nrf2. Ингибиторы фосфоинозитид-3-киназы были способны подавлять индукцию белка Nrf2 под действием h3O2. Хотя h3O2 увеличивает фосфорилирование киназы p70 S6, рапамицин не может ингибировать H 2O2 от повышения уровня белка Nrf2. h3O 2 также индуцировал фосфорилирование фактора инициации трансляции эукариот (eIF) 4E и eIF2α в течение 30 и 10 минут соответственно. Ингибирование eIF4E с помощью небольших мешающих siRNA или увеличение фосфорилирования eIF2α салубриналом не влияло на повышение уровня Nrf2 с помощью h3O2.Наши данные представляют новый феномен быстрого начала реакции антиоксиданта / детоксикации за счет увеличения трансляции Nrf2 окислителями. Механизм, лежащий в основе такой стресс-индуцированной трансляции белков de novo, может включать в себя несколько компонентов трансляционного аппарата. » Qin M.} «,

год =» 2007 «,

месяц = ​​октябрь,

doi =» 10,1124 / моль.107.035360 «,

language =» English (US) «,

volume =» 72 «,

pages =» 1074-1081 «,

journal =» Molecular Pharmacology «,

issn =» 0026-895X «,

publisher =» Американское общество фармакологии и экспериментальной терапии «,

число =» 4 «,

}

Задержание московской милицией, нападение на журналистов, освещающих акции протеста

Вашингтон, округ Колумбия, 8 августа 2019 г. — Российские власти должны разрешить журналистам свободно и безопасно освещать акции протеста, заявил сегодня Комитет защиты журналистов после задержания нескольких журналистов и применения силы полицией против СМИ во время демонстраций в Москве. 27 июля и 3 августа.

По сообщениям СМИ, 27 июля и 3 августа десятки тысяч человек вышли на улицы Москвы, чтобы выразить протест против решения городской избирательной комиссии запретить независимым кандидатам участвовать в муниципальных выборах, намеченных на сентябрь. Согласно местным сообщениям, на каждой из двух демонстраций полиция задерживала более 1000 человек.

Во время обоих протестов полиция игнорировала аккредитацию журналистов для прессы, угрожая им и препятствуя их работе, повреждая их оборудование и насильственно задерживая их, согласно этим сообщениям и Союзу журналистов России — неправительственному профсоюзу, который составил краткое изложение событий. нарушений на своей странице в Facebook.

«Московская полиция должна обеспечивать безопасность прессы, освещающей протесты, а не препятствовать или задерживать журналистов просто за то, что они выполняют свою работу», — сказал директор программы CPJ Карлос Мартинес де ла Серна в Нью-Йорке. «Эта агрессия в отношении независимой российской прессы — явная попытка запугать журналистов и подвергнуть цензуре освещение событий».

Действия полиции против журналистов включали следующие инциденты 27 июля и 3 августа, задокументированные союзом журналистов, а также местными неправительственными организациями (НПО) и независимыми СМИ:

  • Полиция толкнула и ударила журналистку РосБизнесКонсалтинг (РБК) Елену Шевелеву 27 июля, сообщает независимый новостной сайт Mediazona .
  • 27 июля милиционеры ударили фотокорреспонденту Викторию Одиссонову с помощью «Новой газеты» по лицу и повредили ее фотоаппарат, сообщает « Новая газета ».
  • Журналисты независимых СМИ, задержанные 27 июля без предъявления обвинения: Сергей Дик, Deutsche Welle ; Сергей Хазов-Кассия, Радио Свобода; Роман Голованов, Комсомольская правда, ; Максим Кондратьев, Автозак Лайв; Павла Яблонского, Деревня ; Владимир Дергачев, РБК; Семен Красоткин, Частный корреспондент ; Евгений Рожков, Наш Север ; и Мария Светкова, Reuters, по сообщениям профсоюза.
  • Трое журналистов — Баларам Усов и Наталия Тишкевич из DOXA и Илья Азар из Новой газеты — которые были задержаны на непродолжительное время 27 июля, им предъявлены потенциальные обвинения по пункту 5 статьи 20.2 административного кодекса страны, которая касается нарушения установленного порядка совершения преступления. проведение публичного собрания, согласно отчетам профсоюза.
  • Журналисты, задержанные 3 августа: Елена Вавина из Ведомостей ; Владимир Роменский из TV Rain; Александра Семенова и Алексей Степанов из МБХ Медиа ; Алексей Мащенко из Два стула ; и Никита Павлюк-Павлюченко из Сноба.ru, по сообщениям профсоюза.

Кроме того, 27 июля полиция провела обыск в офисе независимого телеканала TV Rain и допросила главного редактора Сашу Перепелову в связи с прямой трансляцией протеста телеканалом Rain и The Moscow Times .

В ГУВД Москвы не ответили на электронное письмо КЗЖ с просьбой прокомментировать ситуацию.

Leave a comment
© Муниципальное общеобразовательное бюджетное учреждение гимназия № 1 г.Сочи, 2024